環境和食品中阿維菌素類藥物殘留量檢測方法研究進展

熊 巍，陶曉秋，張海燕

（四川省煙草質量監督檢測站，成都 610041）

0 引言

阿維菌素類(Avermectins，AVMs)農藥是從鏈霉菌的發酵產物中分離出來的一組新型、廣譜、高效、安全的大環內酯類殺蟲劑，對動植物的寄生線蟲和節肢動物均有高效的驅殺效果。AVMs類農藥主要的殺蟲成分是阿維菌素(Avermectin，AVM)，其作用機理為AVM與靶動物神經-突觸的特定位點結合，引起突觸后膜的谷氨酸控制的CL-離子通道開發，增加細胞膜對CL-離子的通透性，導致神經元休止點位超極化，神經傳導受阻，最終導致蟲體麻痹死亡[1]。AVM屬高毒性農藥，對大鼠的半致死量(LD50)為10 mg/kg，與有機磷農藥的毒性相仿。基于其毒性作用，歐美和日本等均制訂了AVMs的最高殘留限量。

AVMs類農藥主要包括AVM、多拉菌素(Doramectin，DOR)、伊維菌素(Ivermectin，IVM)、莫西菌素(moxidectin，MOX)、埃瑪菌素(Emamectin，EMM)、塞拉菌素(Selamectin，SEM)和乙酰氨基阿維菌素(eprinomectin，EPR)等，各種化合物的化學結構式見圖1。AVMs的相對分子質量大（如AVM，C48H72O14，相對分子量為873），難汽化，也無有效的氣相衍生化方法，因此，現有的檢測AVMs殘留量的方法主要基于液相色譜(high performance liquid chromatography，HPLC)，適宜的檢測器主要有熒光檢測器(fluorescence detection，FL)，定量核磁共振波譜(quantitative nuclear magnetic resonance spectroscopy，qNMR)、質譜(mass spectrometry，MS)和串聯質譜(tandem mass spectrometry，MS/MS)等。HPLC-FL和LC-MS/MS在AVMs殘留量檢測中應用廣泛，2種方法各有利弊，HPLC-FL具有檢測器靈敏度高，基質干擾少的特點，但是AVMS本身并無對稱共軛結構，不能直接采用FL測定，需要加入帶熒光基團的衍生化試劑衍生化，而衍生化反應的完成程度直接影響方法的準確性。從2010年開始，LC-MS/MS法在AVMs殘留量檢測中應用最為廣泛，該方法具有靈敏度高、選擇性強，無需HPLC基線分離就可對不同的AVMs進行準確定量，而基質干擾是LC-MS/MS法面臨的最大挑戰，尤其是對于動物組織和土壤等復雜基質的樣品，凈化過程顯得尤為重要。免疫法和化學發光法也應用于快速篩查食品或環境基質中AVMs殘留量，由于前處理簡單，經濟，在食品中AVMs殘留量的快速篩查分析中具有較強的應用價值。

圖1 AVMs藥物的結構式

本研究就2010—2020年國內外常用的不同樣品基質中AVMs殘留量檢測的前處理和分析方法以及樣品基質干擾對定量的影響等方面進行綜述，以期為AVMs殘留量相關研究提供技術支撐。

1 AVM的應用及在食品和環境中賦存狀態

AVMs類藥物既是獸用驅蟲劑，又是農用抗生素類殺蟲劑，還是家庭衛生用藥，也是驅除絲蟲的人用驅蟲劑。AVMs類藥物最初是應用于農牧業和衛生方面，現在AVMs類藥物作為有機磷類高毒性農藥的替代品在大農業上廣泛應用。其作為生物農藥，具有高效、低毒、高選擇性和環境友好等特點，受到農藥界的高度關注。目前，已根據AVM母核，合成出了上千種全新的化合物[2]，其中EPR被美國FDA認定為全程安全的獸用驅蟲劑。AVMs類藥物對寄生與動物體內的線蟲和節肢動物具有極強的驅殺作用，殺蟲活性極強，能夠將用藥劑量由mg/kg降低到μg/kg，目前已在多個國家登記應用[3-4]。近期的研究還表明，AVMs類藥物具有一定的抗腫瘤效果[5]，可應用于臨床濃度的IVM的抗腫瘤活性已經在體內和體外得以證實，這也表明IVM很有可能近期會被允許應用于癌癥病人的臨床研究。

