Merlin蛋白在肝細胞癌患者血清中的表達及其與肝癌易感性、化療敏感性及預后的關系

姬紅波 姚路靜 白瑞鋒

肝細胞癌(HCC)是世界范圍內常見的消化系統惡性腫瘤，腫瘤疾病相關死亡人數位列全球第四，且東亞地區死亡率最高[1]。肝硬化、病毒感染、黃曲霉素、酒精、吸煙等危險因素與HCC的發病密切相關。隨著醫學的發展，我國HCC 5年生存率從2005年的10.1%提升到2015年的12.1%，而45歲以上患者5年生存率仍然低于10%[2]。近年來許多針對腫瘤細胞免疫檢查點的分子成為抗腫瘤治療的熱門研究方向，如PD1/PD-L1抗體Tremeimumad[3]、Camrelizumab[4]，全人源性免疫球蛋白G4單克隆抗體Nivolumab[5]等在HCC治療中均表現出較好的抗腫瘤活性和較低的毒性，但臨床使用仍需進一步驗證。NF2(神經纖維瘤病Ⅱ型)基因是一種抑瘤基因，可通過抑制絲氨酸/蘇氨酸激酶PAK1抑制Ras介導的細胞癌變，有研究表明缺乏NF2基因能夠促進腫瘤細胞的惡性生長[6]。腫瘤細胞的運動性對腫瘤的增殖和轉移能力非常重要，而NF2基因的編碼產物梅林(Merlin)蛋白在調節肌動蛋白和細胞骨架的運動中起重要作用，且Merlin蛋白的表達和缺失都會導致細胞運動狀態的改變[7]。之前的研究表明，Merlin蛋白在肝癌細胞中的高表達能夠促進腫瘤的生長和轉移[8]，但目前該蛋白與肝癌易感性、化療敏感性及預后的關系尚不明確。因此，本研究以HCC患者為對象，檢測患者血清Merlin蛋白的表達水平，旨在研究其與HCC的發生發展、化療敏感性及患者預后之間的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究選擇本院肝膽外科2014年2月至2017年2月收治的57例肝臟惡性腫瘤患者作為研究對象。納入標準：①所有患者均通過組織活檢確診為HCC，臨床分期為CNLC Ⅲb期和Ⅳ期無法手術治療的患者[9]。②患者臨床資料完整，包括年齡、性別、病理分級、腫瘤直徑等。③患者臟器功能良好，無化療禁忌證。排除標準：①經診斷排除非HCC和非CNLC Ⅲb期、CNLC Ⅳ期HCC患者。②存在肝功能、腎功能、心功能衰竭的患者，血壓及血糖無法控制的患者，出現嚴重并發癥的患者。③診斷后未在我院接受治療的患者。研究組男性31例，女性26例，年齡為47～73(63.1±7.1)歲，按照1∶1納入年齡、性別匹配體檢健康人作為對照。該研究納入對象均簽署對研究的知情同意書并經醫院醫學倫理委員會審核通過。

1.2 化療效果及隨訪

所有患者均使用奧沙利鉑為主的FOLFOX4方案進行化療，完成3～4個周期的化療后2周，對患者瘤體大小進行測量并根據WHO實體瘤客觀療效評定標準對化療效果進行評價：分為完全緩解(complete remission，CR)、部分緩解(partial remission，PR)、疾病穩定(stable diserase，SD)和疾病進展(progressive disease，PD)。以CP與PR之和為總有效率(total effective，ORR)，患者出現PD則判定為無效。所有患者均以出現CR、PR、SD判定為臨床獲益，表明治療預后良好，PD則表明治療預后不良，分析其預后相關因素，并繼續以此方案進行化療。患者生存相關指標采用疾病進展時間(time to progressive，TTP)和患者總生存時間(overall survival，OS)。

1.3 檢測患者血清中Merlin蛋白表達水平

健康人體檢當天、HCC患者進行化療前、后采集血清，采用酶聯免疫吸附法檢測血清中Merlin蛋白表達水平，試劑盒購自上海酶聯生物公司，均嚴格按照試劑盒說明書中規定步驟進行操作。

1.4 統計學分析

2 結果

2.1 血清中Merlin蛋白表達水平比較

HCC患者使用FOLFOX4方案化療前血清中Merlin蛋白表達平均水平為(79.63±12.35)ng/mL，顯著高于健康人的(41.34±7.48)ng/mL；HCC患者化療后平均水平為(58.97±10.54)ng/mL，與化療前相比顯著降低，差異具有統計學意義(t=9.607，P<0.001)。

