2018—2019年山東部分地區(qū)規(guī)模化奶牛場(chǎng)牛病毒性腹瀉病毒感染血清學(xué)調(diào)查

張宇名，王君娜，遲麗麗，李樹凡，陳志遠(yuǎn)，王 昆，王廣輝，劉錫武，孫翔翔，樊曉旭，徐守振

(1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，山東 青島 266109；2.青島高通農(nóng)業(yè)科技有限公司，山東 青島 266109；3.青島市畜牧獸醫(yī)研究所，山東 青島 266041；4.中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心，山東 青島 266032)

牛病毒性腹瀉病-黏膜病(Bovine viral diarrhea-mucosal disease,BVD-MD)是由牛病毒性腹瀉病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)引起的傳染病，各年齡段牛都易感染，以幼齡牛易感性最高[1]。患病動(dòng)物和帶毒動(dòng)物為主要傳染源，可通過牛胎盤垂直傳播，亦可通過乳產(chǎn)品、牛血清、冷凍胚胎、精液等傳播，是牛源生物制品潛在污染源。自20世紀(jì)80年代我國(guó)首次報(bào)道牛病毒性腹瀉病后，相繼在一些地區(qū)發(fā)生該病，給養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失[2]。我國(guó)BVDV流行情況較為廣泛，2018年Ran等對(duì)我國(guó)奶牛BVDV感染流行病學(xué)的系統(tǒng)評(píng)估中顯示，我國(guó)奶牛BVDV混合流行率為53.0%，北方省份奶牛群平均陽性率達(dá)72.2%，山東省牛群BVDV陽性率達(dá)83.3%，位居全國(guó)第三[3]。Deng等對(duì)2017—2019年我國(guó)19個(gè)省的92個(gè)奶牛場(chǎng)、500多頭奶牛開展BVDV流行情況及遺傳多樣性調(diào)查，結(jié)果顯示，耳組織樣本總體BVDV抗原陽性率為2.22%，山東以8.33%位居第2位；大缸奶樣本總體BVDV抗原陽性率達(dá)43.74%，我國(guó)東部省份BVDV平均抗原陽性率達(dá)41.19%，山東地區(qū)為57.14%，流行株涵蓋BVDV1型的8個(gè)亞型[4]。當(dāng)前，我國(guó)牛病毒性腹瀉病-黏膜病防疫形勢(shì)不容樂觀，尚未見針對(duì)山東地區(qū)各地市BVDV流行情況的調(diào)查。為了解山東地區(qū)BVDV最新的流行狀況，本調(diào)查采用商品化酶聯(lián)免疫吸附(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)試劑盒對(duì)2018—2019年山東省部分地區(qū)規(guī)模化奶牛場(chǎng)送檢樣品的BVDV感染情況進(jìn)行了檢測(cè)，以期為山東省BVDV的防控與凈化提供幫助。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品 2018年4月—2019年12月，山東省13個(gè)地市規(guī)模化奶牛場(chǎng)送檢樣品共6 780份，其中：BVDV抗原檢測(cè)樣品數(shù)為5 901份(包含5 832份血樣、69份耳組織)，抽樣針對(duì)全群牛只，不限奶牛月齡大小；BVDV抗體檢測(cè)樣品數(shù)為879份(包含823份血樣、56份奶樣)，血樣抽樣針對(duì)11～13月齡的青年牛，奶樣抽樣自大缸奶，所檢樣本牛均未進(jìn)行過疫苗免疫。

1.1.2 試劑盒 ELISA試劑盒，購自IDEXX公司，BVDV抗原檢測(cè)試劑盒型號(hào)為BVDV Ag-9943830；BVDV抗體檢測(cè)試劑盒型號(hào)為BVDV Ab99-44000。

1.2 方法

1.2.1 BVDV抗原檢測(cè) 采用雙抗體夾心ELISA法對(duì)不同地區(qū)、不同季度、不同飼養(yǎng)規(guī)模[小規(guī)模牧場(chǎng)(100～500頭)、中規(guī)模牧場(chǎng)(501～999頭)及大規(guī)模牧場(chǎng)(1 000頭以上)][5]的送檢樣品進(jìn)行BVDV抗原檢測(cè)，并進(jìn)行分類匯總，具體方法按照IDEXX公司牛病毒性腹瀉病病毒抗原檢測(cè)試劑盒說明書進(jìn)行。

