新疆烏魯木齊寵物源常見病原菌的耐藥性調查

郭 菲，林亞軍，王 凱，王舒豐，姚曉慧，馬木爾·阿克木漢，夏利寧

(1.新疆農業大學動物醫學學院，新疆 烏魯木齊 830052；2.新疆阿勒泰職業技術學院，新疆 阿勒泰 836599)

隨著寵物越來越多的進入人們的家庭生活，細菌交叉感染在寵物病中扮演著重要角色，由于寵物接觸的抗菌藥物與用于人類治療的某些藥物類似[1]，因此存在由寵物源耐藥菌傳遞給人，致使人無藥可用的風險。據統計，目前已發現通過動物傳染給人類的疾病至少有816種，對動物疾病的預防和控制普及不到位，則會為疾病的傳播埋下很多隱患[2]。歐美等發達國家開始重視小動物的細菌耐藥問題，已報道許多有關寵物源細菌耐藥性的研究[3]。國內對細菌耐藥的研究主要在人醫及畜禽臨床用藥方面，少見對寵物源細菌耐藥性的研究報道。本試驗通過調查寵物源大腸桿菌、沙門菌、葡萄球菌對常用抗菌藥物的敏感性，為小動物臨床合理使用抗菌藥物提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 樣品采集 2015年冬季和2016年春季在烏魯木齊市多家寵物醫院采集樣品，將滅菌肛拭子插入犬和貓的直腸采集新鮮糞便。共采集170份肛拭子樣品，其中含有149份犬源樣品，21份貓源樣品，從樣品中分離沙門菌、大腸桿菌、葡萄球菌。

1.2 菌株及培養基 大腸桿菌ATCC25922標準菌株和金黃色葡萄球菌ATCC29213標準菌株為質控菌，均購自杭州天和微生物試劑有限公司。麥康凱培養基、普通肉湯和Mueller-Hinton(MH)培養基、瓊脂粉、Nutrient Broth(NB)營養肉湯、氯化鎂孔雀綠增菌液(MM)、SS瓊脂、沙門菌顯色培養基，均購自北京奧博星生物技術有限責任公司。Baird-Parker瓊脂培養基，購自青島高科園海博生物技術有限公司。

1.3 藥物 β-內酰胺類：頭孢噻呋(Ceftiofur，CEF)、苯唑西林(Oxacillin，OX)、阿莫西林/克拉維酸(Amoxicillin/Clavulanic acid，A/C)和氨芐西林(Ampicillin，AMP)；四環素類：四環素(Tetracycline，TET)；安莎霉素類：利福平(Rifampicin，RA)；酰胺醇類：氟苯尼考(Florfenicol，FLR)；林可胺類：克林霉素(Clindamycin，CLDM)；氟喹諾酮類：諾氟沙星(Norfloxacin，NOF)、環丙沙星(Ciprofloxacin，CIP)、恩諾沙星(Enrofloxacin，ENR)、左氧氟沙星(Levofloxacin，LEV)；氨基糖苷類：卡那霉素(Kanamycin，KANA)、安普霉素(Apramycin，APR)、慶大霉素(Gentamicin，GEN)和阿米卡星(Amikacin，AMK)，上述藥品均購自中國獸醫藥品監察所，且均為標準品。

1.4 寵物源常見病原菌的分離鑒定 將采集糞樣的肛拭子在1 mL滅菌MH肉湯中增菌，增菌液在麥康凱瓊脂平板上劃線并挑取單菌落做革蘭染色鏡檢，進行大腸桿菌的分離；將采集糞樣的肛拭子在含有7.5% NaCl的MH營養肉湯中增菌，增菌液在Baird-Parker瓊脂培養基上劃線，經革蘭染色鏡檢及觸酶試驗，進行葡萄球菌的分離；將采集糞樣的肛拭子在MM肉湯中增菌，在SS瓊脂上劃線并經PCR鑒定，進行沙門菌的分離，鑒定后的病原菌經60%甘油保菌于-20 ℃保存備用。

1.5 藥敏試驗及結果判定 按照美國臨床實驗室標準委員會(Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI)[4]推薦的瓊脂稀釋法對分離的大腸桿菌、沙門菌和葡萄球菌進行臨床常用抗菌藥物的最小抑菌濃度(Minimal inhibitory concentrations,MICs)值測定，以耐藥、中介和敏感3種形式記錄結果。

