不同品種芒果核多酚和黃酮含量及抗氧化活性評(píng)價(jià)

康 超，劉鳳聽，劉云芬，韋露湘，伍淑婕

（賀州學(xué)院食品與生物工程學(xué)院，食品科學(xué)與工程技術(shù)研究院，廣西賀州 542899）

芒果（Mangifera indicaL.）屬于漆樹科植物，廣泛種植于熱帶亞熱帶地區(qū)，是我國(guó)最具有經(jīng)濟(jì)價(jià)值的熱帶水果之一[1?2]。芒果屬于性平味甘、解渴生津的果品，有益胃、止嘔、防暈的功效[3]，且芒果中含有的芒果苷具有明顯的抗過氧化、保護(hù)腦神經(jīng)元和祛痰止咳的功效[4?5]。據(jù)中國(guó)藥典記載，芒果核是蒙醫(yī)習(xí)用藥之一，具有極高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值[6?8]。我國(guó)芒果種質(zhì)資源非常豐富、已有超過100個(gè)品種[9?10]。中國(guó)芒果看廣西，芒果是廣西除香蕉外最大宗的熱帶水果，栽培面積和產(chǎn)量位居全國(guó)首位，年產(chǎn)值約達(dá)5億元，具有重要的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)價(jià)值，但芒果深加工率不足10%，且約占原料30%~60%的廢棄物芒果核很少利用[11?12]。芒果核含有大量的天然活性化合物，如沒食子酸、芒果苷、香草醛、酚酸、單寧、丁香酸、類黃酮等[13?16]，具有抗炎[17?18]、止咳祛痰[19]、抑菌[20]、抗氧化活性[21?22]、抗糖尿病[23]等功效，具有很高的藥用價(jià)值。Darwish等[6]研究發(fā)現(xiàn)埃及芒果核富含酚類物質(zhì)、脂肪酸及氨基酸等營(yíng)養(yǎng)成分；Gómez-Caravaca等[24]采用HPLC-DAD-q-TOF-MS 手段分析發(fā)現(xiàn)芒果核中芒果甙、鞣花酸等含量非常高，某些多酚物質(zhì)含量媲美甚至超過抗氧化之王石榴。

近年來(lái)，我國(guó)圍繞芒果核多酚類物質(zhì)、黃酮類、吡酮類、萜類等活性成分及其抑菌、抗氧化功能進(jìn)行的相關(guān)研究越來(lái)越多。高云濤等[25]采用超聲與雙水相體系提取芒果核多酚及活性的研究，提取物可有效抑制脂質(zhì)過氧化和誘導(dǎo)紅細(xì)胞氧化損傷抑制作用；莫武桂等[26]對(duì)芒果核提取物在動(dòng)物體內(nèi)外抑菌效果及其安全性進(jìn)行了研究；本課題組前期也對(duì)芒果核活性物質(zhì)篩選、多酚物質(zhì)提取及抗氧化性能進(jìn)行了研究[27?28]，發(fā)現(xiàn)芒果核中鞣花酸、芒果苷及一些多酚類物質(zhì)等含量較高且具有良好的抗氧化活性功能，但不同品種芒果核多酚和含量及抗氧化活性影響還有待分析。因此為明確不同品種芒果核多酚和黃酮含量及抗氧化活性的影響，評(píng)價(jià)品種對(duì)抗氧化活性的影響，本實(shí)驗(yàn)以桂七、貴妃、臺(tái)農(nóng)、金煌芒、玉芒和象牙芒六個(gè)品種的芒果核作為原料，測(cè)定其多酚和黃酮含量，同時(shí)通過測(cè)定芒果核提取物對(duì)羥基自由基清除率、超氧陰離子自由基清除率、亞硝酸根離子清除率及DPPH自由基清除率，結(jié)合相關(guān)性分析比較探討不同品種的抗氧化活性差異，旨在為我國(guó)芒果核的加工利用提供一定的科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