AVMs類藥物具有光不穩定特性，且能夠被微生物分解為無活性化合物，從而使得AVMs類藥物在環境中的殘留量降低。AVMs類藥物在自然環境中與土壤成分緊密結合，較難被沖刷和下滲，又會使其成為環境中不流動的農藥。隨著AVMs類藥物用量的迅速增加，其對環境的影響不可避免，特別是對水體的影響較為嚴重，殘留會對浮游生物和水生生物產生嚴重影響[6-7]。由于AVMs對沉積物中搖蚊幼蟲等底棲動物毒性極強[8]，AVMs的大量使用已成為底棲無脊椎動物毒性的主要貢獻者之一[9]。

2 樣品前處理方法

2.1 樣品提取方法

樣品提取方法主要基于樣品基質的復雜程度和后續的分離檢測方法，對于液體基質的樣品，如水體、牛奶等，主要的提取方式主要選取液液萃取、分散液液萃取以及固相微萃取等方式，而對于固體基質的樣品，就需要先粉碎或者勻漿以保證樣品的均勻性，然后選取不同的萃取方式來提取樣品基質中的目標物，主要的萃取方式包括：有機溶劑萃取法、加速或加壓溶劑萃取法、超臨界萃取法和QuEChERS(quick,easy,cheap,effective,rugged and safe)法等。

2.1.1 有機溶劑萃取法 有機溶劑提取是目前AVMs殘留量檢測方法中最為常用的提取方法，主要應用的提取溶劑有甲醇[10]、乙腈[11]、丙酮[12]和環己烷等，溶劑提取的過程中還需要輔以超聲[13]、微波、振蕩[14]、渦旋或者均質等方式來增加溶劑提取的效率，縮短提取時間[15]。

2.1.2 加速溶劑萃取或加壓液體萃取 加速溶劑萃取(accelerated solvent extraction，ASE)或加壓液體萃取(pressurized liquid extraction，PLE)是在較高的溫度(50～200℃)和壓力(1000～3000 PSI)下用有機溶劑萃取固體或半固體的自動化方法。提高的溫度能極大地減弱由范德華力、氫鍵、目標物分子和樣品基質活性位置的偶極吸引所引起的相互作用力。液體的溶解能力遠大于氣體的溶解能力，因此增加萃取池中的壓力使溶劑溫度高于其常壓下的沸點。該方法的優點是有機溶劑用量少、快速、基質影響小、回收率高和重現性好。

ASE應用于動物組織中多種AVMs的測定，選取的萃取溶劑主要有甲醇、乙腈或者甲醇-乙腈[16]混合溶劑。PLE在環境樣品中AVMs殘留量測定中應用較多，主要源于在較高溫度和較高壓力的條件下，可以增加溶劑在土壤等復雜基質樣品中的提取效率，縮短提取時間[17]。目前PLE法已應用于水、不同類型的土壤樣品和表層沉積物[18]中AVMs的殘留量提取。

2.1.3 超臨界萃取法 超臨界流體萃取法是利用CO2在超臨界狀態下同時具有液體和氣體的性質，使用超臨界狀態下的CO2或者其他有機溶劑萃取食品和環境樣品中殘留量的AVMs化合物。Park等[19]報道了乙醇改性的CO2超臨界流體萃取土壤樣品中的5種VAMs，方法具有簡單、高效的特點，適用于環境樣品中VAMs同時測定。張婭婷等[20]報道了利用亞臨界丁烷流體分離鮮葉表面殘留的AVM，亞臨界丁烷流體能夠在保持茶葉物理結構和多酚氧化酶活性基本不變的情況下，有效分離茶葉中的AVM，這一研究也為亞臨界流體在去除天然植物農殘的應用中提供了實驗依據和技術支持。

