食品中沙門氏菌使用不同分離培養(yǎng)基檢測(cè)的效果比較

高珮（天津市河西區(qū)疾病預(yù)防控制中心,天津 300211）

沙門氏菌屬于常見的腸道致病菌群，可寄生于人類和動(dòng)物的腸道中，是引發(fā)食源性疾病的主要致病菌之一。有研究表明[1]，沙門氏菌引發(fā)的食物中毒事件數(shù)量位于世界食物中毒前列，沙門氏菌引發(fā)的食物中毒事件占我國食物中毒事件發(fā)生數(shù)量的70%-80%。沙門氏菌的主要傳播媒介是食品和飲用水，誤食含有沙門氏菌的食品和水源，會(huì)引發(fā)患者產(chǎn)生食物中毒癥狀，并發(fā)傷寒、胃腸炎、腸熱癥、敗血癥等疾病，若使用量較大，治療不及時(shí)，會(huì)危及患者生命安全[2-3]。鼠傷寒沙門氏菌、豬霍亂沙門氏菌、甲型副傷寒沙門氏菌是三種食物中毒發(fā)病率較高的沙門氏菌。此次研究主要為觀察食品中沙門氏菌使用不同分離培養(yǎng)基檢測(cè)的效果，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)菌株來源 鼠傷寒沙門氏菌、豬霍亂沙門氏菌、甲型副傷寒沙門氏菌三種沙門氏菌均由上海質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)技術(shù)研究院食化所微生物實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2 培養(yǎng)基和試劑 沙門氏菌顯色培養(yǎng)基（CAS）（法國科瑪嘉公司）；木糖賴氨酸脫氧膽鹽瓊脂（XLD）、亞硫酸鉍瓊脂（BS）、酚紅煌綠瓊脂（BGA）、HE瓊脂（HE）（OXOID公司）。試劑均經(jīng)有效性驗(yàn)證合格。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 沙門氏菌的復(fù)蘇 分別從鼠傷寒沙門氏菌、豬霍亂沙門氏菌、甲型副傷寒沙門氏菌菌株管中挑取小的環(huán)狀菌苔，接種到5ml營養(yǎng)肉湯中，置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)20h。

1.3.2 沙門氏菌的接種 復(fù)蘇后的沙門氏菌菌株劃線，取出沙門氏菌顯色培養(yǎng)基（CAS）、木糖賴氨酸脫氧膽鹽瓊脂（XLD）、亞硫酸鉍瓊脂（BS）、酚紅煌綠瓊脂（BGA）、HE瓊脂（HE）五種培養(yǎng)基，將沙門氏菌分別接種到五種分離培養(yǎng)基和顯色培養(yǎng)板上，置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h。

1.3.3 生化實(shí)驗(yàn) 挑取沙門氏菌菌落，取出三糖鐵瓊脂（TSI）、尿素酶瓊脂（URE）、賴氨酸脫羧酶瓊脂（LIA）、蛋白胨水培養(yǎng)基（SAA）生化管，將沙門氏菌分別接種到四種生化管中，置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。

1.4 生化實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定 ①H2S：三糖鐵瓊脂（TSI）生化管變黑為“+”，不變黑為“-”；②尿素酶瓊脂（URE）：培養(yǎng)基變紅為“+”，變黃為“-”；③賴氨酸脫羧酶瓊脂（LIA）：生化管變紫色為“+”，變黃色為“-”；④蛋白胨水培養(yǎng)基（SAA）：加入靛基質(zhì)，生化管內(nèi)有紅環(huán)產(chǎn)生為“+”，無紅環(huán)產(chǎn)生為“-”。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量單位用（±s），P＜0.05顯示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三種沙門氏菌在不同分離培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)情況及顯色情況比較 三種沙門氏菌分別在沙門氏菌顯色培養(yǎng)基（CAS）、木糖賴氨酸脫氧膽鹽瓊脂（XLD）、亞硫酸鉍瓊脂（BS）、酚紅煌綠瓊脂（BGA）、HE瓊脂（HE）五種不同的分離培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，經(jīng)過24-48h后，觀察其生長(zhǎng)情況發(fā)現(xiàn)，鼠傷寒沙門氏菌、豬霍亂沙門氏菌在五種分離培養(yǎng)基的生長(zhǎng)菌落大致相同。其中，木糖賴氨酸脫氧膽鹽瓊脂（XLD）、亞硫酸鉍瓊脂（BS）、HE瓊脂（HE）分離培養(yǎng)基上的菌落中心均有黑色菌落出現(xiàn)，即H2S產(chǎn)生；沙門氏菌顯色培養(yǎng)基（CAS）、酚紅煌綠瓊脂（BGA）分離培養(yǎng)基上均無黑色菌落出現(xiàn)。甲型副傷寒沙門氏菌在培養(yǎng)24h后，菌落生長(zhǎng)情況良好，但菌落中心沒有黑色菌落出現(xiàn)；培養(yǎng)48h后，在木糖賴氨酸脫氧膽鹽瓊脂（XLD）、HE瓊脂（HE）分離培養(yǎng)基上的菌落中心均有黑色菌落出現(xiàn)，即H2S產(chǎn)生；沙門氏菌顯色培養(yǎng)基（CAS）、亞硫酸鉍瓊脂（BS）、酚紅煌綠瓊脂（BGA）分離培養(yǎng)基上均無黑色菌落出現(xiàn)。結(jié)果表明，甲型副傷寒沙門氏菌具有延遲產(chǎn)生H2S的特性。同時(shí)，三種沙門氏菌在沙門氏菌顯色培養(yǎng)基（CAS）上的菌落均為紫紅色菌落，均無黑色菌落出現(xiàn)，詳見表1。

