健宮散對產后子宮炎奶牛生殖激素及子宮形態的影響

喬彥杰，張保軍，劉賢俠，連科迅，谷新利

(石河子大學動物科技學院，新疆 石河子 832003)

在奶牛飼養過程中，大約75%的奶牛疾病在圍產期發生，其中子宮炎是伴隨著機體生殖激素紊亂、子宮形態改變的機體免疫紊亂病，且造成機體子宮復舊延遲和繁殖障礙[1]。生產中治療子宮炎常用的抗生素和激素療法，易造成耐藥病菌的傳播以及畜產品藥物殘留問題，對公共健康構成了嚴重的威脅。所以開發安全有效，替代抗生素的新型藥物成為畜牧領域的研究熱點[2]。

健宮散是益母草、桃仁、川芎等中藥組成的復方散劑，其遵循“辨證論治”的原理，采用活血化瘀、補血補氣的原則，對預防治療子宮炎有明顯效果。為探討健宮散治療奶牛子宮炎的作用機理，本試驗通過監測灌服健宮散后子宮炎奶牛生殖激素和子宮形態學變化，旨在研究健宮散對子宮炎奶牛生殖激素及形態學指標的影響，以期為中藥防治奶牛子宮炎提供技術支撐，也為臨床應用該藥提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 主要試劑 健宮散由石河子大學動物科技學院中獸醫課題組研制，藥材購自石河子市醫藥公司；孕酮(P4)、前列腺素F2α(PGF2α)、前列腺素E2(PGE2)ELISA試劑盒，均購自上海藍基生物科技有限公司；一次性采血管，購自三門縣民生醫藥有限公司。

1.2 主要儀器 50 s型Tringa Vet獸用便攜式B超儀，荷蘭Piemed ICAL公司產品；-80 ℃超低溫冰箱，美國賽默飛世爾科技公司產品；PowerWave XS2 BioTek型酶標儀，美國Bio-Tek公司產品；Eppendorf Research型移液器，艾本德中國有限公司產品。

1.3 試驗動物 新疆石河子地區某奶牛場18頭年齡、胎次、體況評分差異不顯著的荷斯坦奶牛。

1.4 試驗方法

1.4.1 試驗設計 通過50 s型Tringa Vet獸用便攜式B超儀檢查，將奶牛分為患病組、治療組和正常組，每組各6頭。治療組平均年齡為5～6歲，患病組平均年齡為5～6歲，正常組平均年齡為4～5歲。正常組體況評分在2.8～3.8，其中2、3、5胎各2頭。患子宮炎奶牛12頭，6頭作為治療組，6頭作為患病組，其中2胎和3胎各3頭、4胎和5胎及6胎 各2頭，體況評分在2.9～4.5。

1.4.2 采血、投藥、B超檢查時間 治療組在每天08:00—11:00灌服1次健宮散400 g/頭，連續1個 療程(7 d)。治療組灌服健宮散前通過尾靜脈采血1次，用藥中期采血1次(灌服中藥的第3天)，灌服健宮散結束后第1、4、7、11、15天和第20天各采血1次，每次10 mL/頭，共采血8次。正常組、患病組則每天灌服1次等量的無菌生理鹽水，灌藥時間與采血時間同治療組。產后第7、9、14、21、27、35天和第42天跟蹤測量三組奶牛子宮頸縱徑和子宮角壁厚。

1.4.3 ELISA 檢測P4、PGF2α、PGE2含量 收集各組奶牛血液樣品，血清自然析出后分裝于1.5 mL離心管中，按照 ELISA 試劑盒說明書操作檢測血清中P4、PGF2α、PGE2的含量。

1.4.4 B超檢查操作方法 (1)保定牛和準備：將奶牛驅趕至頸枷、臥床或者通道內，奶牛后大腿保定，或在臥床以隔欄分開后腿保定。經直腸路徑超聲檢查，帶上塑料長臂手套，涂抹石蠟油，五指并攏插入奶牛的肛門，將直腸內的糞便清理干凈，方便檢查并減少探頭磨損。(2)子宮頸縱徑的測量方法：先找到子宮頸的位置，確定探頭掃查方向。以骨盆聯合或骨盆底為分界線，將探頭縱向放在子宮頸中部，以直腸壁內側與子宮頸接觸點為測量點，用B超測量子宮頸縱向直徑，保存圖像，并記錄。(3)子宮角壁厚的測量方法：將探頭放置在子宮角基部進行測量，確定進入子宮壁與出子宮壁位置，直腸壁內側與子宮角接觸點顯示較強回聲，出子宮壁漿膜也顯示強回聲，兩者之間為子宮角壁厚。

1.5 統計分析 相關數據用SPSS 17.0統計軟件中的One-Way ANOVA的運算模塊進行單因素方差分析，用Duncan’s法進行多重比較。結果以平均值±標準差形式表示，以P<0.05 表示差異顯著。

2 結果

2.1 健宮散治療奶牛產后子宮炎對P4、PGF2α、PGE2的影響 由表1可知，用藥中治療組P4水平低于正常組、患病組(P<0.05)，其他各時間點三組之間P4水平差異顯著(P<0.05)。用藥前正常組PGF2α水平高于治療組、患病組(P<0.05)，用藥中、停藥后1、4、7、11、15 d和20 d治療組PGF2α水平高于正常組、患病組(P<0.05)。用藥前、用藥中、停藥后1、4、7、11 d和15 d三組之間PGE2水平差異顯著(P<0.05)，停藥后20 d治療組PGE2水平低于患病組(P<0.05)，而正常組PGE2水平與治療組、患病組差異不顯著(P>0.05)。試驗結果表明，子宮炎奶牛用藥后促進PGF2α分泌，抑制P4生成。

