宮頸上皮內瘤變和宮頸癌患者陰道微環境因子與陰道菌群的相關性研究

張鵬玲

廣東省汕頭市潮陽區大峰醫院婦產科 515100

宮頸癌是女性生殖系統常見惡性腫瘤，流行病學統計顯示全球年新發病例近50萬，死亡超30萬，發病率與死亡率分別居女性惡性腫瘤第二位和第四位，嚴重威脅女性健康[1]。人乳頭瘤病毒(HPV)是臨床證實的宮頸癌及癌前病變獨立危險因素，但研究發現多數女性為一過性感染，發展成宮頸癌的概率不超過1%，在女性陰道生態中，可能還存在其他致癌因素或HPV感染協同因素[2]。陰道微環境因子指臨床中用以評價陰道微生態的指標，近年隨著臨床對陰道微生態與女性健康關系的重視，關于陰道微環境因子的研究增多并已經證實其與HPV感染有關[3]。陰道菌群改變也與HPV感染存在相關性，國外有學者證實乳酸桿菌含量低者更易感染HPV，HPV陽性者優勢菌群改變，菌群組成更為復雜[4]，但關于陰道微環境因子與陰道菌群關系的研究報道較少。本文現擇取我院近年收治病例對此進行分析探討，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年1—12月在我院婦科就診的74例女性為觀察對象，依據診斷結果分為三組。納入標準：于門診接受宮頸癌檢查的女性，經陰道鏡、TCT、HPV、病理學等臨床綜合檢查，明確有無宮頸病變及病變類型；有至少2年性生活史；對本研究知情同意。排除標準：宮頸病變治療史；子宮手術切除史；近2周抗生素治療史、陰道沖洗及用藥史；合并全身性感染、惡性腫瘤、免疫系統疾病等。將29例宮頸正常的女性納入A組，年齡29～63歲，平均年齡(45.9±8.4)歲。將22例臨床診斷宮頸上皮內瘤變的女性納入B組，年齡30～65歲，平均年齡(45.8±9.1)歲。將23例臨床診斷為宮頸癌的女性納入C組，年齡32～64歲，平均年齡(47.6±8.7)歲。三組基線資料兩兩比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法 采集三組女性陰道分泌物標本，常規清潔外陰，充分暴露宮頸，無菌棉棒至于陰道壁上1/3處，盡可能多的采集分泌物。取無菌塑料軟管1個，加入3ml生理鹽水，將獲取的分泌物標本釋放到軟管中，充分混勻，送檢實驗室，檢測陰道微環境因子，包括陰道清潔度(Cleanliness，CLE)、陰道酸堿度(Hydrogen ion concentration，pH)、過氧化氫(H2O2)、唾液酸苷酶(Sialidase，SIA)、白細胞酯酶(Leukocyte Esterase，LE)。另外，提出分泌物DNA，以V3～V4通用引物和PCR基因擴增儀進行V3～V4基因擴增，DNA純化回收PCR產物，利用Qubit 2.0 RNA檢測試劑盒，精準定量樣本回收的RNA。將各PCR產物以20pmol的濃度混合均勻，行Illumina測序。以97%相似性將序列聚類，分為若干個操作分類單元(OTU)，選擇豐度最高的序列作為代表進行生物學信息分析。繪制稀疏曲線，分析測序深度及標本代表性，Shannon指數表示菌群多樣性。觀察各組陰道菌群分布與陰道微環境因子的關系。

2 結果

2.1 宮頸病變與陰道微環境因子關系分析 統計顯示，A、B、C三組CLE、SIA、LE比較差異無統計學意義(χ2=0.961、1.142、1.853，P>0.05)，A、B、C三組pH、H2O2比較差異有統計學意義(χ2=4.142、3.981，P<0.05)，各組因子陽性率及組間兩兩比較數據見表1。

表1 各組陰道微環境因子陽性率統計

2.2 陰道菌群與陰道微環境因子關系分析

2.2.1 菌群聚集性：經統計，CLE Ⅰ～Ⅱ度(正常)的女性特有OTU(1 145個)多于CLE Ⅲ～Ⅳ度(異常)的女性(6個)；pH≤4.5(正常)的女性特有OTU(43個)少于pH>4.5(異常)的女性(732個)；H2O2(正常)的女性特有OTU(68個)少于H2O2+(異常)的女性(1 129個)；SIA-(正常)的女性特有OTU(7個)少于SIA+(異常)的女性(1 142個)；LE-(正常)的女性特有OTU(33個)多于LE+(異常)的女性(982個)。

2.2.2 菌群分布：統計顯示，CLE、pH、H2O2、SIA、LE異常的女性，陰道乳酸桿菌屬的菌群占比均不同程度下降，加德納菌屬占比不同程度增加。其中，乳酸桿菌屬下降最為明顯的是SIA異常者，德納菌屬增加最為明顯的是CLE異常者，詳見表2。

表2 陰道微環境因子正常與異常女性的陰道菌群

3 討論

陰道微環境因子與陰道菌群是陰道微生態系統的重要組成部分，維持陰道微生態平衡，對預防女性生殖疾病、保障女性生殖健康具有重要意義。宮頸癌前病變及宮頸癌的發生是多因素長期作用的結果，其中以HPV感染影響最大[5]，在這一過程中，陰道微環境因子與陰道菌群或多或少地發生著作用和影響。本次臨床研究發現，不同宮頸病變患者的陰道微環境因子pH、H2O2存在明顯差異，宮頸上皮內瘤變與宮頸癌患者pH與H2O2的陽性率更高。有研究發現，HPV適宜弱堿性環境生存和繁殖，陰道pH升高，會增加HPV感染或加重已有HPV感染。而H2O2能夠通過催化作用生成阻礙HPV定植與生長的HPV，H2O2水平降低也會增加HPV感染風險[6]。陰道菌群方面，陰道微生態平衡狀態下，乳酸桿菌是陰道的優勢菌。研究發現，乳酸菌可以維持陰道酸環境，抵御致病微生物入侵[7]。另外，乳酸桿菌可以通過細胞毒性作用干預和抑制宮頸癌細胞，也發揮著調節細胞菌群的作用[8]。本次臨床研究發現，陰道微環境因子異常會造成陰道菌群聚集性與分布發生較明顯改變，此類女性的陰道菌群較陰道微環境因子正常的女性而言更為豐富，原為優勢菌的乳酸桿菌占比明顯下降，加德納菌屬、嗜胨菌屬、普氏菌屬、奇異菌屬等菌群占比增加。

研究發現，乳酸桿菌可將陰道上皮的糖原降解為酸性物質，從而幫助維持陰道低pH，而陰道微環境因子異常的患者，陰道乳酸菌含量減少，雜菌增多，不僅會破壞陰道酸環境，也導致機體免疫細胞識別和清除病原體障礙，最終破壞陰道微生態[9]。另有研究發現，HPV陽性女性陰道乳酸桿菌占比較低，使用乳酸桿菌干預宮頸細胞癌，可降低HPV癌基因與細胞周期，提示乳酸桿菌可能干預調控癌細胞，與宮頸上皮內瘤變和宮頸細胞癌的發生和進展存在交互作用[10]。

綜上所述，陰道微環境因子狀態改變，會引起陰道菌群聚集性與分布發生改變，可能增加宮頸病變風險，加強陰道微環境因子與陰道菌群檢測，維持陰道微環境穩定，對預防宮頸病變具有積極作用。