血清婆羅雙樹樣基因-4聯合AFP在原發性肝癌診斷中的應用價值*

袁小筍 張 蕾 馬慧利 薛永飛 李長生 張敬偉 任中海

南陽市中心醫院腫瘤內科二病區 (河南 南陽， 473000)

原發性肝癌(PHC)發病率居全球惡性腫瘤第4位，腫瘤相關死亡率居第2位[1]，PHC患者大多起病隱匿，患者往往因缺乏特異性臨床癥狀而難以及時確診和治療，50%以上的患者確診時已進展為晚期腫瘤，且大多伴有遠處臟器轉移，預后往往較差，5年生存率低于30%[2，3]，因此，對PHC患者早期診斷和及時干預至關重要。甲胎蛋白(AFP)是目前臨床上用于診斷PHC的血清學標志物，研究顯示，AFP單獨診斷PHC的特異度在90%左右，但敏感度較低，尚不足70%，故而臨床上亟需尋找一種診斷PHC具有較高敏感度和特異度的血清學標志物[4，5]。近年來發現婆羅雙樹樣基因-4(SALL4)與腫瘤細胞的增殖、侵襲及遠處轉移等有關[6]。本研究調查PHC患者血清中SALL4的表達水平及其相關影響因素，進一步探討SALL4單獨及聯合AFP用于診斷PHC中的臨床效能。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象 納入2019年1月至2019年12月于南陽市中心醫院就診的70例PHC患者、40例乙型肝炎肝硬化(LC)患者和35例健康體檢者作為研究對象。PHC組患者經過術后病理診斷，符合PHC診療規范(2017年版)[7]，臨床資料完善，近3個月內未經過手術、化療或靶向生物制劑治療，且未合并其他原發性惡性腫瘤。LC組患者診斷符合既往乙型肝炎肝炎病史多年，通過肝臟B超或CT確診。另選取我院體檢中心無肝炎、肝硬化及惡性腫瘤的健康體檢者作為對照組。3組研究對象在性別、年齡上比較差異無統計學意義，具有一定的可比性，見表1。所有研究對象及家屬均知情同意，且簽署知情同意協議書，本研究經過我院倫理委員會批準。

1.2 研究方法

1.2.1 臨床及病理特征資料 PHC患者的臨床資料如性別、年齡、HBsAg狀態、腫瘤細胞分化程度、TNM分期、腫瘤大小、Child-Pugh分級和有無淋巴結轉移及遠處轉移等信息均來源于住院病歷。血清AFP、CEA和CA19-9水平均在我院檢驗科檢測。

1.2.2 血清SALL4表達水平的檢測 于清晨空腹抽取3組研究對象外周靜脈血5 ml于抗凝管中，在常溫下離心收集上層血清，并置于-80℃冰箱中保存。采用ELISA法檢測3組研究對象血清SALL4的表達水平。血清SALL4檢測試劑盒由北京博邁斯科技發展有限公司提供。所有操作步驟均嚴格按照ELISA試劑盒中的說明書執行，由南陽市中心醫院檢驗科完成。

2 結果

2.1 研究對象一般資料比較 見表1。

表1 一般資料在研究對象中的比較

2.2 PHC患者血清SALL4水平與臨床特征的關系 單因素分析結果顯示，PHC患者血清SALL4水平與腫瘤細胞分化程度、TNM分期、Child-Pugh分級及是否存在淋巴結轉移有關。見表2。

表2 PHC患者血清SALL4水平與臨床-病理特征的相關性分析

2.3 PHC患者血清SALL4水平的多因素分析 Logistic回歸分析結果顯示，TNM分期、淋巴結轉移、Child-Pugh分級均是PHC患者血清SALL4水平升高的危險因素。見表3。

表3 PHC患者血清SALL4表達水平的影響因素分析

2.4 血清SALL4聯合AFP診斷PHC的臨床效能 以PHC和LC兩組患者SALL4及AFP水平為檢驗變量，以PHC患者SALL4及AFP水平為狀態變量繪制ROC曲線，結果發現，血清SALL4表達水平診斷PHC的AUC為0.836(95%CI0.753～0.872)，當截斷值為104.23 pg/ml時，敏感度和特異度分別為92.51%和76.94%；血清AFP表達水平診斷PHC的AUC為0.744(95%CI0.623～0.791)，當截斷值為168.72 ng/ml時，敏感度和特異度分別為93.24%和63.16%；SALL4聯合AFP診斷PHC的AUC為0.915(95%CI0.863～0.957)，敏感度和特異度分別為95.18%和90.04%。見圖1。