桂七、貴妃、臺(tái)農(nóng)1號(hào)、金煌芒、玉芒、象牙芒六種品種新鮮成熟的芒果 賀州市批發(fā)市場(chǎng)，去皮去肉取核于60 ℃恒溫烘干（48 h）并粉碎后，貯于干燥避光處備用；無(wú)水碳酸鈉、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、福林酚試劑、沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品等 廣西賀州華嗵試劑有限責(zé)任公司。

DFT-50A型高速粉碎機(jī) JIUPIN/久平儀器；DHG-9145A型電熱恒溫干燥箱 上海齊欣科學(xué)儀器有限公司；SHZ-82A型數(shù)顯恒溫水浴鍋 江蘇江蘇金怡有限責(zé)任公司；BSA124S型電子天平 賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司；UV1901PC型分光光度計(jì) 上海奧析科學(xué)儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 提取液的制備 參考本課題組的前期研究結(jié)果[27?28]以及預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，芒果核多酚和黃酮物質(zhì)提取工藝條件為：料液比1:20（g/mL），乙醇體積分?jǐn)?shù)75%，微波功率280 W，微波提取時(shí)間90 s。

1.2.2 指標(biāo)測(cè)定方法

1.2.2.1 沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 參考本課題組的前期研究[27]，準(zhǔn)確稱取50 mg沒食子酸，用70%乙醇溶液定容至50 mL，即得濃度為1. 0 mg/mL沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。取9支50 mL容量瓶，分別移取0、1、2、3、4、5、7.5、10、12.5 mL上述沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，將其稀釋后配成0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10、0.15、0.20、0.25 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)液。用福林法測(cè)定吸光度值。以沒食子酸濃度為橫坐標(biāo)，765 nm處的吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并進(jìn)行回歸分析[27]。

1.2.2.2 多酚含量的測(cè)定 準(zhǔn)確移取1.2.1的待測(cè)液2.0 mL于50 mL容量瓶中，加入福林試劑1.0 mL，充分混合后靜置2 min，加入10 mL 7%的碳酸鈉溶液，充分混合后用蒸餾水定容，置30 ℃恒溫水浴中反應(yīng)1 h，不斷振蕩。取出，在波長(zhǎng)765 nm處測(cè)定吸光度值（以蒸餾水為空白對(duì)照）。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線及其回歸方程求出待測(cè)液中的多酚含量，然后計(jì)算出1 g芒果核樣品中多酚類物質(zhì)的含量（以沒食子酸計(jì)，mg/g）。

1.2.2.3 黃酮含量的測(cè)定 準(zhǔn)確稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品粉末20 mg，加入60%乙醇溶解后定容至100 mL搖勻，得到0.2 mg/mL蘆丁對(duì)照液。分別取蘆丁對(duì)照液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL放置于25 mL容量瓶中，加入1 mL 5%亞硝酸鈉溶液，搖勻放置6 min，然后加入1 mL 10%硝酸鋁溶液，搖勻放置6 min后加入4%氫氧化鈉溶液1 mL，再加入60%的乙醇定容至刻度，搖勻靜置15 min后，于500 nm波長(zhǎng)下用分分光光度計(jì)測(cè)定其吸光度值。以蘆丁濃度（mg/mL）作為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)制作蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后用吸光值計(jì)算出提取液中總黃酮濃度，再根據(jù)公式計(jì)算芒果核總黃酮量。計(jì)算公式如下：

總黃酮含量（mg/g）=C×V/W

式中：C為根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求得的樣品濃度值，單位mg/mL；V為樣品液總體積，單位mL；W為原料重量，單位g。

1.2.3 抗氧化活性的測(cè)定

1.2.3.1 羥基自由基清除能力 參考本課題組的前期研究[27]，分別取不同質(zhì)量濃度的芒果核提取物待測(cè)樣液于5只試管中，各加入硫酸亞鐵、雙氧水，靜置，10 min后加入水楊酸，靜置后在510 nm處測(cè)定吸光度A1，用蒸餾水替代水楊酸按照上述方法測(cè)定吸光度值A(chǔ)2，用蒸餾水代替待測(cè)液按上述方法測(cè)定吸光度值A(chǔ)0，VC做對(duì)照，按照下列公式求提取物對(duì)羥自由基的清除率：清除率（%）=[A0?（A1?A2）]/（A0）×100。根據(jù)不同濃度與羥基自由基清除率的關(guān)系，計(jì)算出IC50值。

