1，3-β-D葡聚糖檢測與半乳甘露聚糖抗原檢測試驗診斷侵襲性真菌感染的臨床價值分析

韓卓婷，黃 妹，林小菊，李木珍

廣東醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院，廣東 湛江 524000

侵襲性真菌感染是指人體受到侵襲性真菌入侵，在器官、組織或血液中生長繁殖，并引起炎癥反應的疾病和組織損傷，因早期缺乏診斷手段，臨床診斷難度較大，病死率高達55%～80%［1-3］。病理學檢查是診斷侵襲性真菌感染的金標準，雖診斷準確度較高，但因其為有創(chuàng)性檢查，風險較大，易增加患者痛苦，患者及其家屬難以接受，臨床應用存在一定的限制。半乳甘露聚糖抗原檢測（GM試驗）與1，3-β-D葡聚糖檢測（G試驗）是快速診斷侵襲性真菌感染的實驗室指標，具有無創(chuàng)、特異、敏感度等優(yōu)勢［4］，研究如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年2月—2019年7月廣東醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院接診的84例疑似侵襲性真菌感染患者為研究對象，女28例，男56例；年齡20～86歲，平均年齡（56.78±2.34）歲。研究經醫(yī)院倫理委員會審核批準。入組患者均簽署知情同意書且臨床資料完整。

1.2 試劑與儀器

GM試驗：重慶恩鳴醫(yī)療設備公司的Senrise酶標儀，試劑盒購買自美國BioRad公司。G試驗：Tol智能恒溫儀GKT-10MSet動態(tài)真菌檢測試劑盒和質控品、MB-80微生物動態(tài)快速檢測系統(tǒng)，均購買自北京金山川科技發(fā)展公司。

1.3 方法

（1）G試驗。使用一次性無熱源、無菌真空采集管采集受檢者3 ml靜脈血，行10 min的3 000 r/min離心操作，取上清液。取0.1 ml上清液，放入含有0.9 ml樣品處理液中，混勻后，孵育10 min，溫度為70℃。用無熱源的吸頭取0.1 ml血清樣品，加入無熱平底試管（9 mm×65 mm）中，再加入反應主劑溶液0.1 ml，混勻，插入MB-80微生物快速動態(tài)檢測系統(tǒng)中反應，自動檢出1，3-β-D葡聚糖含量。嚴格按照試劑說明書進行操作。檢測結果為＞100 pg/ml，則評定為陽性。（2）GM試驗。在待測對照血清和300μL離心血清分別加入1.5 ml聚丙烯管中，并分別在試管中加入樣本處理液100μL，充分混勻，在120℃溫度下加熱6 min，隨后放入離心機中處理10 min，獲取上清液。在GM抗體包被的微孔板中加入待測樣本，孵育90 min后洗滌，術后加入四甲基聯(lián)苯胺底物顯色，加50μL終止液終止反應，在450 mm波長下用酶標儀測定樣本與對照孔的OD值，換算血清學指數。樣本OD值與臨界值血清OD值比值為血清學指數。血清學指數I＞0.5，則評定為陽性。

1.4 觀察指標

以病理學檢查為金標準，分析GM試驗、G試驗以及并聯(lián)（兩項實驗任一一項為陽性）檢測、串聯(lián)（兩項試驗均為陽性）檢測侵襲性真菌感染效能：特異度、敏感度、準確度。以n表示總例數，a表示真陽性，b表示假陽性，c表示假陰性，d表示真陰性。準確度=（a+d）/n，敏感度=a/（a+c），特異度=d/（b+d）。

1.5 統(tǒng)計學方法

應用SPSS 21.0軟件分析數據，計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數資料以例數和百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 病理學檢查

