動物用中藥飼料添加劑的抑菌和毒理學試驗

俸海刀

（柳州市動物園管理處，廣西 柳州 545005）

動物園養殖的動物種類多、數量多，動物園人員流動量大，動物飼養管理難度大，因此給各種動物疾病的傳播創造了條件。抗生素和化學合成類藥物雖然在防病治病方面發揮了巨大作用，但是也要看到這類藥物不恰當使用帶來的危害，如疾病的耐藥性不斷增強，殘留的抗生素污染養殖場地環境等。尤其是動物園養殖了很多瀕危野生動物，抗生素和化學合成類藥物的不當使用，可能導致畸形胎、流產等現象發生，加大瀕危動物的繁育難度。因此需要尋求有效的抗生素替代物，提高動物園動物的養殖成績[1-15]。考慮動物園動物種類多、病因多的因素，因此在設計抗生素替代物時，需要滿足廣譜、高效、無毒、低毒的特點。中藥具有益氣養血、固本培元等功效，且綠色環保，筆者依據中藥配伍的原理，配制兩組中草藥添加劑，用其前期提取液進行了抑菌和毒理試驗，以期為動物的健康養殖提供參考[1-15]。

1 材料與方法

1.1 中藥飼料添加劑前期提取物制備

配制中草藥飼料添加劑前期提取液，A組中藥松針、紫蘇籽、泡桐花、黃精、韭菜子、淫羊藿、東革阿里按照質量比24∶20∶12∶15∶12∶10∶10組方，B 組中藥黨參、黃芪、當歸、黃芩、梔子、淫羊藿、牛膝按照質重量22∶17.5∶10∶12.5∶10∶8∶8組方。

按照A 組B 組的組方進行藥材的挑揀、清洗、干燥、混合粉碎，然后加沸水攪拌成糊狀中藥粉，凍融，經過3次醇提，合并濾液，除乙醇后再次濃縮，至相對密度1.18，即得試驗所用中草藥飼料添加劑前期提取液[16]。

1.2 試驗動物和試驗儀器

試驗動物為均重20 g的成年小白鼠，由廣東江門一號生態園提供；試驗所需的器具為牛津杯、培養皿、低速臺式水平離心機、低溫冰箱、電熱恒溫水浴箱、顯微鏡等，均購于深圳市泰潤儀器設備有限公司。

1.3 抑菌試驗

1.3.1 藥敏試驗

將培養皿滅菌后分成6個扇區，在超凈工作臺中，用經酒精燈火焰滅菌的接種環挑取適量大腸桿菌、沙門氏菌、巴氏桿菌和副豬嗜血桿菌4種細菌培養物，以劃線方式將細菌涂布到平皿培養基上。將牛津杯內加入100 μL 藥液按順序放入6 個扇區中央，37 ℃下培養24 h，測量抑菌圈直徑。

1.3.2 最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）的測定

采用10 倍稀釋法及2 倍稀釋法，參考黃亞東等[16]的方法進行最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）的測定。

1.4 毒理學試驗

1.4.1 急性毒性試驗（LD50的測定）

設4 個劑量組，劑量分別是10000 mg·kg-1、20000 mg·kg-1、40000 mg·kg-1、80000 mg·kg-1，同時設立1個空白對照組。每組有10只小白鼠，連續給藥1周，每天觀察小白鼠精神狀態、食欲和飲水情況、中毒情況，并記錄白鼠的死亡數目[17-18]。

1.4.2 蓄積毒性試驗

設4個劑量組（劑量分別為1000 mg·kg-1、2000 mg·kg-1、4000 mg·kg-1、8000 mg·kg-1）和1個空白對照組，灌胃給藥，連續給藥3 周，停止給藥后再觀察1 周，在4 周內每天觀察小白鼠精神狀態、食欲和飲水情況、體重情況以及中毒情況，并記錄白鼠的死亡數目[19]。

1.5 數據處理及分析

試驗結束用SPSS 10.0 軟件， 采用one- way ANOVA 進行統計分析，并進行Duncan’s 多重比較。結果用“平均數±標準誤”表示。

2 結果與分析

2.1 抑菌試驗效果

2.1.1 抑菌圈直徑

抑菌圈直徑測定結果見表1。

表1 抑菌直徑 mm

由表1 可知，2 組提取液均有一定的抑菌作用，從大腸桿菌、沙門氏菌、巴氏桿菌和副豬嗜血桿菌4 個抑菌圈直徑可以看出，A 組分別比B 組高出3.95 mm、2.35 mm、0.35 mm 和2.6 mm，說明A組提取液的抑菌效果強于B組提取液，其中A組大腸桿菌、沙門氏菌和副豬嗜血桿菌3個抑菌直徑明顯高于B組，差異顯著（P＜0.05）。

2.1.2 MIC和MBC

MIC和MBC測定結果見表2。

表2 MIC和MBC測定結果 mg·mL-1

由表2可知，2組中藥提取液的MIC和MBC 都較為理想。對比發現，除了巴氏桿菌兩組的MIC和MBC 差異不顯著外，試驗A 組在大腸桿菌、沙門氏菌和副豬嗜血桿菌的MIC 和MBC 均明顯優于試驗B組，差異顯著（P＜0.05）。

2.2 毒理學試驗

2.2.1 急性攻毒試驗

在急性攻毒后1周時間內，試驗小白鼠的精神狀態正常，即使在灌服最大劑量80000 mg·kg-1中草藥提取液后，也沒有出現任何中毒現象。因而無需測定半數致死量，即LD50＞80000 mg·kg-1。急性攻毒試驗結果表明本試驗所設計的動物用中草藥飼料添加劑是屬于無毒類物質。

2.2.2 蓄積毒性試驗

在蓄積毒性試驗給藥3 周后，2 個試驗組的小白鼠的精神狀態，采食和飲水等情況均表現正常，也未出現中毒情況，停止給藥1周后，小白鼠的精神狀態、采食和飲水等情況均表現正常，見表3。

表3 蓄積毒性試驗結果 g

由表3 可知，給藥3 周后，各劑量組與空白對照組相比，在試驗初始重、結束重和平均增重方面均無明顯差異（P＞0.05）。

3 結 論

本試驗所設計的中藥提取液具有較好的抑菌（大腸桿菌、沙門氏菌、巴氏桿菌、副豬嗜血桿菌）殺菌作用，無毒副作用，在動物飼養過程中可以作為中藥添加劑使用。