1.2.3.2 超氧陰離子自由基清除能力 參考本課題組的前期研究[27?28]，取4.5 mL Tris-HCl緩沖溶液，于20 ℃水浴中預(yù)熱20 min，分別加入1 mL不同濃度的質(zhì)量濃度的芒果核提取物和0.4 mL 25 mmol/L的鄰苯三酚溶液，混勻后，于25 ℃水浴中反應(yīng)5 min，然后加入8 mol/L的HCl溶液1 mL終止反應(yīng)，在325 nm處測(cè)定吸光度A1，空白以蒸餾水代替樣品液，測(cè)定吸光度A0。樣品對(duì)超氧陰離子自由基的清除率：清除率（%）=（1?A1/A0）×100。

1.2.3.3 亞硝酸根離子清除能力 取1 mL不同濃度的芒果核提取物溶液于10 mL比色管中，加入5 μg/mL的NaNO2標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5 mL，在37 ℃水浴中反應(yīng)30 min，然后加入0.4%對(duì)氨基苯磺酸溶液1 mL，混勻，靜置5 min后加0.2%鹽酸萘乙二胺溶液0.5 mL，加水至10 mL刻度，混勻，靜置15 min，在538 nm處測(cè)定吸光度。樣品對(duì)亞硝酸根離子的清除率：清除率（%）=[（A0?A1/A2）]/ A0×100。其中，A0只加入NaNO2標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光值；A1為加入芒果核提取物后的吸光值；A2為芒果核提取物溶液本底的吸光值。

1.2.3.4 DPPH自由基清除能力 分別取2.0 mL不同質(zhì)量濃度的芒果核提取物樣液于5只試管中，各加入2 mL DPPH（0.04 mg/mL），靜置20 min在517 nm檢測(cè)吸光度A1；以無(wú)水乙醇代替DPPH，按照上述方法測(cè)定吸光度A2；做空白組按上述方法測(cè)定吸光度A0，以VC做對(duì)照，樣品對(duì)DPPH自由基的清除率：清除率（%）=[1?（A1?A2）/A0]×100。根據(jù)不同濃度與DPPH·清除率的關(guān)系，計(jì)算出IC50值。

1.3 數(shù)據(jù)處理

所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次，數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2010初步整理后，采用SPSS22.0進(jìn)行相關(guān)性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同品種芒果核提取物多酚和黃酮含量

由圖1可知，芒果品種對(duì)芒果核多酚和黃酮的含量有明顯的影響，圖1（a）中表明玉芒芒果核多酚含量高于其他五個(gè)品種，為4.31 mg/g；金煌芒、臺(tái)農(nóng)次之，分別為4.20和4.10 mg/g，桂七、象牙芒、貴妃較低，分別為3.96、3.86和3.82 mg/g；由圖1（b）可知，玉芒芒果核黃酮含量最高，為1.07 mg/g，象牙芒、金煌芒品種芒果核黃酮含量相差不大，為0.96和0.95 mg/g，桂七、臺(tái)農(nóng)和貴妃品種的芒果核黃酮含量為0.92、0.88和0.75 mg/g。芒果核多酚含量和黃酮含量因不同品種而產(chǎn)生的差異，有可能是因?yàn)槊⒐贩N的產(chǎn)地氣候類型差異、生態(tài)土壤環(huán)境對(duì)應(yīng)性各不同，致使產(chǎn)量和品質(zhì)上的差異[29]，進(jìn)而導(dǎo)致多酚、黃酮含量富集不同，但其富集機(jī)制仍有待下一步的研究。

圖1 不同品種芒果核多酚和黃酮含量Fig.1 Effects of different varieties of mango on the polyphenol and flavonoid content of mango seeds