1.2.2 BVDV抗體檢測(cè) 采用間接ELISA法對(duì)不同地區(qū)、不同季度、不同飼養(yǎng)規(guī)模的送檢樣品進(jìn)行BVDV抗體檢測(cè)，并進(jìn)行分類匯總，具體方法按照IDEXX公司牛病毒性腹瀉病病毒抗體檢測(cè)試劑盒說明書進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 BVDV總體調(diào)查 2018年4月—2019年12月共檢測(cè)送檢樣品6 780份，BVDV抗原樣本總陽性率為0.49%(29/5 901)；血樣BVDV抗體樣本總陽性率為75.94%(625/823)，大缸奶樣BVDV抗體樣本總陽性率為94.64%(53/56)。

2.2 BVDV抗原調(diào)查

2.2.1 不同地區(qū)檢測(cè) 山東省不同地市送檢樣品的BVDV感染情況存在差異，菏澤地區(qū)送檢樣品BVDV陽性率最高，為1.07%；臨沂地區(qū)和德州地區(qū)送檢樣品未檢測(cè)到BVDV感染(表1)。

表1 2018—2019年山東省部分地市送檢樣品BVDV抗原檢測(cè)統(tǒng)計(jì)結(jié)果Table 1 Statistical results of BVDV antigen test of samples from some prefectures and cities of Shandong province from 2018 to 2019

2.2.2 不同季度檢測(cè) 2018年4—6月送檢樣品BVDV抗原陽性率最高(1.94%)；2018年10—12月、2019年7—9月送檢樣品中未檢測(cè)到BVDV(圖1)。

圖1 不同季度BVDV抗原陽性率對(duì)比Fig.1 Comparison of BVDV antigen positive rate in different seasons

2.2.3 不同規(guī)模牧場(chǎng)檢測(cè) 小規(guī)模牧場(chǎng)送檢樣品BVDV抗原陽性率為0.53%；中規(guī)模牧場(chǎng)送檢樣品BVDV抗原陽性率為0.79%；大規(guī)模牧場(chǎng)送檢樣品中未檢測(cè)到BVDV(表2)。

表2 2018—2019年山東省不同規(guī)模牧場(chǎng)送檢樣品BVDV抗原檢測(cè)統(tǒng)計(jì)結(jié)果Table 2 Statistical results of BVDV antigen test of samples from different sizes of pastures in Shandong province from 2018 to 2019

2.3 BVDV抗體調(diào)查

2.3.1 不同地區(qū)牧場(chǎng)檢測(cè) 濱州地區(qū)送檢血樣BVDV抗體陽性率最高(96.77%)；濟(jì)南地區(qū)送檢血樣BVDV抗體陽性率最低(38.46%)(表3)。在大缸奶樣檢測(cè)中，德州、聊城、濰坊、日照、威海、泰安地區(qū)均在送檢奶樣中檢測(cè)到BVDV抗體，陽性率達(dá)100%，而青島地區(qū)送檢奶樣未檢測(cè)到BVDV抗體存在(表4)。

表3 2018—2019年山東省部分地市送檢血樣BVDV抗體檢測(cè)統(tǒng)計(jì)結(jié)果Table 3 Statistical results of BVDV antibody test of blood samples from some prefectures and cities of Shandong province from 2018 to 2019

表4 2018—2019年山東省部分地市送檢奶樣BVDV抗體檢測(cè)統(tǒng)計(jì)結(jié)果Table 4 Statistical results of BVDV antibody test of milk samples from some prefectures and cities of Shandong province from 2018 to 2019

2.3.2 不同季度檢測(cè) 2019年1—3月送檢血樣BVDV抗體陽性率最高(90.91%)；2019年7—9月送檢血樣BVDV抗體陽性率最低(50.72%)(圖2)。

圖2 不同季度送檢血樣BVDV抗體陽性率對(duì)比Fig.2 Comparison of positive rate of BVDV antibody in blood samples taken in different seasons

2.3.3 不同規(guī)模牧場(chǎng)檢測(cè) 小規(guī)模牧場(chǎng)送檢血樣BVDV抗體陽性率為48.45%；中規(guī)模牧場(chǎng)送檢血樣BVDV抗體陽性率為75.74%；大規(guī)模牧場(chǎng)送檢血樣BVDV抗體陽性率為84.47%(表5)。

表5 2018—2019年山東省不同規(guī)模牧場(chǎng)送檢血樣BVDV抗體檢測(cè)統(tǒng)計(jì)結(jié)果Table 5 Statistical results of BVDV antibody test of blood samples from different sizes of pastures in Shandong province from 2018 to 2019