1.6 統計分析 采用SPSS 20.0軟件進行耐藥率差異統計，用卡方檢驗做差異顯著性分析，結果以平均值±標準差表示，以P<0.05作為差異顯著性判斷標準。

2 結果

2.1 寵物源常見病原菌分離鑒定 在烏魯木齊市5家寵物醫院采集寵物肛拭子170份，對采集的樣品進行葡萄球菌、大腸桿菌和沙門菌的分離，分離率分別為葡萄球菌90.6%(154/170)、大腸桿菌72.9%(124/170)和沙門菌25.9%(44/170)。

2.2 寵物源常見病原菌對抗菌藥物的耐藥性 寵物源大腸桿菌對環丙沙星(98.4%)、氨芐西林(97.6%)、氟苯尼考(92.0%)這3種藥物的耐藥率均在90.0%以上，對阿莫西林/克拉維酸(81.4%)、慶大霉素(75.8%)、恩諾沙星(71.0%)、諾氟沙星(70.2%)這4種藥物的耐藥率均在70.0%以上，對頭孢噻呋(39.5%)、安普霉素(25.0%)、阿米卡星(12.0%)耐藥率在40.0%以下。

寵物源葡萄球菌對苯唑西林(94.2%)耐藥率較高，對四環素(60.4%)、氟苯尼考(58.4%)、氧氟沙星(57.1%)、克林霉素(55.8%)耐藥率均在50.0%以上；對利福平和阿米卡星的耐藥率較低，均在30.0%以下。

寵物源沙門菌對氟苯尼考、諾氟沙星、環丙沙星、四環素、卡那霉素這5種藥物耐藥率高達100%，對氨芐西林(95.0%)、阿莫西林/克拉維酸(97.7%)、恩諾沙星(93.0%)這3種藥物耐藥率均在90.0%以上，對慶大霉素、安普霉素、阿米卡星與頭孢噻呋敏感率高。

卡方檢驗結果如表1所示，葡萄球菌分離株對阿米卡星、氟苯尼考耐藥率顯著高于大腸桿菌和沙門菌(P<0.05)；沙門菌和大腸桿菌分離株對恩諾沙星和阿莫西林/克拉維酸耐藥率顯著高于葡萄球菌(P<0.05)。此外，葡萄球菌分離株對阿米卡星、慶大霉素、氟苯尼考和恩諾沙星的中介率也顯著高于大腸桿菌和沙門菌(P<0.05)。

表1 烏魯木齊寵物源常見病原菌耐藥結果Table1 Drug resistance results of common pathogens in pet sources in Urumqi (%)

2.3 寵物源常見病原菌多藥耐藥及耐藥譜型 結果如圖1所示，寵物源常見病原菌多藥耐藥情況嚴重，其中寵物源大腸桿菌以8耐為主，達到25.8%，其次是7耐和6耐，多藥耐藥率分別為17.7%和16.1%，并檢出3株超級耐藥菌株，對被檢的10種抗菌藥物都耐藥；寵物源葡萄球菌多藥耐藥分布較廣，在0～11耐均有分布，以4耐和6耐多藥耐藥為主，分別為15.0%和13.0%，檢出8株超級耐藥菌，對被檢的11種抗菌藥物都耐藥；寵物源沙門菌多藥耐藥在6～10 耐分布，多藥耐藥以8耐為主，達88.6%。

圖1 寵物源大腸桿菌、葡萄球菌及沙門菌多藥耐藥結果Fig.1 The multi-drug resistance results of Escherichia coli,Staphylococcus and Salmonella isolated from pets

耐藥譜型結果顯示，寵物源病原菌耐藥譜型多樣化，以葡萄球菌耐藥譜型最多，154株葡萄球菌對被檢的抗菌藥物共檢出81種耐藥譜型，以2耐、4耐 和6耐為主，2耐譜型中以LEV-FLR為主，占3.9%(6/154)，4耐譜型中以TET-FLR-LEV-OX為主，占3.9%(6/154)，6耐譜型中以TET-FLR-LEV-OX-CLDM-CEF為主，占3.2%(5/154)；大腸桿菌譜型次之，共有40種譜型，以6耐、7耐和8耐為主，6耐 譜型中以AMP-FLR-A/C-ENR-NOF-CIP為主，占4.0%(5/124)，7耐譜型以AMP-FLR-A/C-GEN-ENF-NOF-CIP為主，占12.9%(16/124)，8耐譜型以AMP-FLR-A/C-GEN-CEF-ENR-NOF-CIP和AMP-FLR-A/C-APR-GEN-ENR-NOF-CIP為主，分別占8.9%(11/124)和11.3%(14/124)；而44株沙門菌僅有4種耐藥譜型，以8耐譜型AMP-FLR-A/C-ENR-NOF-CIP-TET-KANA為主，占88.6%(39/44)。

