PRRS減毒活疫苗抗體消長規律及仔豬最佳首免日齡探究

高 勝，李 洋，馬志倩，李志偉，徐樂樂，焦 點，馮英桐，杜興乾，肖書奇 (西北農林科技大學 動物醫學院，陜西 楊凌 712100)

豬繁殖與呼吸綜合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome viius,PRRSV)引起的一種重要動物傳染病，能引起全年齡段豬感染，對生豬養殖業造成巨大打擊[1-4]。PRRS具有免疫抑制的特點，會對豬的免疫系統造成破壞，從而繼發其他疾病而加重對感染豬的危害[5]。PRRSV屬動脈炎病毒科，為單股正鏈RNA病毒，基因組全長約15 kb，可分為歐洲型PRRSV毒株(Ⅰ型)與北美型PRRSV(Ⅱ型)2個亞型。我國流行的主要是北美型PRRSV，但歐洲型PRRSV也偶呈散點狀零星出現[6-7]。PRRSV是已知變異速度最快的RNA病毒之一，其基因組替換率可達(4.71～9.80)×10-2堿基/年[8]。PRRSV基因組變異速度快、不同型毒株間同源性較低、流行毒株種類多樣。盡管采取了很多措施，但PRRS在我國養豬場中仍時有暴發，且經常出現具有新的基因組特性和致病性的PRRSV毒株[9-13]。

最新發布的《關于調整完善動物疫病防控支持政策的通知》強調將PRRS和豬瘟退出國家強制免疫，即不再由國家統一采購疫苗[14]。盡管如此，疫苗接種仍是我國大部分豬場防控PRRS的主要手段[15]。據報道，現階段我國約有72%的養豬場通過接種疫苗防控PRRS，而有67%的豬場會免疫2～3次[16]。目前商品化PRRS疫苗主要有9種，其中2種為PRRSV滅活苗，7種為減毒活疫苗。一般而言，減毒活疫苗較滅活疫苗具備更好的免疫原性和保護效果，而運用較廣的也主要是HP-PRRS減毒活疫苗及經典PRRS減毒活疫苗[17]。

養殖生產中，多在妊娠母豬分娩前注射1次 PRRS疫苗，以便仔豬在娩出后通過吮吸初乳獲得母源抗體。母源抗體能對初生仔豬提供充足的保護作用，但隨著仔豬日齡的增加，體內的母源抗體水平會逐漸下降至有效濃度之下[18-19]。因此，在母源抗體消失前對仔豬進行PRRS疫苗免疫，并使其達到有效保護水平是較為合理的免疫方案。本研究對妊娠母豬注射PRRS減毒活疫苗，對其分娩仔豬體內的母源抗體進行了測定分析，以探究母源抗體的消長規律；在此基礎上，進一步對不同日齡的仔豬進行PRRS疫苗的首次免疫，并在免疫后多個時間點測定了其PRRSV抗體水平，以期探究仔豬接種PRRS疫苗的最佳首免日齡。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及疫苗本試驗所用動物為山東省某規?；i場的健康二元母豬及其所產仔豬。PRRS減毒活疫苗為勃林格殷格翰公司生產的PRRS減毒活疫苗(VR2332株)；PRRS抗體檢測試劑盒購自愛德士(IDEXX)公司。

1.2 仔豬PRRS母源抗體消長規律隨機選擇5頭健康妊娠母豬，在其分娩前35 d肌肉注射1頭份PRRS減毒活疫苗，隨機選擇分娩仔豬30頭，于0，4，7，10，16，21，28，35日齡時采集前腔靜脈血分離血清，測定各組仔豬的PRRS抗體水平及陽性率。

1.3 仔豬PRRS減毒活疫苗接種的最佳首免日齡選擇175頭健康仔豬，隨機分為A、B、C、D、E、F和G共7組，每組25頭。分別于0(采食初乳前)，4，7，14，21，28，35日齡時對7組仔豬免疫PRRS減毒活疫苗，并于免疫后0，7，14，21，28，35 d時采集各組仔豬血清測定PRRS抗體水平及陽性率，比較不同首免日齡免疫后仔豬體內PRRS抗體水平。

1.4 判定標準血清中PRRS抗體水平的判定以IDEXX公司抗體試劑盒的說明書為準，當S/P≥0.4 時，血清中PRRS抗體為陽性；當S/P<0.4時，血清中PRRS抗體為陰性。

1.5 數據處理采用軟件GraphPad Prism 5.0對試驗數據進行處理及并繪制圖表。

2 結果

2.1 免疫PRRS減毒活疫苗母豬所產仔豬的PRRS母源抗體消長規律測定30頭仔豬在分娩后0，4，7，10，16，21，28，35 d時的PRRS抗體水平及陽性率，結果如圖1和表1所示，仔豬在吸吮母乳后，體內PRRS抗體水平逐漸升高，出生后4 d均值即可達峰值(S/P=1.19)，且陽性率達100%；在7，10 d PRRS抗體均值仍穩定在峰值附近，且陽性率為96%；此后，豬群PRRS抗體均值及陽性率隨時間延長逐漸降低，至出生28 d，PRRS抗體水平均值接近臨界值(S/P=0.44)，陽性率僅為35%；出生35 d，仔豬體內PRRS抗體平均值轉為陰性。

柱上方數字表示平均值。下同圖1 仔豬體內PRRS抗體水平

表1 免疫仔豬PRRS抗體陽性率

2.2 仔豬接種PRRS減毒活疫苗的最佳首免日齡將175頭仔豬隨機分為7組，每組25頭，分別于0，4，7，14，21，28，35 d接種1頭份PRRS減毒活疫苗，并于免疫后0，7，14，21，28，35 d采集血液，測定血清中的PRRS抗體及陽性率，結果見圖2～8、表2～8。

