超聲造影聯合hPygo2、AGGF1水平檢測對老年宮頸癌患者術后療效的評估分析

王元媛 李 瀟 蘇 佳

宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤，目前常采用手術、放化療等方法，術前化療可減小病灶提高手術切除率和降低術中轉移機風險[1-2]。由于大多數患者一旦確診就已處于宮頸浸潤癌階段，甚至嚴重轉移，導致手術切除難度大，術后復發率較高等，從而降低術后治療效果。因此手術過程中對患者治療效果進行評估，可有效指導醫師重點關注低治療效率患者，及時調整治療方案，從而改善生活質量和加快預后[3-4]。超聲造影(Contrast-enhanced Ultra sonogra-phy，CEUS)可檢測腫瘤血管形態及血流動力學狀態，同時還能提供治療前后腫瘤病灶微循環變化情況，反應疾病進展[5]。人G補綴FHA域血管生成因子1(angiogenic factor with G and FHA domains 1,AGGF1)具有強烈的血管生成促進功能，通過誘導持續性血管生成從而促進宮頸癌細胞的生長、侵襲以及轉移，而hPygo2可由人乳頭瘤病毒誘導從而在組織中高表達，通過調控細胞周期的變化引起癌細胞異常增殖，進而導致宮頸癌組織向周圍組織浸潤，兩種因子均在宮頸癌組織中高表達，協同調控腫瘤的生長、分化、侵襲、轉移，從而降低手術治療效果[6-7]。AGGF1與血管狀態密切關聯，而CEUS直接檢測腫瘤血管灌注狀態，故而推測兩者之間存在相關性。因此在手術治療過程中檢測宮頸癌組織中的表達情況至關重要，同時配合使用CEUS評估腫瘤血管狀態，可從分子學、影像學角度進一步評估宮頸癌組織的分化、生長狀態，從而反應術后效果，因此本文將通過實例進一步探討。

1 資料與方法

1.1 基本資料

選取我院于2017年6月起至2019年12月126例行手術治療的老年宮頸癌患者作為研究對象，根據患者術后療效分為有效組(84例)和無效組(42例)，年齡56～71歲。所有患者均簽署知情同意書，本研究獲得我院倫理委員會批準。納入標準：(1)經病理學、影像學檢測確診為宮頸癌，根據2006年修訂國際婦產科聯盟 (FIGO) 臨床分期為ⅠB～Ⅱ期[8]；(2)均為初治患者，未接收化療、手術治療，預計生存期超過6個月。排除標準：(1)心、腎、肝等重要臟器功能障礙或造血系統疾病者；(2)存在其他原發性惡性腫瘤，或者腫瘤轉移者；(3)手術不耐受，應從性較差。

1.2 方法及判斷標準

所有患者術前1周采用CEUS檢查，首先用5 ml生理鹽水溶解聲諾維微泡造影劑干粉(Bracco SonoVue)，混勻即可，肘部靜脈注射2.4 ml造影劑后立即用5 ml生理鹽水沖洗管道。采用超聲儀(廠家：美國GE公司的volusonE8)行陰道超聲檢查，觀察宮頸癌患者病灶位置、大小、血流、回聲等情況。經肘靜脈團注造影劑2.4 ml，及時啟動計時器、動態存儲，觀察造影過程5 min，并連續記錄儲存所有圖像資料。

使用時間-強度分析軟件對病灶進行定量分析，得到宮頸癌各區域的時間-強度曲線的量化參數，主要為造影劑到達時間 (arriving time,AT)、達峰時間 (time to peak,TTP)、峰值強度 (peak intensity,PI)，平行測量3次，取平均值。