2.2 肝細胞癌患者血清中Merlin蛋白表達水平與臨床病理特征的相關性

HCC患者血清中Merlin表達水平與患者年齡、性別無關，與患者腫瘤大小、是否淋巴結轉移、腫瘤分化程度和外周血甲胎蛋白(Alpha-fetoprotein，AFP)水平密切相關，差異具有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 HCC患者血清中Merlin蛋白表達水平與臨床病理信息的相關性

2.3 肝細胞癌患者化療后不同效果組血清中Merlin蛋白表達水平的比較

57例HCC患者接受FOLFOX4方案化療后CR組、PR組、SD組、PD組人數分別為9人、15人、21人、12人，4組受試者血清中Merlin蛋白表達水平分別為(47.64±10.18)ng/mL、(58.63±11.03)ng/mL、(59.79±11.86)ng/mL、(70.43±12.30)ng/mL，整體比較差異具有統計學意義(F=6.823，P<0.001)。

2.4 肝細胞癌患者預后不良影響因素的Logistic回歸分析

多因素Logistic回歸分析結果顯示腫瘤直徑、腫瘤分化程度、有無淋巴結轉移、外周血AFP水平是否大于400 ng/ml、血清中Merlin蛋白水平與肝癌患者預后不良顯著相關(P<0.05)，見表2。

表2 肝細胞癌患者預后影響因素的Logistic回歸分析

3 討論

近幾年的研究表明，世界每年因HCC死亡的人數約為78萬，為死亡率第四的惡性腫瘤，東亞地區HCC死亡率最高，南美最低。我國HCC患者死亡率高，5年生存率低，一經發現常為中晚期，失去最佳手術機會，且易復發和轉移[9]。晚期肝癌的主要治療手段仍為化療，現在以奧沙利鉑為主的FOLFOX4方案被推薦為治療晚期HCC的一線治療手段[10]，多項研究表明奧沙利鉑化療聯合索拉菲尼能夠有效提高患者緩解率和無進展生存期(Progress free survival，PFS)[11]。HCC患者對化療藥物的敏感性與其治療效果和預后密切相關，而腫瘤多藥耐藥性是當今腫瘤化療的重大難題之一。

NF2基因是目前發現的唯一一個和神經纖維瘤Ⅱ型相關的致病基因[12]，目前NF2基因突變超過200種，但任何突變都能夠使其編碼的Merlin蛋白失活，而NF2基因突變導致的Merlin蛋白失活均參與了乳腺癌、結腸癌、前列腺癌和肝細胞癌等惡性腫瘤的發生發展[13]。Merlin蛋白是一種NF2基因的編碼產物，被發現了具有抑制腫瘤生長的功能[13]。Merlin蛋白可作為間接連接F-肌動蛋白、跨膜受體和細胞內效應的支架蛋白，調節受體介導的信號通路，控制細胞生長和增殖[7]。有研究表明Merlin蛋白能夠定位并結合CD44，通過與透明質酸競爭性結合CD44抑制了腫瘤的生長，而缺乏CD44結合域的Merlin蛋白突變體由于無法結合CD44而無法抑制腫瘤的生長[14]。但有研究表明Merlin蛋白在惡性腫瘤中發揮抑癌和促癌的雙重作用[8]，在肺癌[15]、乳腺癌中[16]Merlin蛋白表達水平明顯下降，但在HCC中Merlin蛋白表達水平顯著上升，目前和此現象有關的文獻研究較少。

本研究使用酶聯免疫吸附法檢測HCC患者血清中Merlin蛋白的表達情況，結果發現HCC患者血清中Merlin蛋白水平顯著增加，與之前的研究結果相吻合[8]；肝癌患者血清中Merlin蛋白水平與患者年齡、性別無關(P>0.05)，但與患者的腫瘤大小、有無淋巴結轉移、腫瘤分化的程度和外周血AFP水平密切相關(P<0.05)；HCC患者使用FOLFOX4方案化療后血清中Merlin蛋白表達水平與化療前相比顯著降低(P<0.001)；對化療后不同效果組的血清中Merlin蛋白表達水平檢測結果發現，Merlin蛋白表達水平隨化療效果的降低明顯升高。本研究還通過Logistic回歸分析顯示HCC腫瘤直徑、分化程度、有無淋巴結轉移、外周血AFP水平是否大于400 ng/ml、血清Merlin蛋白水平與肝癌患者預后顯著相關(P<0.05)。

綜合本文的研究結果，Merlin蛋白在HCC患者血清中的表達水平明顯高于健康體檢者，且表達水平與HCC腫瘤大小、有無淋巴結轉移、腫瘤分化的程度和患者外周血AFP水平相關；化療前后血清中Merlin蛋白表達存在顯著差異，且化療效果越差的患者血清中Merlin蛋白表達水平越高。