贛北地區中蜂蜂房球菌病流行情況調查

陳桂平,丁劍峰,付戴波,周偉良,張串聯,涂群

（1.江西省養蜂研究所，江西南昌330200；2.永修縣立新鄉農技站；3.九江市動物疾病控制中心）

蜂房球菌（Melissococcus pluton,MSSP）是一種革蘭氏陽性、兼性厭氧菌。室溫下，可以在蜂蠟中存活65d以上、在干枯的幼蟲死亡殘留物中存活3年，是引起蜜蜂“爛子病”的主要細菌性病原之一。江西省山區適宜中蜂養殖，每年飼養規模很大，是當地農民主要收入之一，而目前人工養殖的中蜂蜂群“爛子”現象日趨嚴重，給中蜂養殖帶來很大經濟損失，該病在江西省流行情況尚不清楚。為揭示該病在江西省贛北中蜂養殖區的流行現狀和特點，本研究從贛北地區不同養蜂場采集患病幼蟲、蜂脾等樣品，分離鑒定蜂房球菌，分析各地蜂場蜂房球菌引起的爛子病流行情況，為有效防控該病提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品來源。贛北地區不同中蜂場采集的患病幼蟲、可疑巢脾和花粉。在贛北地區選擇4個縣，每個縣選擇3個鄉鎮，每個鄉鎮選擇3～6家蜂場，每家蜂場用無菌取樣器采集可疑幼蟲、巢脾和花粉各3份，做好標記，保溫箱保存帶回實驗室。

1.1.2 主要試劑。葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露糖、蔗糖、果糖、蛋白胨、阿拉伯糖、檸檬酸鉀、檸檬酸鈉、海藻糖、蛋白胨、半胱氨酸等生化試劑均購于國藥集團化學試劑北京有限公司。

1.2 方法

1.2.1 培養基配制。蛋白胨1g、半胱氨酸0.02g、葡萄糖0.5g、果糖0.5g、可溶性淀粉1g組成，瓊脂2g加純化水至100mL，用1mol/LKH2PO4調pH至7.0。

1.2.2 病原分離。將可疑幼蟲、巢脾和花粉分別與同體積的無菌生理鹽水勻漿[1]，在無菌操作臺用滅菌接種環蘸取少量上清液接種在瓊脂培養基表面，在5%～10%CO2厭氧條件下35℃培養24h，觀察菌落形成，并挑起菌落進行革蘭氏染色鏡檢。

1.2.3 生化鑒定。將分離的菌株接種于專門培養基進行培養與純化[2～3]，然后將單一菌落分別接種在葡萄糖、乳糖、蔗糖、果糖、甘露糖、阿拉伯糖、海藻糖、麥芽糖、山梨糖、硝酸鹽還原等微量生化鑒定管，在5%～10%CO2厭氧條件下35℃培養48h，進行生化鑒定。

2 結果

2.1 分離培養結果

分離臨床樣品，并挑取單一菌落純培養后，在5%～10%CO2厭氧條件下35℃培養24h，可觀察到圖1所示菌落，細菌菌落直徑在1mm左右，為半透明水滴樣，邊緣整齊，表面光滑、中心凸突的小菌落。

圖1 細菌菌落形態

2.2 生化鑒定結果

對樣品分離菌株進行生化鑒定，由表1結果可知，該菌能利用葡萄糖、果糖、蔗糖、海藻糖、阿拉伯糖、麥芽糖，而不能利用乳糖、甘露糖。厭氧和硝酸鹽還原試驗結果呈陽性。

表1 樣品分離菌株的生化鑒定結果

2.3 細菌分離結果

由表2、表3結果可知，以不同地區蜂場感染程度來評價，60家蜂場中有34家蜂場檢出帶菌樣品，蜂場檢出率56.7%，其中武寧縣蜂場檢出率最高達61.1%、永修縣60%、修水縣53.3%、都昌縣50%，4個縣蜂場檢出率均≥50%；以不同樣品帶菌程度來評價，360個樣品中檢出帶菌樣品194個，不同取樣部位的樣品檢出率以幼蟲為最高，達達50.6%。

表2 不同取樣部位蜂房球菌檢出情況 份、%

表3 不同地區蜂場蜂房球菌檢出情況 戶、%

3 討論

由于蜂房球菌屬于兼性厭氧菌，分離培養時對溫度和CO2濃度均要求較高，需要熟練掌握分離培養技術。分離出的菌落與文獻報道基本一致[4～5]，因此可確定從樣品中分離出的細菌是蜂房球菌。

從不同鄉鎮蜂場檢出率比較來看，永修縣馬口鎮檢出率最高為80%、都昌縣多寶鄉檢出率最低為25%，4個縣蜂場檢出率均≥50%，說明蜂房球菌在當地蜂群中已存在傳播流行，這與該菌在外省蜂場中的流行特點基本相符[6～7]。