2.1.4 QuEChERS法 QuEChERS法是由美國農業部Anastassiades等[21]發明的一種集提取和凈化于一體的農藥殘留量檢測的前處理方法，由于其對適應于多種基質中不同種類和極性的農藥殘留量的檢測，目前廣泛應于農殘和環境污染物分析領域[22-24]。方法主要分為樣品粉碎、單一溶劑提取、加入鹽類除水與破乳和加入萃取劑分散固相萃取，該方法具有適用范圍廣、回收率高、溶劑用量少和操作簡單等優點。

由于QuEChERS法中加入的硫酸鎂吸水會放熱結塊，從而會影響提取效率，降低熱敏感農藥的回收率，后續有較多的研究針對這些缺陷進行了改進，主要的方式有在樣品中加入冷水[25-26]來抵消硫酸鎂吸水產生的熱量。加入冷水的方式對于干基樣品如茶葉、土壤等需要加水浸泡的方法較為適用，而對于含水量較高的蔬菜、水果和肉類等適用性存在一定局限，并且少量冷水的加入不足以克服硫酸鎂的發熱結塊作用，基于此，后續有研究采取在鹽類加入前整體冷凍樣品和加入均質子的方式來減少結塊和發熱導致的方法回收率降低[27]。

由于樣品基質的不同，后續有研究對QuEChERS法中使用的提取溶劑乙腈進行了改進，以期獲得更好的提取效率，降低基質干擾。其中在胺化乙腈是最為常見的改進方式之一，通過在乙腈中加入不同體積的氨水有助于提高殘留AVMs的提取效率，增加回收率[28]，近期的一個研究也顯示在乙腈中加入三乙胺也會有助于動物源食品中AVM和IVM的提取[29]。

2.2 樣品的分離純化方法

食品和環境樣品的基質都較為復雜，不同基質的樣品主要的基質干擾物差異較大，如動物組織樣品的干擾物主要是大分子蛋白以及脂肪等[30]，而土壤樣品的基質干擾物主要是色素、有機質和鹽類等[31]，針對不同的干擾物選取不同的分離純化方式顯得尤為重要。最優的分離純化方法會在最大程度的降低樣品基質干擾的前提下，提高分析方法的準確性和精密度。目前報道的食品和環境樣品中AVMs殘留量檢測的前處理方法主要包括：液液萃取(Liquid-liquid extraction，LLE)[14]、固相萃取(Solid-phase extraction，SPE)、固相微萃取(solid-phase microextraction，SPME)、分散液相微萃 取 (Dispersive Liquid-liquid Microextraction，DLLME)和分散固相萃取(Dispersed solid phase extraction，dis-SPE)。近期也有采用定量核磁共振(Quantitative nuclear magnetic resonance，qNMR)用于純化有機樣品，測定生物基質樣品中的AVMs[32]。

2.2.1 液液萃取法 LLE是環境樣品AVMs殘留量檢測中較為常用的凈化方式之一，主要萃取溶劑有乙腈[33]、二氯甲烷[12]、乙酸乙酯[14]和正己烷[13]等。后續的研究者通過在提取溶劑中加入酸性或者堿性成分來增加提取效率，減少提取液的基質干擾。對于液態樣品或水分含量較高的樣品，如牛奶、蔬菜、水果或者肉類等，在LLE過程中加入鹽類，有利于破乳和鹽析，使得有機相提取層的基質更為干凈，效果更好，這一方式在后續的研究中大量應用。后期較多的研究者甚至將干基的固態樣品，如茶葉、煙葉及土壤等[34]，通過加水浸潤，然后鹽析破乳分層來增加提取效率，減少萃取液中干擾物。

