鼻咽癌腫瘤相關成纖維細胞的實驗分析

楊明，范小琴，鄢敏，韓靈，鄭朝攀

(1.深圳市人民醫院 暨南大學第二臨床醫學院，南方科技大學第一附屬醫院 耳鼻咽喉科，廣東 深圳 518020； 2.深圳市納米酶腫瘤轉化醫學重點實驗室 深圳市轉化醫學研究院 深圳市第二人民醫院/深圳大學第一附屬醫院 耳鼻咽喉科，廣東 深圳 518035)

腫瘤微環境 (tumor microenviroment, TME) 在惡性腫瘤發生發展中具有重要的調控作用，腫瘤相關成纖維細胞 (cancer associated fibroblasts, CAFs)作為TME中數量最豐富的一類細胞，是TME的重要組成成分，并通過與腫瘤細胞相互作用，促進腫瘤發生發展和轉移，成為近年靶向TME治療的研究熱點[1-3]。在TME中CAFs通過分泌多種細胞因子(cytokine)、趨化因子(chemokine)和炎性因子(inflammatory cytokines) 等激活腫瘤細胞內多條信號通路，從而促進腫瘤細胞的生長、侵襲、轉移和血管生成[4-5]。然而，大量研究顯示在TME中不同腫瘤類型或不同腫瘤來源的CAFs細胞存在高度的異質性，導致CAFs的類型和生物學作用存在很大差異[6]。因此分離、培養和鑒定不同類型TME中的CAFs成為目前TME研究的前沿問題[7]。目前，針對TME中CAFs的研究較少[8]。本研究通過鼻咽癌和鼻咽炎新鮮組織3D 培養的新方法，分離、培養和鑒定CAFs，為研究CAFs在鼻咽癌發生發展和轉移中生物學作用等基礎研究提供了前期基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑耗材 I型膠原酶(Sigma 公司 #SCR103)，胰蛋白酶(Sigma 公司 #T1426)，PBS(Hyclone 公司 #SH30256)，胎牛血清(Sigma 公司 #F8687)，DMEM (Gibco 公司#C11995065)，RPMI-1640 (Gibco 公司 #C11875500BT), CAFs標志物檢測試劑盒 (CST公司 #31549)， ECL化學發光試劑盒(Protein technology 公司 #PK10002)，Matrigel (Corning公司 #356234)，青鏈霉素 (Hyclone公司 #SV30010)，BCA蛋白定量試劑盒 (Protein technology公司 #23225)，RIPA細胞裂解液 (碧云天公司 # P0013B)，DMSO (Sigma公司 #D8779)，蛋白酶抑制劑(Roche公司# 4693116001)，磷酸酶抑制劑(Roche 公司 # 4906837001)。

1.1.2 組織樣本 收集深圳市人民醫院2020年1—6月臨床病理鑒定的新鮮鼻咽癌組織和鼻咽炎組織各3例。……