3 討論

健康牛感染BVDV可引發(fā)多種臨床癥狀，主要包括免疫抑制、繁殖障礙、腸炎、免疫耐受與持續(xù)感染、急性或慢性黏膜病[6]。特別是懷孕早期，血清抗體陰性的母牛一旦感染，常通過胎盤使胎兒產(chǎn)生免疫抑制[7]，如果小牛正常產(chǎn)出，一出生便為持續(xù)感染(Persistent infection，PI)牛。PI牛體內(nèi)始終帶毒且持續(xù)排毒，無臨床癥狀，血清中又無保護(hù)性抗體，是牛群中決定性傳染源，由此造成的經(jīng)濟(jì)損失巨大。Hou等2018年對(duì)中國(guó)東部5省的36個(gè)奶牛場(chǎng)進(jìn)行BVDV流行性調(diào)查，結(jié)果顯示：對(duì)華東地區(qū)奶牛大缸奶進(jìn)行檢測(cè)，總體BVDV抗體陽性率達(dá)77.8%，抗原陽性率為1.86%，主要流行株為BVDV-1a和BVDV-1c[8]。本次調(diào)查結(jié)果顯示，2018年4月—2019年12月山東省部分地區(qū)規(guī)模化奶牛場(chǎng)送檢樣品BVDV抗原樣本總陽性率為0.49%(29/5 901)，血樣BVDV抗體樣本總陽性率為75.94%(625/823)，大缸奶樣BVDV抗體樣本總陽性率為94.64%(53/56)；且在所檢測(cè)的地市中，有75.0%檢測(cè)出BVDV抗原陽性，100%檢測(cè)出BVDV抗體陽性。表明該病在山東地區(qū)普遍存在，感染情況較為嚴(yán)重，有必要深入開展防疫和種群凈化工作。

在山東省不同地區(qū)BVDV抗原檢測(cè)結(jié)果中，菏澤地區(qū)送檢樣品BVDV抗原陽性率最高(1.07%)，這可能預(yù)示著菏澤地區(qū)奶牛場(chǎng)BVDV感染率較高，牛群感染風(fēng)險(xiǎn)較大，應(yīng)加強(qiáng)防治及牛群管理；在臨沂地區(qū)和德州地區(qū)送檢樣品中未檢測(cè)到BVDV感染，這可能與采樣隨機(jī)程度、采樣月份及牧場(chǎng)規(guī)模等有一定關(guān)系，需進(jìn)行進(jìn)一步檢測(cè)。在不同季度BVDV抗原檢測(cè)結(jié)果中發(fā)現(xiàn)，不同季度BVDV抗原陽性率存在差異，2018年4—6月陽性率最高(1.94%)，2019年4—6月陽性率次之(0.82%)，而2018年10—12月與2019年7—9月送檢樣品中未檢測(cè)到BVDV，BVD-MD多于冬春季節(jié)流行，本調(diào)查結(jié)果與該病的流行病學(xué)相符合。在不同飼養(yǎng)規(guī)模BVDV抗原檢測(cè)結(jié)果中，統(tǒng)計(jì)得出中規(guī)模牧場(chǎng)BVDV送檢樣品陽性率(0.79%)高于小規(guī)模牧場(chǎng)(0.53%)，而在大規(guī)模牧場(chǎng)送檢樣品中未檢測(cè)到BVDV，這可能與衛(wèi)生防疫、牛群的健康狀況、牧場(chǎng)環(huán)境、廠址選擇以及飼養(yǎng)管理有很大的關(guān)系。在不同地區(qū)BVDV抗體調(diào)查結(jié)果中，在山東省不同地市的送檢血樣中均檢測(cè)到了BVDV抗體存在，且陽性率較高，濱州地區(qū)送檢樣品BVDV抗體陽性率最高(96.77%)，濟(jì)南地區(qū)送檢樣品BVDV抗體陽性率最低(38.46%)；在送檢大缸奶樣檢測(cè)中除青島地區(qū)，其余送檢地區(qū)大缸奶樣BVDV抗體陽性率均達(dá)100%，這表明送檢地區(qū)牧場(chǎng)均存在不同程度的BVDV感染，應(yīng)引起養(yǎng)殖單位和有關(guān)防疫部門的重視，而就青島地區(qū)送檢大缸奶樣BVDV抗體檢測(cè)均為陰性的結(jié)果，可能與樣本量過少和采樣批次有一定關(guān)系。在不同季度BVDV抗體檢測(cè)結(jié)果中發(fā)現(xiàn)，不同季度送檢樣品BVDV抗體陽性率差異較大，2019年1—3月陽性率最高(90.91%)，2018年4—6月陽性率次之(90.00%)，而2018年7—9月(70.10%)和2019年7—9月(50.72%)為最低的2個(gè) 季度，BVD-MD多于冬春季節(jié)流行，本調(diào)查結(jié)果與該病的流行病學(xué)相符合，也與不同季度送檢樣品BVDV抗原陽性率統(tǒng)計(jì)結(jié)果相符合。在不同飼養(yǎng)規(guī)模BVDV抗體檢測(cè)結(jié)果中，送檢血樣BVDV抗體陽性率小規(guī)模牧場(chǎng)(48.45%)<中規(guī)模牧場(chǎng)(75.74%)<大規(guī)模牧場(chǎng)(84.47%)，可能為隨著牧場(chǎng)規(guī)模的提升、存欄奶牛數(shù)目的增加，牧場(chǎng)飼養(yǎng)密度、消毒通風(fēng)壓力逐漸增大，牛群中存在PI牛持續(xù)排毒，導(dǎo)致BVDV抗體陽性率提升。