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2.2.2 固相萃取法 SPE法是較為常用的樣品凈化方法，一般分為吸附和洗脫2個步驟，根據分析化合物和樣品基質性質的差異，可以選擇不同填料SPE小柱，最為常見的SPE小柱有C18柱，硅膠柱，離子交換柱和聚苯乙烯-二乙烯苯柱[35]等。在測定食品或環境樣品中AVMs殘留量過程中，SPE的應用也較為廣泛[36]。錢卓真等[11]應用堿性氧化鋁固相萃取柱和LC-C18固相萃取柱串聯凈化石斑魚血漿、肌肉組織、肝臟組織萃取液，用于測定石斑魚中AVMs藥物多殘留及食用安全風險評估。近期，張振東等[10]評價了EPR藥動學前處理中2種SPE柱的凈化、萃取效果，顯示C18柱對EPR的萃取效果更理想。

特殊的SPE小柱有助于增加柱子對目標成分的保留，起到更好的凈化效果，其中免疫親和柱的使用較為廣泛。Li等[37]建立了免疫親和柱分離純化凈化生物基質樣品，準確測定ABA 1a含量，該方法具有萃取效率高，結果準確的特點。免疫親和SPE小柱的應用可以選擇性的吸附目標分析物，有效的降低基質干擾，提高了方法的準確性，但是免疫親和柱的局限在于只能對一種或者一類特定的成分具有較好的吸附性，而多余多種分析化合物，特別是不同種類的分析物的應用存在較大局限。分子印跡聚合物作為固相填料的SPE柱有助于專一性的吸附保留目標分析物，最大程度的凈化樣品基質，從而使得方法的準確度和重復性更好。

近年來，可重復使用的整體SPE柱的出現使得在線SPE的前處理方式變得較為容易，方法主要通過六通閥切換的方式先在線凈化樣品，切換后將凈化后的樣品導入儀器分析[38]。其中最為關鍵的是整體SPE萃取柱，目前較為常用的SPE整體柱有疏水性整體柱[39]、Hysphere resin C18柱[29]和介孔性整體柱[38]，分別用于除去水溶性雜質和大分子蛋白等雜質。目前，在線SPE方法已應用于測定牛肝[40]、豬肉[29]、牛肉[29]、香腸和土壤[41]樣品中AVMs殘留量的測定，凈化效果良好。與傳統的LLE方法相比，SPE方法的優勢主要有有機溶劑消耗少、萃取時間短、不易乳化且回收率較好。

2.2.3 固相微萃取法 SPME技術是一種較好的替代傳統的前處理方法的技術，其主要的優點有快速、簡單、高效、無需溶劑并且能夠與多種分離方法結合使用。SPME主要通過涂有固定相的熔融石英纖維來實現采樣、萃取、濃縮樣品，提高了前處理效率，縮短了分析時間，與SPE的原理不同，SPME無需將樣品基質中的目標分析物完全萃取出來，只需目標分析物在固定相和水相之間達到一個動態平衡。

SPME也已應用于食品和環境基質中AVMs殘留量的測定，Teixeira等[42]以聚（1-乙烯基咪唑-三羥甲基丙烷三甲基丙烯酸酯）分子印跡化合物作為固定相的固相微萃取提取槍頭，成功應用于提取水和水果中的AVMs化合物。Florez等[43]應用聚吡咯作為自組裝管尖的固定相，應用于萃取和濃縮牛奶中的多種獸藥殘留。You等[44]利用磁性多壁碳納米管作為支撐材料，將磁性分子印跡聚合物聚合于碳納米管中，用于提取和純化魚肉樣品中殘留的AVMs化合物。雖然，SPME已經應用于食品基質中殘留的AVMs化合物的提取與凈化，但其主要應用于液體基質中殘留的AVMs化合物的提取，對于復雜的土壤和生物基質樣品的應用較少。

