γ干擾素釋放試驗在艾滋病合并結(jié)核感染人群中的診斷價值研究

姚正鋼，陳勇毅，藍夢穎

陽江市公共衛(wèi)生醫(yī)院感染內(nèi)科，廣東陽江 529566

艾滋病（AIDS）是全球范圍內(nèi)一種危害性較高傳染性疾病，引發(fā)艾滋病的原因是由于人體感染了人類免疫缺陷病毒（HIV）所致，一旦感染病毒機體各大免疫器官都會受到極大的損傷，所以又將其稱之為獲得性免疫缺陷綜合征[1]。結(jié)核?。═B）是一種常見的傳染病。相關(guān)研究表明，人在感染HIV后并發(fā)TB的風(fēng)險會明顯提升，TB是導(dǎo)致AIDS患者死亡的重要危險因素，全球AIDS患者中有25%左右的患者主要死亡原因為TB[2-4]。近些年來，γ干擾素釋放試驗（IGRA）為艾滋病合并結(jié)核感染的早期快速診斷提供了新途徑，IGRA在一定程度上彌補了結(jié)核菌素試驗（PPD）的不足之處，現(xiàn)目前多個國家已將其應(yīng)用于診斷HIV/TB潛伏感染中，國內(nèi)外研究結(jié)果表明IGRA對艾滋病合并結(jié)核感染具有較高的輔助診斷價值，尤其是在一些發(fā)達國家[5]。該次方便選擇2019年1月—2020年2月該院收治的60例艾滋病合并結(jié)核感染患者進行研究，主要旨在探討針對艾滋病合并結(jié)核病患者應(yīng)用γ干擾素釋放試驗的診斷價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

方便選取該院收治的60例艾滋病合并結(jié)核感染患者納入研究。男性42例，女性18例；年齡24～65歲，平均年齡（39.53±6.53）歲?；颊吆炇鹣嚓P(guān)知情同意書，經(jīng)該院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準進行。

納入標準：①納入研究患者符合《艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標準(WS293-2008)》與《肺結(jié)核的診斷標準(WS288-2008)》中相關(guān)診斷標準；②均接受IGRA檢查；③無精神疾病，認知正常，能有效配合各項檢查和治療。排除標準：①治療期間曾應(yīng)用免疫增強劑、免疫抑制劑者；②存在其他免疫功能障礙者；③合并腎臟、心肺、肝臟功能不全等者；④處于妊娠期的女性。

1.2 方法

所有患者均要實施γ干擾素釋放試驗（IGRA）、結(jié)核菌素試驗（PPD）、結(jié)核抗體（T-SPOT TB）等一系列檢查方式進行診斷。

IGRA試驗：該試驗所應(yīng)用的結(jié)核桿菌特異性細胞免疫反應(yīng)試劑盒主要是由?？诰S瑅璦生物研究院所提供，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法進行檢測。具體步驟為:嚴格遵循無菌操作原則，應(yīng)用肝素鈉管采集納入患者新鮮全血，全血采集量應(yīng)＞3 mL，而后在室溫狀態(tài)下將采集的全血儲存、運輸，并且需要在16 h內(nèi)實施樣品刺激。其中編號反應(yīng)管“樣品號-N”，提示為陰性對照管，“樣品號-P”提示為陽性對照管，“樣品號-T”提示為檢測管。將刺激劑分別加入3個對照管內(nèi)，吸取1 mL全血加入相應(yīng)編號的反應(yīng)管中并孵育22～24 h，同時將血漿上清向標記好的1.5 mLEP管中轉(zhuǎn)入。并嚴格根據(jù)試劑盒說明書實施操作進行檢測，酶標儀讀取450 nm處的OD值。計算結(jié)果，得出(P-N)和(T-N)值。當N＜0.5 IU/mL時，(T-N)/(P-N)≥0.60時判為陽性，否則為陰性。當N≥0.5 IU/mL，(T-N)/(P-N)≥0.85時判為陽性，否則為陰性(注：當P-N≥10 IU/mL時，按P-n=10 IU/mL計算)。

PPD試驗：于患者前臂內(nèi)側(cè)實施肌肉注射5個單位PPD，72 h后對其硬結(jié)大小進行測量。

結(jié)核抗體（T-SPOT TB）檢測：應(yīng)用結(jié)核分枝桿菌抗體檢測試劑盒（國食藥監(jiān)械(準)字2010第3400381號）進行分析，分析步驟與判定方法均參考說明書進行，并嚴格按照規(guī)定的流程操作。

1.3 統(tǒng)計方法

將研究中所記錄的數(shù)據(jù)信息全數(shù)導(dǎo)入SPSS 22.0統(tǒng)計學(xué)軟件中作進一步分析，計數(shù)資料以頻數(shù)和百分比（%）表示，組間差異比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同診斷方式檢測結(jié)果比較

以T-SPOT TB檢驗結(jié)果為金標準，共計40例陽性患者以及20例陰性患者，IGRA檢測結(jié)果中，同為陽性的患者共計35例，同為陰性的患者共計15例，PPD檢測結(jié)果中，同為陽性的患者共計25例，同為陰性的患者共計10例，具體結(jié)果見表1。

表1 不同診斷方式檢測結(jié)果比較

2.2 影響IGRA陽性率相關(guān)因素分析

不同性別、不同感染方式以及T淋巴細胞CD4+計數(shù)對于患者的IGRA陽性率相較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），但是經(jīng)抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療后的患者IGRA陰性率，顯著較陽性率更高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=4.148，P＜0.05），見表2。

表2 影響IGRA陽性率相關(guān)因素分析[n(%)]