表1 三種沙門氏菌在不同分離培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)情況及顯色情況對(duì)比

2.2 三種沙門氏菌的生化試驗(yàn)結(jié)果比較 三種沙門氏菌分別在三糖鐵瓊脂（TSI）、尿素酶瓊脂（URE）、賴氨酸脫羧酶瓊脂（LIA）、蛋白胨水培養(yǎng)基（SAA）四種不同的生化管中生長(zhǎng)，經(jīng)過24-48h后，觀察其生長(zhǎng)情況發(fā)現(xiàn)，甲型副傷寒沙門氏菌具有延遲產(chǎn)生H2S的現(xiàn)象，詳見表2。

表2 三種沙門氏菌的生化試驗(yàn)結(jié)果對(duì)比

3 討論

沙門氏菌屬于常見的腸道致病菌群，是引發(fā)食源性疾病的主要致病菌之一。沙門氏菌感染患者產(chǎn)生食物中毒癥狀，并發(fā)傷寒、胃腸炎、腸熱癥、敗血癥等疾病，嚴(yán)重者會(huì)危及患者生命安全。沙門氏菌屬于人畜共患疾病，尤其是生鮮食品中容易檢測(cè)到沙門氏菌[4-6]；雖然經(jīng)過熱加工后的熟制食品含量較低，但在包裝、運(yùn)輸過程中，很有可能受到沙門氏菌的污染[7-8]。因此，提高沙門氏菌檢測(cè)的精確度，是保障食品安全的關(guān)鍵。

本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：鼠傷寒沙門氏菌、豬霍亂沙門氏菌在XLD、BS、HE分離培養(yǎng)基上的菌落中心均有黑色菌落出現(xiàn)，即H2S產(chǎn)生；CAS、BGA分離培養(yǎng)基上均無黑色菌落出現(xiàn)。甲型副傷寒沙門氏菌在培養(yǎng)24h后，菌落生長(zhǎng)情況良好，但菌落中心沒有黑色菌落出現(xiàn)；培養(yǎng)48h后，在XLD、HE分離培養(yǎng)基上的菌落中心均有黑色菌落出現(xiàn)，即H2S產(chǎn)生；CAS、BS、BGA分離培養(yǎng)基上均無黑色菌落出現(xiàn)。結(jié)果表明，甲型副傷寒沙門氏菌具有延遲產(chǎn)生H2S的特性。同時(shí)，三種沙門氏菌在CAS上的菌落均為紫紅色菌落，均無黑色菌落出現(xiàn)。三種沙門氏菌分別在TSI、URE、LIA、SAA四種不同的生化管中生長(zhǎng)，經(jīng)過24-48h后，觀察其生長(zhǎng)情況發(fā)現(xiàn)，甲型副傷寒沙門氏菌具有延遲產(chǎn)生H2S的現(xiàn)象。證明了沙門氏菌顯色培養(yǎng)基（CAS）能夠有效檢測(cè)出食品中的沙門氏菌，避免了單純檢測(cè)H2S產(chǎn)生的誤差。分析其原因?yàn)椋寒a(chǎn)生H2S是沙門氏菌的典型特性，但甲型副傷寒沙門氏菌具有延遲產(chǎn)生H2S的現(xiàn)象，因此，并不能以檢測(cè)H2S作為檢測(cè)沙門氏菌的唯一手段。沙門氏菌顯色培養(yǎng)基（CAS）能夠有效檢測(cè)出甲型副傷寒沙門氏菌，大大提高了檢測(cè)準(zhǔn)確率，降低了假陰性的發(fā)生。

綜上所述，沙門氏菌顯色培養(yǎng)基（CAS）對(duì)食品中沙門氏菌的分離檢測(cè)效果最好，可以有效提高檢測(cè)精度和檢測(cè)效率，值得推廣應(yīng)用。