血站HBsAg反應性樣本的ELISA與PCR法檢測結果的相關性

【摘要】目的：分析血站應用ELISA和PCR檢測HBsAg反應樣本在結果方面的聯系。方法：選取2020年1月～2021年1月血液樣本31203份，進行ELISA檢測與PCR檢測，比較檢測結果。結果：ELISA雙試劑檢出28份，PCR在此基礎上又檢出11份，有效提高用血安全。與單試劑檢測相比，雙試劑陽性靈敏度較高（P<0.05），聯合PCR檢測后檢出率高于ELISA雙試劑檢測。結論：血液篩查中應用ELISA時，試劑種類不同檢測精密度存在差異，雙試劑檢測更易陽性確診，但聯合應用PCR檢測可進一步提高HBV-DNA的漏檢風險，確保用血者安全。

【關鍵詞】血液篩查;乙肝感染;血站;ELISA檢測;PCR檢測;HBsAg

【中圖分類號】R446.6 【文獻標識碼】A 【DOI】10.12332/j.issn.2095-6525.2021.15.223

前言

HBsAg即乙肝表面抗原，在進行血液乙肝病毒（簡稱HBV）感染篩查時通常可進行HBsAg反應性樣本檢測，從血液樣本中篩選出HBV感染樣本，促進血站安全供血。ELISA是酶聯免疫吸附檢測，PCR即聚合酶鏈式反應。乙肝是高發性公共衛生問題，相關調查顯示，HBV感染人群已超3.5億，其中約有1億為國內患者。據不完全統計，當前國內HBV攜帶率>8%[1]。對HBV標志物即HBsAg進行科學檢測，對乙肝感染防控意義重大。機體免疫反應變化可能影響ELISA結果可靠性，PCR對HBV復制數量靈敏度較高，可促進精準檢驗。本文從2020年1月～2021年1月血站血液樣本中選取31203份，說明ELISA、PCR檢測方法，分析其結果相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020年1月～2021年1月31203份血液樣本，根據所用試劑分組檢驗結果資料，A初檢：試劑為北京萬泰試劑，B復檢：試劑為廈門新創試劑，C：PCR選用上海浩源試劑。性別：男/女=18742/12461，年齡（18～54）歲，平均（35.79±6.42）歲。資料可予分析（P>0.05）。

1.2 方法

全部樣本實施HBsAg ELISA檢測，進行試劑檢測后分析檢測結果。陽性確診：初檢、復檢顯示S/CO不低于1;待查：單試劑檢測時顯示S/CO不低于1，同時可見單試劑（0.7～1）區間。對于待查樣本，實施雙試劑雙孔復檢。陽性反應歸為不合格樣本。ELISA陰性標本做PCR檢測，ELISA反應性標本不做PCR檢測。

1.3 觀察指標

血清學檢測：實施HBsAg ELISA檢測，分析陽性率。

HBV-DNA檢測：使用PCR法實施HBV- DNA檢測，比較HBV-DNA檢測、ELISA檢測結果。

1.4 統計學方法

以SPSS 24.0分析HBsAg反應性樣本數據，計量資料以“均數±標準差（x±s）”表示，t檢驗，計數資料（檢測精度）以率（%）表示，x2檢驗，P<0.05差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血清學檢測

雙試劑檢測顯示為HBsAg陽性28份，陽性率為0.09%（28/31 203）。其中雙試劑皆顯示陽性為15份，單試劑顯示陽性13份;雙試劑顯示待查2份，單試劑顯示待查45份。檢出率情況如下（見表1）。

2.2 HBV-DNA檢測

ELISA雙試劑陽性28份，經PCR檢測另行檢出陽性11例，總計檢出陽性病例39例。ELISA雙試劑靈敏度為71.79%（28/39），漏檢率為28.21%（11/39）。該數據表明，聯合PCR檢測有效降低了漏檢率，促進HBV感染者陽性檢出。ELISA單試劑陽性檢出13份，靈敏度為33.33%（13/39）。ELISA雙試劑待查2份，PCR陽性檢出0份，占比為0.00%（0/28）。比較PCR檢測在4種檢測方法中陽性檢出率，可見雙陽性試劑+PCR檢測>雙試劑陽性>單試劑陽性>（P<0.05）。

3 討論

本研究顯示，PCR在不同ELISA檢測試劑應用情況下陽性率不同。該數據說明，ELISA試劑存在質量差異，檢測精密度不同。經分析，試劑制作中所用材料不同，組合工藝各異，純度標準也不同，因而血站在使用ELISA試劑時應嚴格控制采購質量，優選重復性好的試劑，同時注意雙試劑互補。在實際檢測前，應測試應用精密度，并對重復性參數進行科學評價。除此之外，應在確認采購的試劑之外備選2種試劑，當實際檢測出現異常數據時，及時對ELISA試劑進行更換，實施精準檢測。

分析ELISA和PCR結果相關性，可知單試劑待查血樣中含有符合性。分析檢測數據和后續追蹤結果，可知待查樣本可能出現假陰性樣本。ELISA待查樣本存在傳染性風險，在使用血液制品時可能造成乙肝傳播。待查弱陽性成因是乙肝感染初期抗原含量較少，此時HBV基因可能發生突變導致陽性反應隱匿。在樣本監控中，應監控S/CO值，當其出現增高趨勢時，應加強乙肝預防。所以要聯合PCR技術檢測標本，減少標本的漏檢風險。因免疫異常、溶血和檢驗技術、檢驗所用試劑質量影響，可能引起假陽性。通過ELISA篩查可促進乙肝輸血傳播控制，促進安全供血[2]。

綜上所述，為提升HBsAg檢測可靠性，在進行ELISA檢測時應科學控制待查范圍，積極復檢或者進行實驗驗證，促進精準檢測。同時，免疫學檢測應與DNA檢測相結合，綜合技術應用，降低檢測誤差。此外，應完善追蹤制度，促進后期確認，提高血液質量，對血液技術性浪費進行有效控制。

參考文獻：

[1]張毓，田豐，孫國棟等.HBV相關免疫學指標與核酸檢測HBV DNA的關聯分析[J].醫學動物防制，2021，37（01）：39-41.

[2]陳少彬，何子毅，陳慶愷等.ECLIA常規應用于獻血者血液HBsAg檢測的結果分析[J].臨床輸血與檢驗，2019，21（04）：383-386.

作者簡介：范瓊玉 （1994-9），女，漢 ，山西省長治，檢驗師， 研究方向：PCR實驗室。