表1 健宮散治療奶牛產后子宮炎對P4、PGF2α、PGE2的影響Table 1 Effect of Jiangong powder on P4,PGF2α and PGE2 of dairy cows with postpartum hysteritis

健宮散治療后，P4水平在停藥后1 d達到峰值，為(10.76±0.05)ng/mL；PGF2α水平在停藥后4 d達到峰值，為(7.62±0.05)ng/mL；PGE2水平在停藥后4 d達到峰值，為(2.58±0.01)ng/mL；其中治療組P4、PGE2峰值顯著低于正常組、患病組(P<0.05)，PGF2α的峰值顯著高于正常組、患病組(P<0.05)，PGF2α、PGE2水平在同一時間點達到峰值。

2.2 健宮散治療奶牛產后子宮炎對子宮頸的影響 由表2可知，在產后7～42 d正常組、患病組、治療組奶牛子宮頸縱徑均呈下降趨勢，且在42 d分別恢復至2.72 cm、2.87 cm和2.67 cm。

表2 健宮散治療奶牛產后子宮炎對子宮頸的影響Table 2 Effect of Jiangong powder on the cervix of dairy cows with postpartum hysteritis (cm)

2.3 健宮散治療奶牛產后子宮炎對子宮角的影響 由表3可知，在產后21～42 d正常組、患病組、治療組奶牛子宮角壁厚均呈下降趨勢，且在42 d時分別恢復為3.08 cm、3.36 cm和3.14 cm。

表3 健宮散治療奶牛產后子宮炎對子宮角的影響Table 3 Effect of Jiangong powder on cornua uteri of dairy cows with postpartum hysteritis of cow (cm)

3 討論

3.1 健宮散治療奶牛產后子宮炎對P4、PGF2α、PGE2的影響 研究表明，P4可抑制子宮收縮、促進子宮內膜的上皮組織及肌層的增生和分化。當其分泌增多，子宮免疫防御機能下降，易發生感染[3]。同時P4還可以刺激前列腺素合成酶的活動，增加前列腺素的釋放量[4]。前列腺素不僅可以調控發情周期，而且是子宮炎癥反應中關鍵的免疫調節因子。高水平的PGF2α促進子宮收縮復舊，而高水平PGE2會增加細菌感染的嚴重程度[5]。朱永剛等[6]報道，胎衣不下奶牛血清中P4水平高于正常奶牛，PGF2α含量低于正常奶牛。Melendez等[7]研究發現，健康奶牛在產后0～7 d PGF2α水平處于上升階段，子宮炎奶牛PGF2α水平高于正常牛，產后8～10 d子宮炎奶牛和健康奶牛PGF2α水平均下降。王建永等[8]研究發現，胎衣不下組奶牛胎盤組織中的PGE2的含量低于健康組奶牛。本研究表明，正常組P4水平低于患病組，PGF2α水平顯著高于患病組，與朱永剛等[6]研究結果一致；正常組PGE2水平顯著低于患病組，與王建永等[8]研究結果不一致，究其原因可能是血清中激素水平調節全身體液免疫，胎盤組織中激素是調節局部組織免疫，因此造成血清與胎盤組織中PGE2水平有一定的差異。

研究表明，益母草可以調節性激素水平，促進性激素的分泌[9]。余青等[10]研究發現，當歸-川芎可降低PGF2α濃度；姚熒等[11]研究發現，川芎降低卵巢內PGE2含量，提高子宮孕酮受體特異結合量；李晶晶等[12]研究發現，甘草能降低小鼠血清中PGE2水平；王麗琴等[13]研究發現，當歸注射液可以提高P4含量。本研究表明，治療組停藥后PGF2α水平顯著高于正常組和患病組，P4、PGE2水平顯著低于正常組和患病組，可能是健宮散中成分單味藥或藥物配伍后發揮作用，改善子宮炎奶牛血清中激素失衡狀態。

3.2 健宮散治療奶牛產后子宮炎對子宮形態學指標的影響 應用B超對三組奶牛子宮進行動態監測，發現產后7～42 d正常組、患病組與治療組子宮頸縱徑、子宮角壁厚均呈下降趨勢。胡路鋒[14]研究發現，初產、經產子宮炎奶牛子宮頸縱徑大于正常奶牛。Heppelmann等[15]在產后第8～65天 對子宮炎、胎衣不下奶牛進行B超檢查，發現產后11 d子宮炎奶牛子宮角壁厚顯著大于健康奶牛，且產后健康奶牛子宮角壁恢復更快。這說明子宮炎嚴重影響奶牛子宮形態的恢復。研究表明，補氣藥可以增加化瘀作用，促進炎癥消散并提高機體免疫力；活血化瘀藥可加快血液循環，促進組織修復再生[16]。有研究報道，益母草水提物對未孕大鼠正常子宮具有興奮作用，對痙攣子宮具有舒張作用[17]。王華等[18]研究發現，當歸注射液在離體子宮內表現出抑制作用，但是在體內子宮表現興奮作用。鐘克炎等[19]研究發現，大劑量川芎提取液可抑制大鼠在體子宮平滑肌收縮。本試驗中治療組子宮頸縱徑、子宮角壁厚恢復更快。可能與健宮散中含有益母草、川芎等成分有關，通過藥物互相作用使子宮興奮，促進收縮與舒張，利于子宮組織的修復和子宮內細菌的排出，從而達到治療效果。