系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者抗核抗體的表達及臨床表現(xiàn)分析*

鄒紅云，晁亞妮，白文棟，何 江

新疆軍區(qū)總醫(yī)院 檢驗科(烏魯木齊 830000)

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)是一種由免疫介導(dǎo)的、多種炎癥因子共同參與的自身免疫性疾病，好發(fā)于女性，尤其是育齡期女性，其病因和發(fā)病機制至今尚無明確定論。研究[1]認為，SLE與遺傳、環(huán)境、免疫功能紊亂、性激素等因素有關(guān)。自身抗體的產(chǎn)生是SLE重要病理過程之一。自身抗體的產(chǎn)生及免疫復(fù)合物的形成并沉積，可造成多個器官受累，早期診斷及治療對其預(yù)后尤為重要。本研究對SLE患者的臨床資料進行回顧性分析，探討抗核抗體(antinuclear antibody, ANA)免疫熒光核型、抗核抗體譜(antinuclear antibody profile, ANAs)以及患者起病首發(fā)臨床表現(xiàn)等在不同性別、年齡SLE患者中的分布差異和特點，為臨床早期診斷和治療提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2015年1月至2018年12月在新疆軍區(qū)總醫(yī)院住院并確診的263例SLE患者為研究對象。納入及排除標(biāo)準(zhǔn)：所有患者診斷標(biāo)準(zhǔn)均符合1997年美國風(fēng)濕病學(xué)會修訂的SLE分類診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]，排除其他并發(fā)的自身免疫性疾病及腫瘤。其中，男41例、女222例；≤35歲122例、35～50歲91例、>50歲50例。收集患者性別、年齡、ANA免疫熒光核型、ANAs檢測結(jié)果及起病時首發(fā)臨床表現(xiàn)等資料。

1.2 試劑與儀器

ANA IgG檢測試劑盒、ANAs IgG檢測試劑盒購自歐蒙(杭州)醫(yī)學(xué)實驗診斷有限公司；儀器設(shè)備包括Nikon 80i熒光顯微鏡、EURO Blot MasterⅡ全自動免疫印跡儀、佳能Lide100掃描儀等。

1.3 方法

1.3.1 ANA檢測 以HEp-2細胞和猴肝組織切片為實驗基質(zhì)，采用間接免疫熒光法(indirect immunofluorescence, IIF)檢測SLE患者血清ANA，在熒光顯微鏡下觀察特異性熒光結(jié)果，滴度≥1∶100判斷為ANA陽性。ANA陽性者進一步在熒光顯微鏡下判讀熒光核型。

1.3.2 ANAs檢測 采用線性免疫印跡法(LIA)檢測特異性IgG類抗體，包括：抗核糖核蛋白(ribonucleoprotein,RNP)抗體、抗史密斯(Smith,Sm)抗體、抗干燥綜合征抗原A(sjogren's syndrome antigen A,SSA)抗體、抗干燥綜合征抗原B(sjogren's syndrome antigen B,SSB)抗體、抗Ro-52(Ro-52)抗體、抗雙鏈DNA(double stranded DNA,ds-DNA)抗體、抗核小體(nucleosome,NUC)抗體、抗組蛋白(histones,HI)抗體、抗硬皮病-70(scleroderma-70,Scl-70)抗體、抗多發(fā)性肌炎/硬皮病(polymyositis-scleroderma,PM-Scl)抗體、抗核糖體P蛋白(ribosome P-protein, RIB)抗體、抗線粒體抗體-M2型(anti-mitochondrial antibody-M2, M2)、抗增殖細胞核抗原抗體(proliferating-cell nuclear antigen antibody,PCNA)、抗著絲點蛋白B(centromere protein B,CB)抗體。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，定性資料以例數(shù)(%)表示，組間比較采用2檢驗，檢驗水準(zhǔn)α除特別說明外均設(shè)定為0.05。

2 結(jié)果

2.1 SLE患者ANA 陽性分布特點

263例SLE患者ANA陽性率為94.29%(248/263)，不同性別及年齡組間ANA陽性率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)(表1)。

表1 SLE患者ANA陽性分布特點

2.2 SLE患者ANA熒光核型分析

SLE患者ANA免疫熒光核型及檢出率分別為：核顆粒型 64.64%(170/263)、核均質(zhì)型17.87%(47/263)、胞漿顆粒型4.56%(12/263)、核仁型4.56%(12/263)、著絲點型2.66%(7/263)。不同性別組間各種ANA核型陽性率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。兩種核型(核顆粒型和著絲點型)陽性率在不同年齡組間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；≤35歲年齡組的核顆粒型陽性率明顯高于35～50歲年齡組及>50歲年齡組；>50歲年齡組的著絲點型陽性率明顯高于≤35歲年齡組及35～50歲年齡組(表2)。

表2 SLE患者ANA熒光核型分析[n(%)]

2.3 SLE患者ANAs檢測結(jié)果分析

SLE患者Ro-52、NUC抗體陽性率在不同性別組間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。HI陽性率在不同年齡組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)?！?5歲年齡組HI陽性率明顯高于35～50歲年齡組和>50歲年齡組(表3)。

表3 SLE患者ANAs檢測結(jié)果分析[n(%)]