收集手術切除的宮頸癌組織并進行石蠟包埋。隨后依次連續切片、低溫烤干后保存于-20℃冰箱，采用辣根-過氧化酶連接二步法對頸癌組織中hPygo2、AGGF1表達水平進行免疫組化法檢測。兔抗人Pygopus2單克隆抗體，購自美國Abcam公司，抗-AGGF1一抗購自美國Santa Cruz公司，免疫組化染色步驟按試劑盒說明書開展。采用雙盲法閱片，正置顯微鏡購自于日本Olympus公司，細胞中著色點位于細胞核，出現綠色熒光為AGGF1表達陽性細胞，若呈現棕黃色顆粒為hPygo2表達陽性細胞。

每張病理切片中選擇3～5個代表性的高倍視野采集圖像，根據陽性細胞數占比以及染色強度進行判斷。陽性細胞染色強度：強染色(3分)、中染色(2分)、弱染色(1分)、無染色(0分)。陽性細胞率：51%～100%(4分)、26%～50%(3分)、10%～25%(2分)、0～9%(1分)。

療效評定標準[9]：根據RECIST實體腫瘤化療療效評定標準并采用超聲造影檢查、婦科檢查結果進行判定，若腫瘤治療后完全緩解、部分緩解則判定為有效，若病變進展、病變穩定則判定為無效。

1.3 統計學分析

應用SPSS 19.0軟件進行統計學分析，計量資料用表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗，計數資料采用百分比表示，組間比較采用χ2檢驗；對術后療效影響因素進行單因素分析，并采用非條件Logistic回歸進行多因素分析，相關性評估采用Spearman相關性分析，P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 造影結果

有效組患者術前AT、TTP顯著高于無效組，而PI顯著低于無效組 (P<0.05)，見表1。

表1 術前造影結果

2.2 組織hPygo2、AGGF1表達水平

有效組患者宮頸癌組織中的hPygo2、AGGF1表達水平顯著高于無效組，差異具有統計學意義(P<0.05)，見表2、表3。

表2 宮頸癌組織中hPygo2表達水平

表3 宮頸癌組織中AGGF1表達水平

2.3 術后療效與臨床病理特征的關系

兩組患者年齡、吸煙史、癌癥類型、癌癥分期、高血壓、高血脂等一般資料差異無顯著性(P>0.05)，而有效組患者的腫瘤顯著小于無效組(P<0.05)，見表4。

表4 術后療效與臨床病理特征的關系

2.4 宮頸癌患者術后療效影響因素的Logistic回歸分析

經對患者的腫瘤大小、組織hPygo2和AGGF1表達水平以及影像結果進行回歸多因素分析，結果顯示均與術后療效存在密切相關性(P<0.05)，見表5。

表5 患者術后療效影響因素多因素分析結果

2.5 組織hPygo2和AGGF1表達水平以及影像參數的相關性

本次研究結果顯示：組織hPygo2和AGGF1表達水平、AT、TTP兩兩之間存在顯著正相關性，均與PI呈現負相關，見表6。

表6 組織hPygo2和AGGF1表達水平以及影像參數的相關性(γ，P)

3 討論

宮頸癌是婦科腫瘤中是僅次于乳腺癌的第二大腫瘤，早期癥狀不顯著，若診斷治療不及時，則易過渡到進展期宮頸浸潤癌階段，使得術后仍然需要開展化療、放療，以增強療效[4]。目前手術治療是唯一可能治愈宮頸癌的方法，同時在治療圍術期配合使用化療、放療，可有效殺滅癌細胞[10]。研究發現腫瘤的血流灌注變化可作為療效的重要參考指標，采用CEUS技術評估患者宮頸癌組織血流動力學狀態和血管形態可反應腫瘤的生長狀態，評估術后化療藥物灌注效率，從而評估治療效果。hPygo2作為癌細胞生長、發育的重要的核蛋白，其通過在腫瘤細胞中高表達，從而調控染色質重塑、轉錄激活等生物學功能，進而促進宮頸癌細胞增殖和腫瘤組織生長發育[11]。AGGF1則在腫瘤血管內皮細胞中高表達，從而推動血管新生，可為惡性增殖的腫瘤細胞提供充足的營養和氧氣，促進代謝廢物的排泄，與宮頸癌的生長、侵襲、轉移等密切關聯[12]。因此hPygo2、AGGF1表達水平均有腫瘤宮頸病變程度和進展密切關聯，配合超聲造影及時準確地反映腫瘤血管血流狀態，從而可為臨床提供有效的療效評價依據。