圖1 血清SALL4聯合AFP診斷PHC的ROC曲線

3 討論

人類SALL4基因主要位于第20號染色體q13.13-q13.2，長度約為18 000 bp，SALL4可通過調控腫瘤細胞中的關鍵致病基因及誘導相關信號通路的活化而參與多種腫瘤細胞的生長及局部侵襲[6]。鑒于目前國內關于PHC患者血清中SALL4表達水平的臨床報道較少，本研究回顧性納入我院PHC患者，檢測PHC患者血清中SALL4表達水平及其影響因素，進一步探討SALL4是否可作為PHC的一項血清學腫瘤標志物。本研究結果發現，與對照組和LC組相比，PHC組血清中SALL4表達水平顯著升高，腫瘤細胞分化程度越低、TNM分期越高、Child-Pugh分級越高及存在淋巴結轉移的患者血清中SALL4表達水平相對較高，提示SALL4可能在PHC的病情進展中扮演了重要作用。Han等[8]通過ELISA法證實，相對于LC及乙型肝炎肝炎患者，PHC患者血清中SALL4表達水平顯著升高，且術后SALL4表達水平較術前顯著降低；此外，Wang等[9]證實PHC患者癌組織中SALL4表達水平與癌旁組織相比同樣顯著升高，且與腫瘤細胞分化程度、TNM分期、腫瘤大小等有關，這一結論與本研究結果基本一致。在發病機制上，SALL4過表達可引起Wnt/β-catenin信號通路的活化而間接促進肝癌細胞的增殖與遷移，而當通過小干擾RNA抑制SALL4的表達后能顯著誘導癌細胞的凋亡[10]；另一方面，劉海榮等[11]發現LINC00654mRNA表達水平在PHC癌組織中顯著升高，且與不良預后密切有關，進一步采用生物信息學法證實SALL4參與PHC的發病機制可能與上調癌組織中的LINC 00654 mRNA的高表達有關。存在淋巴結轉移、TNM分期及Child分級較高均是PHC預后不良的危險因素[7]，而本研究中采用Logistic回歸分析證實TNM分期越高、存在淋巴結轉移及Child-Pugh分級越高均是PHC患者血清SALL4水平升高的危險因素，提示SALL4高表達與PHC的不良預后有關。

為明確SALL4診斷PHC的臨床效能，我們采用ROC曲線分析后證實SALL4在鑒別PHC和LC患者的臨床效能顯著，AUC為0.836(95%CI0.753～0.872)，當截斷值為104.23 pg/ml時，敏感度和特異度分別為92.51%和76.94%，提示通過檢測血清中SALL4蛋白表達水平對LC是否進展到肝癌具有顯著的意義，我們認為SALL4可作為診斷PHC的一項血清學標志物。AFP是臨床上用于診斷PHC的常用血清學標志物，但存在敏感度較低的缺陷。我們發現進一步采用SALL4聯合AFP診斷PHC的臨床效能更為顯著，AUC為0.915(95%CI0.863～0.957)，敏感度和特異度分別為95.18%和90.04%，因此，SALL4聯合AFP診斷PHC具有較高的價值。

綜上所述，PHC患者血清中SALL4表達水平顯著升高，SALL4可作為PHC的一項血清學標志物，SALL4高表達也與患者的不良預后顯著相關，本研究提示SALL4可作為治療PHC的一個靶向位點，然而SALL4在PHC中的作用及其如何調控下游基因、蛋白的表達尚不完全清楚，這也是日后我們進一步研究的方向。