2.4 SLE患者首發(fā)臨床表現(xiàn)特征

SLE患者首發(fā)臨床表現(xiàn)中以腎損害陽性率最高(34.60%，91/263)，其次為皮膚損害(23.19%，61/263)和關(guān)節(jié)炎(19.39%，51/263)。其他表現(xiàn)還有血液系統(tǒng)損害(7.22%，19/263)、乏力(4.94%，13/263)、非感染性發(fā)熱(4.56%，12/263)、神經(jīng)系統(tǒng)癥狀(1.52%，4/263)、脫發(fā)(0.38%，1/263)。

男性患者皮膚損害和神經(jīng)系統(tǒng)癥狀的陽性率明顯高于女性，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；女性患者關(guān)節(jié)炎陽性率明顯高于男性(P<0.05)(表4)。

表4 SLE患者首發(fā)臨床表現(xiàn)特征 [n (%)]

3 討論

長期以來，間接免疫熒光檢測法一直被視為ANA檢測的金標(biāo)準(zhǔn)并被廣泛應(yīng)用[3-4]。該檢測方法以人咽喉癌上皮細胞株HEp-2細胞作為玻片基質(zhì)，能檢測多種針對細胞核分子的抗體，也能檢測針對細胞質(zhì)或有絲分裂細胞表達的抗原抗體[5]。ANA普遍出現(xiàn)于各種自身免疫性疾病中，是自身免疫性疾病診斷、鑒別診斷和病情判斷的重要依據(jù)。ANA在SLE患者中出現(xiàn)的陽性率為80%～100%[6]。本研究263例SLE患者ANA總陽性率為94.29%，不同性別、不同年齡組間ANA陽性率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，與既往研究[7]結(jié)果一致。

ANA是一大類自身抗體的總稱。當(dāng)ANA陽性時，通過特異性靶抗原確認實驗，可進一步分型為針對多種細胞靶抗原成分的特異性自身抗體(即ANAs)，不同的自身免疫病可出現(xiàn)特征性抗體譜。目前關(guān)于SLE患者ANA譜陽性率的性別差異研究已有報道，但研究結(jié)果不一。達展云等[8]研究表明，男性SLE患者ds-DNA 陽性率較女性低。袁新科等[9]認為，SLE男性患者的Sm抗體陽性率高于女性。羅夏等[10]研究表明，SLE患者的ds-DNA、Sm抗體陽性率在不同性別間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。姚曦等[11]研究發(fā)現(xiàn)，男性SLE患者SSA、SSB抗體陽性率明顯低于女性，但其他抗體在不同性別間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；同時>50歲年齡組SLE患者的ds-DNA、SSA和SSB抗體陽性率均較育齡期組低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，其原因可能與>50歲年齡組人群免疫功能低下有關(guān)。王鵬等[12]研究表明，男性SLE患者U1-RNP、Sm抗體陽性率高于女性，SSA 和Ro-52抗體陽性率低于女性，并且≥50歲年齡組SSA、SSB抗體陽性率明顯高于<50歲年齡組。本研究結(jié)果表明，女性SLE患者Ro-52、NUC抗體陽性率均明顯高于男性(P<0.05)； HI陽性率在不同年齡組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。本研究結(jié)果與既往研究[8-12]報道不完全一致，這可能與選取的病例樣本量較小、患者的病情活動度和免疫應(yīng)答水平不一以及采用的檢測方法不同等因素有關(guān)。

本研究SLE患者ANA熒光核型以核顆粒型最為多見，與既往研究[13-15]較一致。不同性別組間比較，5種ANA核型(核顆粒、核均質(zhì)、核仁型、著絲點、胞漿顆粒)的陽性率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；核顆粒型和著絲點型陽性率在不同年齡組間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。本研究免疫熒光核型的分析結(jié)果與李池慧等[16]研究發(fā)現(xiàn)的男性SLE患者均質(zhì)型ANA檢出率低于女性，成人患者核均質(zhì)型檢出率高于兒童患者的結(jié)果不一致，其原因可能是由于ANA免疫熒光的檢測方法具有一定的局限性，檢測結(jié)果受到實驗室條件、實驗操作、熒光顯微鏡的性能和穩(wěn)定性以及實驗技術(shù)人員的經(jīng)驗、個人主觀原因等影響。因而，不同實驗室ANA免疫熒光核型結(jié)果的判讀尚有待進一步統(tǒng)一和標(biāo)準(zhǔn)化。

SLE是臨床上較常見的一種自身免疫性疾病，與機體免疫調(diào)節(jié)異常相關(guān)，具有臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣和多種器官系統(tǒng)損害的特點[17-18]，其中以腎臟損害(狼瘡性腎炎)較為常見。本研究中，以患者初次就診時的主要臨床表現(xiàn)(首發(fā)臨床表現(xiàn))進行統(tǒng)計分析，發(fā)現(xiàn)腎損害發(fā)生率最高，而腎損害發(fā)生率在不同性別間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。關(guān)于SLE患者皮膚損害發(fā)生率的性別差異，各研究結(jié)果也不同。羅夏等[10]研究表明，男性SLE患者皮膚損害發(fā)生率較女性明顯降低。張益民等[19]研究表明，SLE患者皮膚損害的發(fā)生率在不同性別之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。本研究中男性患者皮膚損害發(fā)生率明顯高于女性(P<0.05)，男性患者關(guān)節(jié)炎發(fā)生率明顯低于女性(P<0.05)，與已有研究[7,20]結(jié)果一致。

綜上所述，本研究深入分析SLE患者自身抗體表達和臨床表現(xiàn)特征，可為SLE的早期診斷和治療提供重要參考依據(jù)，同時也為SLE發(fā)病機制研究提供線索和啟示。