本次研究結果顯示有效組患者的宮頸癌組織中的hPygo2、AGGF1表達水平顯著高于無效組(P<0.05)，分析認為高hPygo2、AGGF1表達患者其疾病處于高度分化狀態，疾病處于更為嚴重程度的狀態，其中hPygo2可促進細胞由G1期向S期轉化，加快細胞周期進程，從而促進癌細胞增殖[6]，而癌細胞的大量增殖需消耗大量的營養和產生大量的廢物，AGGF1則通過誘發腫瘤血管生成，改善局部缺血狀態，為腫瘤細胞的異常增殖提供良好的生長、侵襲條件[13]，故而兩種蛋白因子協同促進腫瘤的生長，從而增加手術切除和術后放療難度，降低治療效果。有效組患者術前AT、TTP顯著高于無效組，而PI顯著低于無效組，分析認為有效組患者腫瘤處于高度分化狀態，高表達的AGGF1導致大量新生血管的生成，而新生血管的大量交通支、動靜脈瘺使血流阻力降低，從而引起增加灌注速度和灌注量[14]，故而縮短病灶造影劑AT、TTP，以及增加病灶造影劑PI。同時通過對宮頸癌組織hPygo2、AGGF1表達水平、臨床病理特征以及超聲造影結果進行進行單因素、多因素分析發現結宮頸癌組織hPygo2、AGGF1表達水平、超聲造影結果與患者術后療效均有顯著相關性。即宮頸癌組織中高hPygo2、AGGF1表達水平、超聲造影結果顯示腫瘤血管狀態更佳，則手術治療效果越差。hPygo2促進腫瘤細胞的生長、增殖、分化，同時AGGF1通過增加血管密度和加快局部血流速度，從而為腫瘤細胞提供良好的生長環境，進而使得宮頸癌組織進一步擴散，增加腫瘤大小和誘導腫瘤高度分化等，而超聲影像結果則是顯示腫瘤血管的實際新生狀態，可提供腫瘤內微循環的變化情況，如治療無效組患者會因為新生血管持續、大量生成，從而導致灌注速度快，病灶造影劑PI高[15]，因此證實超聲造影、hPygo2和AGGF1水平檢測可有效評價老年宮頸癌患者術后療效。

宮頸癌的發生發展受到多因素的影響，且病情發展迅速、突變因素多，其中參與血管新生、細胞生長分化的因子是發病的誘發因素，超聲影像結果評估腫瘤生長狀態，反映治療難度，通過了解各指標之間的相關性可為臨床治療提供思路。本次研究結果顯示組織hPygo2和AGGF1表達水平、AT、TTP兩兩之間存在顯著正相關性，均與PI呈現負相關，證實各個信號通路、影像參數之間對于療效的影響并不是孤立存在的，分子學水平的變化從內在調控腫瘤的生長，影像學參數和圖像則更為直觀的反應分子學水平引起的變化，從而有效評估術后療效，指導臨床治療，故而推測超聲造影聯合hPygo2和AGGF1水平檢測可有效評價老年宮頸癌患者術后療效。當然，此次研究還存在一定局限性，本研究沒有進行長期的隨訪觀察，因此未能長期關注宮頸癌患者治療后的hPygo2和AGGF1水平變化趨勢及規律，同時仍需要擴大樣本量進行綜合分析，從而為評估和預測宮頸癌的預后和長期生存率方面提供有價值的線索。

綜上所述，hPygo2、AGGF1在宮頸癌組織高表達水平，而超聲造影可有效反應腫瘤血流灌注狀態。三者之間存在顯著相關性，聯合檢測可有效反應術后療效。