2.2.4 分散固相萃取 Dis-SPE是一種快速樣品處理技術，在多種化合物的分析檢測中都有應用[45]。這種方法主要通過在液體樣品中加入固相吸附劑用以分離純化復雜基質樣品中的多種分析物。Dis-SPE在不同基質中多種農藥殘留量的分析中多有應用，選取的固相吸附劑包括：PSA，C18，GCB，MWCNTs，PEP-2，Al2O3，Florisil，PVPP和磁性吸附劑等[46]。Dis-SPE的另一優勢在于省去了后續的沉淀、離心和過濾等可能會降低方法準確性的步驟。Dis-SPE在AVMs的測定方法的樣品凈化中已有應用[47]。Whelan等[48]在牛奶中AVMs的測定方法中應用Dis-SPE方法凈化樣品基質，樣品經乙腈提取，鹽析液液分配后，加入分散萃取劑凈化萃取液，然后將萃取液濃縮于二甲基砜中進行分析測定，結果顯示該前處理方法能夠有效的提取凈化牛奶樣品中的AVMs分析物。

2.2.5 其他萃取方法 DLLME技術是近年來發展起來的一種新型樣品前處理技術，相當于微型化的液液萃取，是基于目標分析物在樣品溶液和小體積的萃取劑之間平衡分配的過程[49]。DLLME技術具有簡單快速、環境友好和成本低廉等特點，在食品和環境樣品的前處理分析中應用廣泛。近期，DLLME技術也應用于環境基質中AVM的殘留量測定，張偉等[50]應用DLLME技術凈化水體樣品，測定了樣品中的AVMs殘留。

3 AVMs藥物殘留量的檢測方法

表1列出了食品和環境樣品中AVMs殘留量檢測方法使用的分析儀器，最為主流的分析儀器是基于HPLC技術以及HPLC-MS/MS技術。ELISA和化學發光免疫法(Chemiluminescent immunoassay，CLIA)在食品樣品中AVMs殘留量的快速篩查分析中也有應用，由于其操作簡便、結果可信，可滿足中國市場和進出口食品檢測需要。

3.1 高效液相色譜法

HPLC-UV常作為化學分析實驗室的標準配備儀器，適合于方法的推廣與應用，然而UV檢測器也存在靈敏度較低、選擇性不高、易受干擾等缺點。Florez[43]開發了一種經濟、簡單、易于操作的利用HPLC-UV測定牛奶中AVMs殘留量的方法，方法選取了固相微萃取方式提取與凈化樣品基質，HPLC-UV分離測定，方法中IVM的LOD達到(21.51±2.94)ng/mL；近期，覃國新等[52]也建立了UPLC-UV測定甘藍和橙子中的AVMs殘留，樣品經乙腈提取，混合使用PSA和C18基質分散凈化劑進行凈化，AVM在橙子和甘藍中的LOD分別為0.0160 mg/kg和0.0109 mg/kg。

HPLC-FL具有靈敏度高、選擇性強的特點，但是其檢測前需要對樣品進行衍生化，選取的衍生化試劑主要有三氟乙酸酐(trifluoroacetic anhtdride，TFAA)和N-甲基咪唑(1-methylimidazole，NMIM)等[53]。由于環境樣品中AVMs的濃度不確定，若萃取液中AVMs的濃度過高，可能就會導致衍生化過程不完全，降低方法的準確度[13]，此外，熒光衍生化過程對樣品的凈化效果要求嚴格，若有微量的水分或光的存在也會導致衍生化失敗，因此實驗過程必須保證避光且完全無水的狀態。

近年來，HPLC結合qNMR也應用于AVMs的測定，Hou等[54]建立了HPLC-qNMR法測定商業配方產品中的AVB1a，該方法選取氘代氯仿作為溶劑，LOD達到0.009 mg/mL。最近，Zhang等[32]報道了離線的內標回收率校正-HPLC-qNMR用于測定AVM B1a，該方法選取定量核磁共振(qNMR)純化有機樣品。

3.2 酶聯免疫法

近年來，酶聯免疫法也應用于食品和環境樣品中AVMs殘留量的測定。早在2010年，間接競爭ELISA法已應用于測定肝臟中的ABM、IVM和EPR殘留量，方法的LOQ能定達到1.06 ng/mL[55]。后續研究將ELISA法應用于牛奶中的多種AVMs化合物的快速檢測，樣品經有機溶劑提取后，無需純化過程直接測定[56]。近期，在國內商品化的ELISA檢測試劑盒已經廣泛應用于雞肉、雞肝[57]、牛奶[58]、蔬菜[59]和牛肉[60]等動植物源食品中AVMs殘留量的快速檢測，并且該方法與大型儀器的檢測數據比對結果良好，可滿足食品中AVMs殘留量快速檢測的需要。