2.2 不同品種芒果核提取物對(duì)羥基自由基清除能力的影響

比較分析不同品種芒果核提取物對(duì)羥基自由基清除能力的影響，結(jié)果如圖2所示。玉芒果核提取物清除能力最強(qiáng)，達(dá)到90.1%，金煌芒次之（87.1%）；桂七和金煌芒的較為接近，為85.7%；象牙芒（84.5%）、臺(tái)農(nóng)（83.7%）稍微弱于前兩者；而貴妃（82.5%）對(duì)羥基自由基清除能力最弱。IC50常用來(lái)評(píng)價(jià)抗氧化劑對(duì)自由基的清除能力和抗氧化作用，即清除率達(dá)50%時(shí)樣品的濃度[30?31]，六個(gè)品種芒果核提取物的IC50值及其差異顯著性如表1所示。IC50值越低則說(shuō)明抗氧化能力越強(qiáng)，從表1中可以看出各樣品IC50值大小，對(duì)比IC50值大小說(shuō)明不同品種芒果核提取物對(duì)羥基自由基清除能力的強(qiáng)弱為：玉芒>臺(tái)農(nóng)>金煌芒>桂七>貴妃>象牙芒。玉芒與象牙芒之間有顯著性差異，說(shuō)明玉芒芒果核提取物具有較好的抗氧化能力，對(duì)比前面多酚黃酮含量分析結(jié)果推測(cè)，有可能多酚含量的高低決定羥基自由基清除能力強(qiáng)弱，也有可能不同品種及種質(zhì)資源的差異影響羥基自由基清除能力大小。

表1 六個(gè)品種芒果核提取物的IC50及差異顯著性Table 1 IC50 value and the significance of six kinds of mango kernel seeds

圖2 不同品種芒果核對(duì)羥基自由基清除率的影響Fig.2 Effects of different varieties of mango on clearance of hydroxyl radi cal of mango seeds

2.3 不同品種芒果核提取物對(duì)超氧陰離子自由基清除能力的影響

比較分析不同品種芒果核提取物對(duì)超氧陰離子自由基清除能力的影響，結(jié)果如圖3所示。玉芒、象牙芒果核提取物清除能力最強(qiáng)，分別為83.9%、83.6%，金煌芒和臺(tái)農(nóng)次之，分別為82.2%、81.3%，貴妃對(duì)超氧陰離子自由基清除能力最弱。

圖3 不同品種芒果核對(duì)超氧陰離子自由基清除率的影響Fig.3 Effects of different varieties of mango on clearance of super-oxide anion radical free radical of mango seeds

2.4 不同品種芒果核提取物對(duì)亞硝酸根離子清除能力的影響

比較分析不同品種芒果核提取物對(duì)亞硝酸根離子清除能力的影響，結(jié)果如圖4所示。玉芒、果核提取物清除能力最強(qiáng)為67.1%，金煌芒和象牙芒次之，分別為50.9%和49.6%，臺(tái)農(nóng)、貴妃和桂七對(duì)亞硝酸根離子清除能力較弱。

圖4 不同品種芒果核對(duì)亞硝酸根離子自由基清除率的影響Fig.4 Effects of different varieties of mango on clearance of nitrite ion free radical of mango seeds

2.5 不同品種芒果核提取物對(duì)DPPH自由基清除能力的影響

比較分析不同品種芒果核提取物對(duì)DPPH自由基清除能力的影響，結(jié)果如圖5所示。玉芒芒果核提取物清除能力最強(qiáng)為91.2%，金煌芒、桂七和象牙芒次之，分別為88.9%、88.3%和85.3%，臺(tái)農(nóng)和貴妃對(duì)DPPH自由基離子清除能力較弱。用IC50表示其抗氧化活性強(qiáng)弱，六個(gè)品種芒果核提取物的IC50值及其差異顯著性如表2所示。對(duì)比IC50值大小說(shuō)明不同品種芒果核提取物對(duì)DPPH自由基清除能力的強(qiáng)弱為：玉芒>桂七>金煌芒>象牙芒>貴妃>臺(tái)農(nóng)。貴妃和臺(tái)農(nóng)無(wú)顯著性差異，玉芒、桂七、金煌芒與臺(tái)農(nóng)之間有顯著性差異，且清除DPPH自由基能力的作用分別比貴妃芒高出55%、53%和52%，說(shuō)明前三種品種芒果核提取物具有較好的抗氧化能力。

