HPLC同時(shí)測(cè)定和胃消痞丸中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷和黃芩苷的含量

宋 青，鄭 暉，黃錦燕

（淄博市食品藥品檢驗(yàn)研究院，山東 淄博 255086）

和胃消痞丸是在傷寒論名方“半夏瀉心湯”的基礎(chǔ)上加減而成，由紅參、茯苓、黃連、黃芩、干姜、姜半夏、砂仁、炒六神曲、陳皮、枳實(shí)、白芍、厚樸、蒲公英、炙甘草、大棗15味藥組成，具有消痞除脹，和胃止痛功效，用于慢性胃炎，胃及十二指腸潰瘍，癥見心下痞滿，脘腹脹痛，嘔惡不欲食，舌苔黃膩，脈弦滑之寒熱虛實(shí)夾雜之證，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中無含量測(cè)定項(xiàng)，難以全面控制本制劑的內(nèi)在質(zhì)量。

作者參考相關(guān)文獻(xiàn)[1-11]，選擇柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黃芩苷作為陳皮、枳實(shí)、黃芩的指標(biāo)成分，建立高效液相色譜法（HPLC）同時(shí)測(cè)定和胃消痞丸中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷和黃芩苷的含量。該方法專屬性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，為更好控制藥品質(zhì)量提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC-20A系列高效液相色譜儀（日本SHIMADZU公司，包括DGU-20A 脫氣機(jī)，SIL-20自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)，SPD-20A紫外檢測(cè)器，CTO-20A柱溫箱，LCsolution色譜工作站）；Mettler Toledo MS205DU十萬分之一電子天平（瑞士梅特勒公司）；恒溫?cái)?shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；BWS-10恒溫水浴鍋（上海一恒科技有限公司）。

1.2 試藥

和胃消痞丸（淄博市中醫(yī)醫(yī)院），批號(hào)：20210101，20210102，20210103：對(duì)照品：柚皮苷（批號(hào) 110722-201815，含量 91.7 %）、橙皮苷（批號(hào) 110721-202019，含量 95.3 %）、新橙皮苷（批號(hào) 111857-201804，含量 99.4 %）、黃芩苷（批號(hào) 110715-201821，含量 95.4 %），均由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供。乙腈為色譜純，磷酸為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 混合對(duì)照品溶液的制備 精密稱取柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黃芩苷對(duì)照品適量，加甲醇溶解，并稀釋，制成濃度分別為柚皮苷42.59 μg/ml、橙皮苷25.73 μg/ml、新橙皮苷39.60 μg/ml、黃芩苷39.57 μg/ml混合對(duì)照品溶液，即得。

2.1.2 供試品溶液的制備 取重量差異項(xiàng)下的本品，剪碎，取約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率300 W，頻率45 kHz）2 h，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.3 陰性對(duì)照溶液的制備 按處方比例及制備工藝分別制備不含陳皮、枳實(shí)的陰性樣品，不含黃芩的陰性樣品，再按“2.1.2”項(xiàng)下的方法操作，分別制得陰性對(duì)照溶液。

2.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：依利特 Hypersil BDS C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.1 %磷酸溶液（12:88）；流速：1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：283 nm；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：10 μl。

在上述色譜條件下，分別吸取上述混合對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照溶液，注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果供試品色譜中目標(biāo)峰與其他組分分離效果良好，分離度均大于1.5，理論塔板數(shù)均不低于4000。色譜圖見圖 1。

圖1 HPLC色譜圖

2.3 線性關(guān)系考察

分別精密吸取“2.1.1”項(xiàng)下的混合對(duì)照品溶液各1，3，6，10，15，20，30 μl，依次注入液相色譜儀，按“2.2”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定。分別以對(duì)照品的進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，計(jì)算回歸方程。結(jié)果見表1。

表1 4個(gè)成分的線性關(guān)系

2.4 精密度

精密吸取“2.1.1”項(xiàng)下的混合對(duì)照品溶液10 μl，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜峰的峰面積，計(jì)算。結(jié)果柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黃芩苷RSD分別為0.5 %，0.4 %，0.6 %，0.3 %；結(jié)果表明精密度良好。

2.5 供試品溶液穩(wěn)定性

取同一份供試品溶液，分別在制備后0，4，8，12，16，20，24 h，按“2.2”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算。結(jié)果柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黃芩苷RSD分別為0.8 %，0.6 %，0.5 %，0.6 %；表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定，能夠滿足測(cè)定需要。

2.6 重復(fù)性

取同一批樣品（批號(hào)為20210103），按“2.1.2”項(xiàng)下供試品溶液制備方法，平行制備6份；按“2.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，并計(jì)算各待測(cè)成分的含量。結(jié)果柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黃芩苷的含量平均值分別為2.64，1.35，2.11，2.12 mg/g，RSD分別為0.7 %，1.0 %，0.8 %，0.3 %。結(jié)果表明方法重復(fù)性良好。

2.7 回收率

精密稱取“2.6”項(xiàng)下已測(cè)知含量的樣品（批號(hào)為20210103）0.5 g，共取6份，分別加入“2.1.1”的混合對(duì)照品溶液25 ml，精密加入甲醇25 ml，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，照“2.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算。結(jié)果見表2。

表2 4個(gè)成分回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.8 樣品測(cè)定

取3批樣品，分別按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，外標(biāo)法計(jì)算各成分的含量，結(jié)果見表3。

表3 和胃消痞丸中4個(gè)成分的含量測(cè)定結(jié)果/mg·g-1 （n=3）

3 討論

3.1 流動(dòng)相的選擇

參考文獻(xiàn)[12]，嘗試了乙腈-0.1 %磷酸溶液、乙腈-0.2 %磷酸溶液、乙腈-0.3 %磷酸溶液及甲醇-0.5 %醋酸溶液等不同流動(dòng)相組合，以乙腈-0.1 %磷酸溶液分離度最佳，峰形最好。

3.2 波長(zhǎng)的選擇

4個(gè)成分在283 nm處均有最大吸收或者接近最大吸收波長(zhǎng)，故選擇283 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.3 供試品溶液的制備方法的考察

對(duì)比超聲與加熱回流提取方式，隨著超聲時(shí)間的延長(zhǎng)，測(cè)得結(jié)果與回流無顯著性差異，且超聲提取比回流提取方法簡(jiǎn)便快捷，并有利于樣品分散，決定采用超聲提取法。