3 討論

肺結(jié)核（TB）是臨床上一種常見的傳染性疾病，近些年來，由于時代發(fā)展，人們養(yǎng)成不良生活習(xí)慣，導(dǎo)致HIV感染開始慢慢由感染高危人群趨于普通人群發(fā)展，HIV感染人群也不斷在擴大。機體一旦感染HIV，其病毒會刺激機體中的T淋巴細胞CD4+，長期以往機體免疫功能會受到嚴重損傷，從而導(dǎo)致結(jié)核菌感染逐步發(fā)展為活動性結(jié)核[6]。相對于非HIV感染的TB患者而言，HIV合并TB患者由于兩種疾病不存在典型癥狀表現(xiàn)，加之相互影響、相互作用，不僅診斷難度高，且容易導(dǎo)致病情遷延不愈，患者隨時都可能發(fā)生生命危險，因此早期確診HIV合并TB對于控制患者病情、提高預(yù)后效果以及延長其生存期具有至關(guān)重要的意義[7]。由于臨床診斷HIV合并TB過程中實施PPD實驗存在假陰性現(xiàn)象，加之結(jié)核病灶所表現(xiàn)的影像學(xué)不具特異性，導(dǎo)致診斷具有一定的難度。所以研究一種敏感、有效的檢測方式對于臨床診斷HIV合并TB具有重要的意義[8-9]。

該次研究中對所有患者實施γ干擾素釋放試驗（IGRA）、結(jié)核菌素試驗（PPD）、結(jié)核抗體（T-SPOT TB）等一系列檢查方式進行診斷，檢查結(jié)果顯示，γ干擾素釋放試驗（IGRA）檢測結(jié)果敏感度、特異性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、準確性均明顯較結(jié)核菌素試驗（PPD）結(jié)果更高，提示IGRA在HIV感染合并TB患者的診斷過程中具有較為重要的輔助性診斷價值[10-11]。除此之外，我國開始廣泛實施卡介苗接種也對PPD試驗造成了影響，導(dǎo)致PPD試驗存在假陽性，并且HIV感染合并TB患者大多數(shù)都是自身免疫力低下的人群，同時也存在假陰性率較高的現(xiàn)象[12-13]。IGRA試驗的根本原理是因為TB患者機體內(nèi)本身就存在特異性較強的T淋巴細胞，而當T淋巴細胞在體外受到ESAT-6和CFP-10等結(jié)核桿菌特異抗原的刺激時會導(dǎo)致機體開始分泌IFNγ，所以在對IFN-γ水平進行檢測后，可以根據(jù)其具體水平對患者機體內(nèi)是否存在結(jié)核感染進行有效判定[14-15]。在相關(guān)學(xué)者的研究結(jié)果顯示，IGRA試驗在針對TB患者的診斷中其敏感性為90.0%，特異性為98.1%，相對于該次研究結(jié)果的顯示，患者在實施IGRA試驗后，患者敏感性相較結(jié)核菌素試驗（PPD）明顯更高，出現(xiàn)這種情況的根本原因是IFN-γ是因為T淋巴細胞CD4分泌而形成的，所以患者一旦HIV感染就會造成T淋巴細胞CD4+明顯下降，由于T淋巴細胞CD8+、γδT細胞也會促使機體分泌少量IFN-γ，所以最終造成該實驗T淋巴細胞CD4+的影響并不明顯，因此該次研究認為臨床上針對HIV感染合并TB患者的診斷中可以應(yīng)用IGRA試驗，其檢驗方式具有有效性[16]。

為了進一步分析導(dǎo)致患者IGRA出現(xiàn)假陰性現(xiàn)象的相關(guān)因素，該次研究將患者的IGRA陽性、陰性患者的臨床資料統(tǒng)計后進行了分析對比，結(jié)果顯示不同性別、不同感染方式及T淋巴細胞CD4+計數(shù)在患者的IGRA陽性率相較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，但是經(jīng)抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療后的患者IGRA陰性率，顯著較陽性率更高（P＜0.05）。而從相關(guān)學(xué)者于2015年在γ干擾素釋放試驗在AIDS合并結(jié)核感染患者中的診斷價值研究中發(fā)現(xiàn)，研究結(jié)果同樣顯示性別（男性陽性率71.43%、陰性率40.00%，女性陽性率28.57%，陰性率60.00%）、感染方式（異性接觸陽性率14.29%、陰性率10.00%，同性接觸陽性率42.86%、陰性率50.00%，注射血液接觸陽性率26.19%、陰性率20.00%，其他原因接觸陽性率26.19%、陰性率20.00%）以及CD4+T淋巴細胞計數(shù)（＜200 mm3陽性率21.43%、陰性率80.00%，≥200 mm3陽性率78.57%、陰性率80.00%）對于IGRA結(jié)果影響并不明顯（P＞0.05），但是當患者接受抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療后（接受抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療陽性率32.43%、陰性率60.00%）HIV感染合并TB患者IGRA陰性發(fā)生率較高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），陸旭等[17]表明，既往曾患結(jié)核的患者接受抗逆轉(zhuǎn)錄治療后發(fā)生結(jié)核的總比率為14.2%，其中6個月發(fā)生結(jié)核的病例占比率為9.4%；該次研究中接受接受抗逆轉(zhuǎn)錄治療后，其結(jié)核發(fā)生率為19.73%，與上述研究結(jié)果相似。因此，提示該次研究由于樣本量較少的原因可能對研究結(jié)果造成了一定影響，同時也可能與患者因抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療后直接影響機體免疫功能的原因相關(guān)，所以還需進一步研究。

綜上所述，臨床上針對艾滋病合并結(jié)核感染的診斷中應(yīng)用γ干擾素釋放試驗具有較高的應(yīng)用價值，IGRA試驗在艾滋病合并結(jié)核感染人群中的診斷中具有一定價值。