圖5 不同品種芒果核對(duì)DPPH自由基清除率的影響Fig.5 Effects of different varieties of mango on clearance of DPPH free radical of mango seeds

表2 六個(gè)品種芒果核提取物的IC50及差異顯著性Table 2 IC50 value and the significance of six kinds of mango kernel seeds

2.6 抗氧化活性與多酚、黃酮的相關(guān)性分析

表3 中采用Pearson’s 相關(guān)性系數(shù)分析了6種不同品種的芒果果核中羥基自由基清除率、超氧陰離子自由基清除率與多酚、黃酮含量的相關(guān)性。結(jié)果表明，黃酮含量與羥基自由基清除率（P<0.05）、超氧陰離子自由基清除率（P<0.01）顯著相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.893和0.943，多酚含量與羥基自由基清除率顯著（P<0.05）相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.837，與超氧陰離子自由基清除率相關(guān)性較低；多酚、黃酮含量與亞硝酸根離子清除率相關(guān)性都較低。以上說(shuō)明黃酮對(duì)芒果核抗氧化能力影響較大，其含量的變化有可能是導(dǎo)致不同品種芒果核抗氧化能力差異的重要因素。

表3 羥基自由基清除率、超氧陰離子自由基清除率與多酚含量和黃酮含量的相關(guān)性分析Table 3 Correlation of coefficients between ·OH clearance, clearance and the contents of polyphenol,flavonoid

表3 羥基自由基清除率、超氧陰離子自由基清除率與多酚含量和黃酮含量的相關(guān)性分析Table 3 Correlation of coefficients between ·OH clearance, clearance and the contents of polyphenol,flavonoid

注:“*”表示在0.05水平（雙側(cè)）上顯著相關(guān)；“**”表示在0.01水平（雙側(cè)）上極顯著相關(guān)。

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利用SPSS軟件進(jìn)行聚類分析并構(gòu)建樹狀圖，結(jié)果如圖6，金煌芒和象牙芒、貴妃和臺(tái)農(nóng)聚類顯示其相互間可能親緣關(guān)系較近；根據(jù)文獻(xiàn)[32]芒果種質(zhì)資源性狀評(píng)價(jià)及親緣關(guān)系分析研究發(fā)現(xiàn)顯示金煌芒和象牙芒的遺傳相似系數(shù)差別較小，說(shuō)明二者遺傳背景相似，親緣關(guān)系近；貴妃、臺(tái)農(nóng)、桂七聚在一起，有可能芒果品種遺傳組分更加相似。

圖6 聚類分析Fig.6 Cluster analysis

3 結(jié)論

本研究探索了不同品種芒果核多酚、黃酮含量及抗氧化活性差異，研究發(fā)現(xiàn)：玉芒芒果核提取物多酚含量（4.31 mg/g）明顯高于其他幾種類型，黃酮含量（1.07 mg/g）亦有類似趨勢(shì)；不同抗氧化評(píng)價(jià)體系和相關(guān)性分析結(jié)果表明，芒果核抗氧化活性與多酚及黃酮表現(xiàn)出良好的相關(guān)性，尤其是黃酮對(duì)芒果核抗氧化能力影響較多酚物質(zhì)更強(qiáng)，其含量的變化有可能是導(dǎo)致不同品種芒果核抗氧化能力差異的重要因素。以上研究結(jié)果為芒果品種選育、品種結(jié)構(gòu)優(yōu)化、加工副產(chǎn)物綜合利用提供科學(xué)依據(jù)。