84例患者經病理學檢查顯示侵襲性真菌感染37例（44.05%），非侵襲性真菌感染47例（55.95%）。

2.2 侵襲性真菌感染、非侵襲性真菌感染患者G試驗、GM試驗結果

侵襲性真菌感染組G試驗、GM試驗的檢測值高于非侵襲性真菌感染組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 侵襲性真菌感染、非侵襲性真菌感染患者G試驗、GM試驗結果對比（±s）

表1 侵襲性真菌感染、非侵襲性真菌感染患者G試驗、GM試驗結果對比（±s）

組別侵襲性真菌感染組（n=37）非侵襲性真菌感染組（n=47）tP G試驗結果（pg/ml）243.68±68.26 23.10±8.65 21.966 0.000 GM試驗結果0.55±0.21 0.25±0.10 8.638 0.000

2.3 G試驗、GM試驗診斷侵襲性真菌感染效能

G試驗、GM試驗并聯(lián)檢測的準確度和敏感度高于G試驗、GM試驗單一檢測和串聯(lián)檢測，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；G試驗、GM試驗并聯(lián)檢測特異度高于串聯(lián)檢測，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），而G試驗、GM試驗并聯(lián)檢測的特異度略高于G試驗、GM試驗單一檢測，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表2和表3。

表2 G試驗、GM試驗診斷侵襲性真菌感染結果 例

表3 G試驗、GM試驗診斷侵襲性真菌感染效能分析

3 討論

近年來，因細胞毒性藥物、廣譜抗菌藥物、糖皮質激素、免疫抑制劑的廣泛應用以及大劑量X線照射、器官移植、侵入性檢查和惡性腫瘤、尿毒癥等慢性消耗性疾病的增加，侵襲性真菌感染患病率呈明顯上升趨勢［5］。侵襲性真菌感染早期無典型性癥狀體征，病情復雜且隱匿，診斷難度較大，易延誤病情，預后較差。組織活檢、影像學和真菌培養(yǎng)是檢測侵襲性真菌感染的常用方式。組織活檢為侵入性檢查，而真菌培養(yǎng)耗時長，陽性率較低，具有滯后性，同時易受到環(huán)境污染，影響診斷準確性；影像學典型表現出現較晚，臨床應用受到一定限制［6］。

1，3-β-D葡聚糖為絲狀真菌和酵母菌，占真菌細胞壁成分超50%。除接合菌外，1，3-β-D葡聚糖存在于所有真菌細胞壁上，當真菌進入機體深部組織或血液后，經吞噬細胞的消化、吞噬等處理后，1，3-β-D葡聚糖可由細胞壁釋放至血液及腦脊液、胸水、腹水等體液中，增加體內1，3-β-D葡聚糖含量，其是檢測真菌感染的有效指標，可反映真菌感染情況［7］。半乳甘露聚糖是曲霉菌細胞壁的重要組成成分，當機體受到曲霉菌感染后，其能從菌絲頂端釋放入血，其抗原可在血液中持續(xù)存在1～8周。半乳甘露聚糖抗原釋放量與機體內菌量成正相關，可反映機體感染程度。本研究結果顯示，侵襲性真菌感染組G試驗、GM試驗的檢測值高于非侵襲性真菌感染組，提示G試驗、GM試驗均是診斷侵襲性真菌的有效手段。G試驗、GM試驗并聯(lián)檢測的準確度和敏感度高于G試驗、GM試驗單一檢測和串聯(lián)檢測，檢測特異度高于串聯(lián)檢測，而G試驗、GM試驗并聯(lián)檢測的特異度略高于G試驗、GM試驗單一檢測，但無明顯差異，提示G試驗、GM試驗聯(lián)合檢測可提高診斷準確度，指導治療。G試驗、GM試驗檢測物質與原理存在差異，且代謝規(guī)律不同，聯(lián)合檢測可起到優(yōu)勢互補作用，提高診斷準確性。

綜上所述，G試驗、GM試驗均可有效鑒別侵襲性真菌感染，聯(lián)合檢測具有高敏感度和準確度，可指導治療，改善預后，值得臨床推廣。