3.3 化學發光免疫法

化學發光免疫法檢測牛肝、牛肉中AVMs藥物的殘留。黨娟等[61]自主研發了化學發光免疫試劑盒用于牛肝、牛肉樣品中IVMs藥物殘留量的測定，方法的檢出限范圍為1.463～1.392 ng/kg，準確度較好，這種方法與液相色譜-質譜法檢測實際樣品的陰、陽性判斷結果一致，可滿足現場快速檢測動物組織中AVMs藥物殘留的需要。Crooks等[62]建立了解離增強鑭系元素的熒光免疫分析法(dissociation enhanced lanthanide fluoroimmunoassay，DELFIA)用于測定牛奶中的AVMs殘留量，3種AVMs的檢出限達到4.6 ng/mL，日內和日間精密度分別為11.6%和15.8%。

3.4 液相色譜-串聯質譜法

由于LC-MS/MS的高靈敏度與高選擇性，使得直接分析復雜基質中低含量的AVMs成為可能。適用的樣品基質：蔬菜水果[63]、水產品[28]、肉類[64-65]、奶及奶制品[43]和水[50]、水體沉積物及土壤[66]等環境樣品。

報道的LC-MS/MS測定食品和環境基質樣品中AVMs殘留量的方法中，色譜柱的固定相基本都是基于C18的反相色譜柱[63]，主要的區別在于是否封端，或者采用何種鍵合基團封端。流動相的選取也是在液質中應用較多的甲醇或乙腈-水相體系，各個方法略有不同的是會在有機相和水相加入0.1%～0.2%的甲酸[63]、0.1%NH4OH[39-40]或者5～10 mmol/L乙酸銨[29,41]用以調節流動相的pH，增加離子源的電離效率，早期的LCMS/MS系統由于色譜柱的選取多為4.5 mm柱徑的色譜柱，流速設置多為1 mL/min，介入串聯質譜后往往需要先經過分流以減少流量。隨著小柱徑(2.1 mm)色譜柱的應用以及電噴霧離子源技術的改進，現有的LC-MS/MS系統無需分流，流速的設置一般將為0.25～0.5 mL/min[40]，樣品的進樣體積范圍為 5～20 μL[28,36]，由于在線SPE-LC-MS-MS系統進樣后涉及凈化過程，需要較大的進樣體積，且不同的方法使用的定量環的體積差異較大，一般為50～250 μL[41]。由于小粒徑填料色譜柱優異的分離度與塔板數，在WATERS開發出耐高壓的亞微米粒徑的UPLC色譜柱后，UPLC-MS/MS應用于蔬菜[63]、奶粉[67]和中草藥[68]中AVMs殘留量的測定，樣品的分析時間顯著縮短，進樣量可以進一步的縮小至1～2 μL[63]。

大氣壓電離離子源是LC-MS/MS系統中最為常用的離子源，ESI源在AVMs殘留量測定的方法應用最為廣泛，主要選取ESI+[36]和加熱電噴霧離子(HESI+)源[28]，由于軟電離離子源ESI的使用，使得LC能夠直接將樣品引入串聯質譜進行測定，主要的串聯質譜儀有三級四級桿質譜[40]、QTrap[69]、和高分辨質譜[70]等。

基于LC-MS/MS的檢測方法具有靈敏度高、選擇性強的優點，適合于復雜基質如動物源食品和土壤樣品中的AVMs殘留量的測定，并且已經成為主流的分析儀器。而LC-MS/MS的儀器較為昂貴，且LC-MS/MS系統的養護費用都較高，有些實驗室難以承受，這也是LC-MS/MS方法難以全面普及的原因。

