氣相色譜法同時測定潔白膠囊中丁香酚、土木香內酯及異土木香內酯含量

張傳平，王 巍

（重慶市涪陵食品藥品檢驗所，重慶 408000）

潔白膠囊由訶子、丁香、土木香、寒水石（平制）等14 味中藥組方，具有健脾和胃、止痛止吐、分清泌濁的功效，臨床多用于治療脘腹脹滿、胃脘疼痛、消化不良、嘔逆泄瀉、小便不利。土木香具有健脾和胃、行氣止痛及安胎功效［1］，為該方君藥，現行潔白膠囊標準中尚無其質量控制項。本研究中以氣相色譜（GC）法同時測定潔白膠囊中丁香酚、土木香內酯及異土木香內酯的含量，為該制劑質量標準的完善提供參考。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

GC－2010Plus 型氣相色譜儀（日本Shimadzu 公司）；XPE205 型十萬分之一電子分析天平（瑞士Mettler Toledo 公司）；KQ－500 型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

潔白膠囊（寧夏多維藥業有限公司，批號分別為21282，20521，21027）；丁香酚對照品（批號為110725－201414，含量為99.8%），土木香內酯對照品（批號為110760－201510，含量為100.0%），異土木香內酯對照品（批號為110761－201806，含量為97.4%），均購自中國食品藥品檢定研究院；乙酸乙酯為色譜純，其余試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：HP－INNOWAX 柱（30m×0.32mm，0.5μm）；載氣：高純度氮；流速：2.0 mL／min；檢測器：火焰離子化檢測器（FID）；進樣口溫度：260 ℃；檢測器溫度：280 ℃；分流比：5∶1；進樣量：1 μL；程序升溫：初始溫度為180 ℃，維持3 min，以50 ℃／min 的速率升溫至190 ℃并維持17 min，以120 ℃／min 的速率升溫至240 ℃并維持6 min。

2.2 溶液制備

1.丁香酚 2.土木香內酯 3.異土木香內酯A.混合對照品溶液 B.供試品溶液 C.陰性對照品溶液圖1 氣相色譜圖1.eugenol 2.alantolactone 3.isoalantolactoneA.Mix reference solution B.Test solution C.Negative reference solutionFig.1 GC chromatograms

取丁香酚對照品47.02 mg，精密稱定，置20 mL 容量瓶中，加乙酸乙酯溶解并定容，搖勻，即得質量濃度為2.346 mg／mL 的丁香酚對照品溶液；取土木香內酯對照品16.27 mg，精密稱定，置10 mL 容量瓶中，加乙酸乙酯溶解并定容，搖勻，即得質量濃度為1.627 mg／mL 的土木香內酯對照品溶液；取異土木香內酯對照品18.36mg，精密稱定，置10 mL 容量瓶中，加乙酸乙酯溶解并定容，搖勻，即得質量濃度為1.788 mg／mL 的異土木香內酯對照品溶液；取上述3 種溶液各1 mL，制成混合對照品溶液。取樣品內容物細粉4.704 2 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入乙酸乙酯25 mL，稱定質量，超聲（功率為300 W，頻率為50 kHz）處理20 min，冷卻至室溫，再稱定質量，用乙酸乙酯補足減失的質量，搖勻，經0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得供試品溶液。按潔白膠囊處方和工藝制備缺丁香和土木香的陰性樣品，并按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

專屬性試驗：取混合對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各1 μL，按2.1 項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。陰性對照品溶液色譜中，在與混合對照品溶液色譜中丁香酚、土木香內酯及異土木香內酯3 個峰相應保留時間處無干擾峰，表明專屬性良好。詳見圖1。

線性關系考察：分別精密量取2.2 項下3 種對照品溶液0.1，0.2，0.5，1.0，2.0 mL，分別置10 mL 容量瓶中，加乙酸乙酯定容，搖勻，得系列混合對照品溶液。各取1 μL，按2.1 項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以待測成分質量濃度為橫坐標（X，μg／mL）、峰面積為縱坐標（Y）進行線性回歸，得回歸方程，丁香酚為Y1＝34.27X1＋26.93（r＝0.999 2，n＝5），土木香內酯為Y2＝15.81X2＋43.69（r＝0.998 9，n＝5），異土木香內酯為Y3＝29.02X3－6.732（r＝0.999 5，n＝5）。結果表明，丁香酚、土木香內酯、異土木香內酯質量濃度分別在23.46～469.2 μg／mL、16.27～325.4 μg／mL、17.88～346.6 μg／mL 范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：取2.2 項下混合對照品溶液適量，按2.1 項下色譜條件連續進樣測定6 次，記錄峰面積。結果丁香酚、土木香內酯、異土木香內酯峰面積的RSD分別為0.63%，0.87%，0.79%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取2.2 項下供試品溶液適量，分別于室溫下放置0，2，4，8，12，24 h 時按2.1 項下色譜條件進樣測定。結果丁香酚、土木香內酯、異土木香內酯峰面積的RSD分別為0.73%，0.97%，0.89%（n＝6），表明供試品溶液在室溫下放置24 h 內基本穩定。

重復性試驗：取樣品（批號為21282）內容物適量，按2.2 項下方法平行制備6 份供試品溶液，按2.1 項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算含量。結果丁香酚、土木香內酯、異土木香內酯的平均含量分別為0.343，0.177，0.185 mg／g，RSD分別為0.65%，0.81%，0.77%（n＝6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取已知含量的樣品（批號為21282）內容物，共9 份，每份1g，精密稱定，分別加入低、中、高質量濃度的單一對照品溶液，按2.2 項下方法制備供試品溶液，再按2.1 項下色譜條件進樣測定，計算回收率，結果見表1。

表1 加樣回收試驗結果（n＝9）Tab.1 Results of the recovery test（n＝9）

2.4 樣品含量測定

取3 批樣品內容物各適量，分別按2.2 項下方法制備供試品溶液，再按2.1 項下色譜條件進樣測定，平行測定3 次，記錄峰面積，并計算樣品含量。結果見表2。

表2 樣品含量測定結果（mg／g，n＝3）Tab.2 Content determination of eugenol，alantolactone and isoalantolactone in the samples（mg／g，n＝3）

3 討論

現代醫學研究證明，潔白膠囊能和多種藥物（如曲美布汀片［2］、匹維溴銨片［3］）聯用治療腹瀉型腸易激綜合征。同時對消化性潰瘍［4］、胃脘痛［5］等有較好療效。影響潔白膠囊質量的因素很多，如生產滅菌工藝［6］、微生物質量［7］、重金屬［8］等。本研究中對制劑中的主要組方藥材土木香和丁香進行質量控制研究，選取了3 個指標性成分，為該品種質量標準的完善提供參考。

預試驗中考察了振搖、超聲和加熱回流等提取方式對丁香酚、土木香內酯及異土木香內酯提取率的影響，發現同一時段內從經濟效率因素考慮超聲提取的效率較高。同時還考察了提取時間，選取15，20，30，60 min對提取率的影響進行考察，結果15 min 時提取率稍低，20，30，60 min 時無明顯差異，故選擇超聲提取20 min。參照文獻［2］考察正己烷和乙酸乙酯提取溶劑的提取效率，發現同一時段內乙酸乙酯的提取效率更高。

綜上所述，該方法簡單、準確、重復性好，可用于同時測定潔白膠囊中丁香酚、土木香內酯、異土木香內酯的含量。