3 討論

本試驗從同一批寵物糞便樣本中進行寵物源常見3種病原菌的分離鑒定，結果顯示：3種病原菌分離率從高到低依次為葡萄球菌(90.6%)、大腸桿菌(72.9%)、沙門菌(25.9%)，對葡萄球菌的分離率顯著高于吳鐵花等[5](10.7%)、郭立軍[6](71.4%)和馮言言等[7](16.0%)的報道，其原因可能是不同報道中對葡萄球菌的分離鑒定方法不同。此外，烏魯木齊市寵物源大腸桿菌的分離率顯著高于其他地區的報道，文英等[8]報道的青海省寵物源大腸桿菌分離率為27.9%，吳萍萍[9]報道的安徽地區寵物源大腸桿菌的分離率為47.6%，本試驗中寵物源大腸桿菌的分離率與劉果等[10]報道長春地區寵物源大腸桿菌分離率(70.4%)基本一致。造成分離率存在較大差異的原因可能是不同地區所采集的寵物健康狀態不同。查閱相關文獻可知，寵物源沙門菌的分離率整體較低，如陳傳榮等[11](2.3%，17/746)、顏衛等[12](1.91%，13/682)報道的寵物源沙門菌的分離率均未超過5.0%，而李玉蘭[13]報道的青海省寵物源沙門菌的分離率為18.8%(23/122)，本試驗中寵物源沙門菌的分離率(25.9%，44/170)與龔大春等[14](27.8%，10/36)報道的基本一致。

寵物源不同病原菌對被檢抗菌藥物存在不同程度的耐藥，多藥耐藥集中在6～8耐，耐藥譜型多樣化，整體耐藥嚴重程度為沙門菌>大腸桿菌>葡萄球菌。44株寵物源沙門菌對被檢的7種抗菌藥物耐藥率超過90.0%，本試驗結果與林亞軍等[15]報道的對阿米卡星、頭孢噻呋的藥敏試驗結果一致，對阿莫西林/克拉維酸、氨芐西林耐藥性結果與王元蘭[16]報道的合肥地區寵物源沙門菌一致，但高于陳傳榮等[11]報道的17株寵物源沙門菌對氨芐西林的耐藥結果。124株寵物源大腸桿菌對被檢的7種抗菌藥物的耐藥率在60.0%以上，部分抗菌藥物耐藥結果高于文英等[8]報道的百株寵物源大腸桿菌的耐藥率以及吳立婷[17]報道的寵物源大腸桿菌的耐藥率(6.9%72.2%)，與張美君等[18]報道的寵物源大腸桿菌對安普霉素、阿米卡星的耐藥結果相符；但對頭孢噻呋的耐藥率低于師志海等[19]的報道，對阿莫西林/克拉維酸(73.6%)、頭孢菌素(49.5%)、慶大霉素(87.9%)的耐藥率則低于波蘭Rzewuska等[20]報道的犬貓源大腸桿菌。154株寵物源葡萄球菌對被檢的5種抗菌藥物耐藥率超過50.0%，寵物源葡萄球菌對苯唑西林的耐藥率高達94.3%，與軒慧勇等[21]等報道的寵物源葡萄球菌對臨床常用抗菌藥物耐藥結果一致，對克林霉素(55.2%)和四環素(59.7%)的耐藥率低于馮言言等[7]報道的耐藥率(對這2種抗菌藥物的耐藥率都超過80.0%)，對阿莫西林/克拉維酸的耐藥率(48.1%)低于龔大春等[14]的報道(84.5%)。造成寵物源常見病原菌耐藥情況及多藥耐藥率如此高的原因可能是家庭式飼養使寵物自身免疫力低，國家藥物監管制度不完善，診療機構肆意加大藥物使用劑量，導致寵物耐藥情況日益嚴重。

綜上可知，烏魯木齊市寵物糞便中3種常見病原菌攜帶率較高，且沙門菌與大腸桿菌對部分被檢抗菌藥物的耐藥率高達90.0%以上。寵物源常見病原菌多藥耐藥譜型寬，其中沙門菌多藥耐藥譜型集中在8耐，且檢出8株對11種抗菌藥物都耐藥的超級耐藥菌。表明新疆烏魯木齊寵物源3種常見病原菌耐藥情況較為嚴重，應加強寵物源菌耐藥性的監控力度。此外，臨床治療中應避免重復使用同一種藥物，規范使用抗菌藥物，從而減少耐藥細菌的產生和傳播。