感染丙型肝炎病毒患者血清自身抗體檢測的臨床意義

謝冰鑫

（大連市公共衛生臨床中心（大連市第六人民醫院），遼寧 大連 116031)

人體免疫系統受病毒侵襲后會對免疫應答功能產生影響，使之發生紊亂，生成免疫抗體，以至于發生免疫反應[1-3]。患者在感染丙型肝炎病毒（HCV）后，體內出現自身抗體，導致肝臟病理損傷加劇，無法達到良好的臨床診療效果，甚至影響預后[4-6]。當前，我國醫療行業發展速度非常快，該免疫現象日漸受到關注，亟待提出解決方法，將患者肝功能損傷概率降到最低，為臨床應用提供指導和借鑒。本研究旨在研究感染HCV患者血清自身抗體檢測的臨床價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 試驗對象即2018年1～12月到本院治療的90例HCV感染患者，HCV攜帶者、丙型肝炎、肝硬化各30例。HCV攜帶者中，男18例，女12例，年齡22～74歲，平均年齡（48.21±2.34）歲；丙型肝炎者中，男、女各15例，年齡31～79歲，平均年齡（55.32±3.21）歲；肝硬化者中，男17例，女13例，年齡22～77歲，平均年齡（49.52±3.41）歲。42例健康體檢者中，男20例，女22例，年齡21～75歲，平均年齡（48.12±3.05）歲。兩組基線資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05），可比較。所有病例均排除自身免疫性疾病，均未應用免疫制劑。

1.2 方法 ①間接免疫熒光法：在ANA檢測基質內，抗原即HEP-2細胞、猴肝組織的冰凍切片；SMA檢測基質中，抗原為大鼠胃組織冰凍切片。發揮生物薄片技術作用，組合含細胞、組織的切片，形成反應區，按1∶100比例稀釋血清，依次與各組織細胞孵育30 min，再添熒光二抗，仍將孵育時間控制為30 min，清洗，甘油封片，放置在顯微鏡下觀測。若內含特征性綠色熒光，滴度在1∶100及以上，顯示陽性。如果ANA滴度≥1∶320，需進行肝譜分析。②免疫印跡法：借助該方法，對LKM-1、LC-1等肝抗原自身抗體進行檢測。檢測膜條上覆各類抗原，在室溫下放置，添加緩沖液，以1.5 mL為宜，把振蕩孵育時間控制為5 min，倒掉液體，添加1.5 mL血清，該血清稀釋比例1∶100，振蕩孵育30 min，清洗3遍，NBT/BCIP顯色，對陽性結果加以判斷。③酶聯免疫法：AMA-M2經酶聯免疫吸附法檢測，將樣本、加酶結合物溫育時間均控制為30 min，清洗，添加底物，溫育15 min，添加終止液，把終止反應時間控制在30 min內，比色，按照定量檢測方法，將標準曲線繪制出來，陽性數據即AMA-M2＞20 IU/mL。

1.3 觀察指標 檢測生化指標：丙氨酸氨基轉移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉移酶（AST）、γ-谷氨酸酰基轉酞酶（γ-GT）、總膽紅素（TBiL）均使用特種蛋白分析儀BN-Ⅱ對RF進行檢測，該操作需在說明書指導下進行。

1.4 統計學處理 采用SPSS 23.0統計學軟件對數據進行分析。計量資料采用（）表示，組間比較行t檢驗；計數資料采用[n（%）]表示，組間比較行χ2檢驗；P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HCV感染者自身抗體檢測情況 HCV感染組和健康體檢組總陽性數比較，差異有統計學意義（χ2=21.696，P=0.000）；丙肝攜帶者、丙型肝炎、丙肝肝硬化總陽性數均顯著高于健康體檢組（χ2=15.785、13.873、22.019；P=0.000）。自身抗體ANA、ASMA、AMA-M2、RF的陽性率分別為32.22%、8.89%、11.11%、5.56%。見表1。

表1 HCV感染者自身抗體檢測情況[n（%）]

2.2 HCV感染者ANA熒光模式分析 ANA陽性患者29例，熒光模式主要有顆粒型、胞質型及其他核型，所占比例分別為62.07%、27.59%、17.24%。見表2。

表2 HCV感染者ANA熒光模式分析[n（%）]

2.3 HCV感染者抗核抗體滴度分布 29例ANA陽性滴度，1∶100、1∶1 320、1∶3 200占比分別為82.76%、31.03%、3.45%；健康體檢組2例都為1∶100 ANA均質型。兩組差異無統計學意義（P＞0.05）。見表3。

表3 HCV感染者抗核抗體滴度分布[n（%）]

2.4 自身抗體陰性組與自身抗體陽性組的肝功能檢測結果指標對比 丙肝自身抗體陽性組與陰性組的ALT、AST對比，差異無統計學意義（P＞0.05），丙肝自身抗體陽性組與陰性組的TBIL、γ-GT對比，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表4。

表4 自身抗體陰性組與自身抗體陽性組的肝功能檢測結果指標對比

3 討 論

丙型肝炎作為常見傳染病，在全世界范圍內傳播[7-9]。調查顯示，全球感染患者高達1.7億，而僅我國就有超4 000萬人感染該病[10-11]。現如今，丙型肝炎病毒的相關研究取得了突破性進展，HCV感染者體內存在自身抗體，對組織器官產生影響，發生功能紊亂、病理損傷，使丙型肝炎患者的病毒血癥加劇[12-13]。早在20世紀80年代末，自身免疫性肝炎患者血清內便已檢測出抗病性感染病毒，初步證實HCV感染與自身免疫相關[14-16]。經研究證實，HCV感染能夠經分子模擬，使自身免疫反應性CD8+T細胞被激活，發生自身免疫現象[17-18]。本研究結果顯示，健康體檢組的抗ENA抗體、ANA、RF等自身抗體陽性檢測率明顯比HCV感染者檢出率低，提示HCV感染對機體內自身免疫反應有促進作用，經誘導可產生自身抗體，但不能忽略其與自身免疫之間的關系，HCV感染患者血清內自身抗體的陽性率隨著病情的加劇而增加[19-21]。ANA的熒光模型主要有顆粒型和胞質型，各占62.07%和27.59%，證實慢性肝炎衍變的同時，細胞質內分布自身免疫變化。HCV感染者抗核抗體滴度分布情況說明HCV感染很大程度上增加了自身免疫性肝病發生率。自身抗體陽性的慢性HCV感染者肝功能受損程度顯著高于自身抗體陰性者，指示HCV感染者體內存在自身抗體，會誘發丙肝病變，對肝組織造成損傷[22-24]。一旦感染HCV，會存在多類自身抗體，隨著丙型肝炎的發展及病程的延長，很容易觸發自身免疫。在感染過程中，還會通過多類渠道損傷機體免疫系統，甚至對機體免疫耐受性產生破壞，加劇患者的肝損傷[25-27]。而且對比分析自身抗體陽性、陽性的HCV感染患者肝功能狀況，自身抗體陽性組的TBIL、γ-GT水平高于自身抗體陰性組，表明HCV感染與自身免疫性肝病密切相關。HCV感染者血清中自身抗體形成，分析原因可能是丙肝病毒作用于干細胞而釋放各種抗原，抗原誘發機體產生自身抗體，進一步損傷肝組織[28-29]。

綜上所述，在感染HCV后會觸發患者體內的自身免疫反應，對組織產生影響，使之損傷。采取科學的方式將自身抗體檢測工作落實到位，以此為前提，給出科學有效的治療方案，達到良好的應用效果。臨床需針對合并自身免疫性肝病HCV感染患者實施個體化治療。