BVD-MD的防治與凈化對(duì)養(yǎng)牛業(yè)健康發(fā)展影響重大。歐洲、澳大利亞、新西蘭等國(guó)家地區(qū)均通過淘汰牛群中的PI牛和全群免疫，有效地控制了BVD-MD[9-10]。我國(guó)各地牛群中BVDV感染率很高，進(jìn)一步開展廣泛全面的流行病學(xué)調(diào)查十分必要。張亮等調(diào)查了2017—2018年山東省13個(gè)地區(qū)51家規(guī)模化牛場(chǎng)BVDV流行情況，結(jié)果顯示，BVDV抗原個(gè)體檢出率為34.58%，BVDV抗原群體檢出率為47.83%，魯中地區(qū)的檢出率明顯高于其他地區(qū)，且有流行加重的趨勢(shì)[11]。程子龍[12]調(diào)查了2017—2019年連續(xù)3年山東省規(guī)模化牛場(chǎng)BVDV流行情況，結(jié)果顯示，2017年BVDV血清學(xué)平均個(gè)體陽性率為61.60%，2018年BVDV血清學(xué)平均個(gè)體陽性率為59.42%，2019年BVDV血清學(xué)平均個(gè)體陽性率為61.33%，3年平均BVDV血清學(xué)個(gè)體陽性率為61.60%，山東地區(qū)規(guī)模化牛場(chǎng)BVDV感染率一直居高不下[12]。與山東省其他BVDV流行病學(xué)調(diào)查對(duì)比來看，本次調(diào)查所得BVDV抗原樣本總陽性率為0.49%，與張亮等[11]的調(diào)查結(jié)果相比差異較大(34.58%)，這可能與采樣密集程度、樣品類型及檢測(cè)手段不同有關(guān)；BVDV血樣抗體樣本總陽性率為75.94%，略高于程子龍[12]的調(diào)查結(jié)果(61.60%)。郭啟勇等[13]2019年對(duì)我國(guó)寧夏地區(qū)牛病毒性腹瀉流行情況做出調(diào)查，結(jié)果顯示，寧夏地區(qū)牛病毒性腹瀉抗體陽性率為87.60%，抗原陽性率為2.71%，存在較為嚴(yán)重的BVDV感染。劉澤余等[14]2019年對(duì)我國(guó)吉林省BVDV流行情況做出調(diào)查，結(jié)果顯示，BVDV抗體陽性率為62.52%，BVDV抗原陽性率為19.21%，流行株均為BVDV1型。姚志蘭等[15]2016—2017年對(duì)我國(guó)江浙部分地區(qū)進(jìn)行BVDV分子流行病學(xué)調(diào)查，結(jié)果顯示，BVDV抗原陽性率為13.1%，江蘇和浙江地區(qū)的陽性率分別為14.1%和11.9%，流行株包含BVDV1型的5種亞型及1株BVDV2型。本次調(diào)查結(jié)果顯示，2018年4月—2019年12月山東省部分地區(qū)規(guī)模化奶牛場(chǎng)送檢樣品BVDV抗原樣本總陽性率為0.49%(29/5 901)，血樣BVDV抗體樣本總陽性率為75.94%(625/823)，大缸奶樣BVDV抗體樣本總陽性率為94.64%(53/56)，與我國(guó)其他地區(qū)流行病學(xué)調(diào)查對(duì)比來看，送檢樣品BVDV抗原陽性率較其他省份調(diào)查結(jié)果處于低位水平，送檢樣品BVDV抗體陽性率較其他省份調(diào)查結(jié)果差異較小，這可能與各省份動(dòng)物疫病防控政策及牧場(chǎng)整體化、規(guī)模化、集約化程度有關(guān)。BVDV在我國(guó)廣泛流行，且流行株眾多，所以不僅要加大在進(jìn)出口檢疫的檢疫力度，也要增加對(duì)各省、市、區(qū)引進(jìn)牛時(shí)的檢疫和精液的檢疫，篩選淘汰PI牛，降低牛群BVDV整體發(fā)病率，這有利于保護(hù)牛群健康，也利于市場(chǎng)的良性發(fā)展及疫病凈化的進(jìn)一步推進(jìn)。