4 定量分析和基質效應

色譜和質譜技術聯用能夠提供穩定、可靠的測定食品和環境基質中痕量AVMs殘留量的方法，但是由于食品和環境基質，尤其是動物源食品和土壤基質的復雜性，使得基質干擾物與目標分析物的緊張作用會嚴重影響方法的專一性和選擇性。通過優化方法，能夠降低或者清除方法的基質干擾。目前，最為有效的降低樣品基質效應的方法為一一對應的同位素內標定量法，然而，同位素內標非常昂貴，因此，大量的研究者選取了其他的降低樣品基質效應的方法。

除同位素內標法外，最為通用的有效降低樣品基質效應的方法為空白基質匹配標準曲線法。表1列出的AVMs殘留量檢測方法中，多數都使用了基質匹配標準曲線的方法[70-71]。如Qin等[23]利用基質匹配標準曲線定量測定典型動物食品基質中的AVMs殘留量，在5～500 μg/kg的線性范圍內，各個化合物的相關系數大于0.998。在使用基質匹配標準曲線的檢測方法中，可以選擇加入內標如甲氨基阿維菌素苯甲基鹽[13]和羅紅霉素[16]來消除樣品前處理或者儀器分析過程中引入的誤差。氘代內標雖然能夠更好的消除基質效應，而由于氘代AVMs合成較為困難且價格非常昂貴，導致未見應用其作為內標定量AVMs殘留量的檢測方法。

表1 近期報道的食品和環境樣品中AVMs藥物殘留量分析方法

續表1

5 展望

過去10年，研究人員建立了大量的食品和環境基質樣品中AVMS的殘留量的檢測方法，其中，最為常用的提取溶劑為乙腈，固相萃取和基質分散固相萃取是應用較多的樣品凈化方式，QuEChERS及其改良方法是最受歡迎的前處理方式，LC配備三級四級桿串聯質譜是最為常見的多種AVMs檢測儀器。近10年來，食品和環境基質樣品中AVMS的殘留量的檢測方法呈現出以下發展趨勢：（1）檢測方法由單指標測定轉向多個指標同時檢測方法的開發；（2）更注重方法的簡便與環保，注重減少有機溶劑的用量；（3）QuEChERS為最受歡迎的前處理方法，大量的方法基于此進行改良與創新；（4）色譜技術的進步，尤其是亞微米粒徑的UPLC柱的使用使得方法的分析時間縮短到10 min以內，大大增加了檢測通量；（5）在線前處理方式的使用能夠節省大量人力，減少人為誤差，提高了方法的重復性和穩定性；（6）單指標的快檢方法具有一定的應用市場，部分實驗室關注于開發與應用此類方法；（7）LC-MS/MS設備的逐漸普及使得相應的檢測方法成為主流。

目前，雖然已經建立大量的AVMS的殘留量的檢測方法，這些方法也存在以下局限性：（1）90%的方法都使用外標法定量，對操作條件的穩定性要求較高；（2）雖然有極少文獻選取單一的內標法定量，但是對于降低復雜基質樣品（動物組織和土壤）帶來的基質干擾效果不明顯，一一對應的同位素內標定量才是最優選擇；（3）主流檢測儀器LC-MS/MS受基質干擾嚴重，需要選擇專一性更好的如MIP固相萃取技術等前處理方式。針對現有方法可能的局限性，需要針對各個AVMs，開發和合成出經濟適用的同位素內標；合成經濟性和適用性更好的MIP-SPE小柱或MIP分散萃取材料；新儀器如納流LC-MS/MS、合相色譜-MS/MS和LC-高分辨質譜的使用也會顯著提升復雜基質中痕量AVMs殘留分析的準確性。此外，ELISA，CLIA和免疫層析法等快速檢測技術由于其前處理簡單、不受實驗室條件限制，在食品中AVMs殘留的快速篩查以及環境樣品的野外分析中具有較大的應用前景，如何開發出操作簡便、結果可信、價格低廉的快速檢測方法與設備成為其發展的關鍵。