圖2 0日齡免疫組仔豬體內PRRS抗體水平

圖2和表2的結果表明：0日齡免疫組，即在分娩當日未吃母乳前對仔豬接種PRRS減毒活疫苗后，仔豬在免疫后7 d即可產生高水平PRRS抗體(S/P=0.84)，且陽性率達75%；PRRS抗體持續時間長，截止到免疫后35 d時其平均值仍處于較高水平(S/P=1.32)，陽性率達95%，且尚無衰減趨勢。

表2 0日齡免疫組仔豬PRRS抗體陽性率

圖3和表3的結果表明：4日齡仔豬免疫后，除免疫后7 d，PRRS抗體均值接近臨界值外(S/P=0.39)，其余各測定時間點PRRS抗體均值均為陽性，且陽性率均>70%；此外，該組仔豬在免疫后21 d PRRS抗體水平及陽性率仍維持在較高水平，直至35 d。

圖3 4日齡免疫組仔豬體內PRRS抗體水平

表3 4日齡免疫組仔豬PRRS抗體陽性率

圖4和表4的結果表明：7日齡仔豬免疫后，PRRS抗體水平隨時間推移逐漸增長。除免疫后7 d 外，其余各時間點PRRS抗體均呈陽性，且陽性率同樣維持在較高水平。該組仔豬在免疫21 d后PRRS抗體水平迅速提升，直至免疫后35 d。

表4 7日齡免疫組仔豬PRRS抗體陽性率

圖4 7日齡免疫組仔豬體內PRRS抗體水平

圖5和表5的結果表明：14日齡仔豬免疫后，至少14 d內未產生有效PRRS抗體，免疫后21 d，仔豬產生了高水平的PRRS抗體(S/P=1.58)，且陽性率達到了71%；免疫后35 d，PRRS抗體仍處于較高水平(S/P=1.78)，且陽性率為86%。

圖5 14日齡免疫組仔豬體內PRRS抗體水平

表5 14日齡免疫組仔豬PRRS抗體陽性率

圖6和表6的結果表明：21日齡仔豬免疫后7 d 內并未產生PRRS抗體；血清轉化出現在免疫后14 d，但此時陽性率較低，僅為17%；免疫后21 d，PRRS抗體均值進一步升高，且陽性率達到96%；此后，PRRS抗體水平及陽性率均隨時間延長逐漸升高，直至免疫后35 d(S/P=1.89)。

圖6 21日齡免疫組仔豬體內PRRS抗體水平

表6 21日齡免疫組仔豬PRRS抗體陽性率

圖7和表7的結果表明：28日齡仔豬免疫后至少7 d內未產生PRRS抗體；血清轉化出現在免疫后14 d，PRRS抗體陽性率達83%；此后PRRS抗體及陽性率隨時間延長逐漸升高，持續至免疫后35 d(S/P=2.11，100%)。

圖7 28日齡免疫組仔豬體內PRRS抗體水平

表7 28日齡免疫組仔豬PRRS抗體陽性率

圖8和表8的結果表明：35日齡仔豬免疫后7 d 內未產生PRRS抗體，血清轉化出現在免疫后14 d，但PRRS抗體陽性率僅為40%；此后PRRS抗體及陽性率隨時間延長逐漸升高，持續至免疫后35 d(S/P=2.35，100%)。

圖8 35日齡免疫組仔豬體內PRRS抗體水平

表8 35日齡免疫組仔豬PRRS抗體陽性率

3 討論

本研究探討了免疫PRRS減毒活疫苗的妊娠母豬所產仔豬PRRS抗體在仔豬體內的消長情況。周緒斌等[20]研究發現，PRRS疫苗免疫后14 d開始出現血清轉陽。陸桂麗等[21]研究結果表明，PRRS母源抗體隨時間推移而呈遞減趨勢，28～35日齡時抗體水平靠近臨界值，并建議首免日齡為28日齡。本研究中，仔豬吮吸母乳后會逐漸產生高水平的PRRS抗體，在4日齡時即可達峰值，截止到21日齡時PRRS抗體仍處于較高水平，且陽性率始終>70%；而28日齡時，雖然PRRS抗體均值仍為陽性，但陽性率僅為35%，表明仔豬PRRS疫苗的首次免疫應放在28日齡之前。

對不同日齡的仔豬進行PRRS減毒活疫苗的首次免疫，以期確定最合適的首免日齡。發現0日齡仔豬(采食初乳前)自免疫后7～35 d內，PRRS抗體均值均處于陽性范圍內，且具有較高的陽性率，單純考慮抗體水平而言，這一時間段是較為合理的免疫時間。4日齡免疫組在測定周期內也基本具備較高水平的PRRS抗體均值，且陽性率除免疫后7 d 外，均大于70%，也是較為合理的首免日齡。7日齡仔豬免疫后，PRRSV抗體水平隨時間推移逐漸增長，除免疫后7 d外，其余各時間點PRRSV抗體均呈陽性，且陽性率同樣維持在較高水平，也可以作為合理的首免日齡。此后，14,21,28,35日齡首免組，均有一段較長的空窗期，難以提供有效的保護，不作為推薦的免疫時間。

綜上，結合母源抗體消長情況，在仔豬分娩當天(采食初乳前)或分娩后4～7 d時進行PRRS減毒活疫苗(VR2332)的首次免疫可能是較為合理的免疫方案。