當(dāng)歸六黃湯本草考證及物質(zhì)基準(zhǔn)的制備工藝研究*

閆妍，宿瑩，武艷雪，翁麗麗，侯曉琳

(長春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，長春 130117)

經(jīng)典名方當(dāng)歸六黃湯出自金代李東垣編撰的《蘭室秘藏》中的煮散劑，是《古代經(jīng)典名方目錄(第一批)》之一。其功效主治為滋陰瀉火，固表止汗，用于陰虛火旺盜汗。后世醫(yī)家以本方為基礎(chǔ)加上各自見解，并根據(jù)臨床具體癥狀辨證論治，進(jìn)行加減化裁，臨床應(yīng)用頗廣，涉及現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的各個系統(tǒng)疾病，在病毒性心肌炎、甲狀腺功能亢進(jìn)、肺結(jié)核、糖尿病、圍絕經(jīng)期綜合征[1-6]等方面亦療效確切。

經(jīng)典名方因其具有深刻的科學(xué)理論內(nèi)涵和穩(wěn)定的臨床研究價值，一直以核心方劑的地位在中醫(yī)臨床中被廣泛應(yīng)用，是中醫(yī)防病治病的中堅(jiān)力量，是臨床辨證施治最常用的方劑，但由于經(jīng)典名方均出自古代，在幾千年的歷史長河中，許多中藥基原和產(chǎn)地均存在或多或少的變化，而且歷代度量衡亦不盡相同，所以大量的醫(yī)藥典籍考證是必不可少的，從而得知其準(zhǔn)確的處方信息及制備工藝。因此，筆者在本文對經(jīng)典名方當(dāng)歸六黃湯進(jìn)行大量文獻(xiàn)考證，并進(jìn)行現(xiàn)代工藝轉(zhuǎn)化及工藝驗(yàn)證，為當(dāng)歸六黃湯進(jìn)一步復(fù)方制劑提供理論依據(jù)，同時也為其他經(jīng)典名方的深入研究提供科學(xué)思路及參考。

1 劑量考證

當(dāng)歸六黃湯原文記載：當(dāng)歸、生地黃、熟地黃、黃芩、黃連、黃柏各等分，黃芪加倍。上為粗末，每服五錢，水兩盞，煎至一盞，食前服，小兒減半服之。

1.1“煮散粗末”的考證 《傷寒總病論》云：“凡湯劑言蟻咀者，如蟻咀菱藕之滓狀，今之粗末是也。”可見中藥煮散雛形淵于先秦，“煮散”一詞最先見于唐代孫思邈的《備急千金要方》，其中卷八及卷十二分別記載有“續(xù)命煮散”及“伏神煮散”。宋代是中藥煮散的鼎盛時期，《太平惠民和劑局方》共載藥方788首，其中煮散方237首，占30%。沈括《夢溪筆談》云：“古方用湯最多，用丸者散者殊少。近世用湯者殊少，應(yīng)湯皆用煮散”。宋代之后，飲片逐漸代替煮散，《蘇沈內(nèi)翰良方》認(rèn)為煮散的粗末導(dǎo)致“辨藥之難”，故金元之后粗末漸被飲片所代替，明清以降煮散運(yùn)用更趨稀少。但盡管如此，仍有許多煮散劑流傳下來[7-8]。

宋代《太平惠民和劑局方》[9]中粉碎成麻豆大小者24方，占10.1%，粉碎成粗散或粗末者124方，占52.3%，粉碎成末及細(xì)末者89方，占37.6%。據(jù)考究[10]“粗散”相當(dāng)于現(xiàn)今的最粗粉，過一號篩(10目，2.0 mm)，“粗末”相當(dāng)于粗粉，過二號篩(20目，0.85 mm)。因此，古代“粗散”與“粗末”與《中華人民共和國藥典》[11]規(guī)定“最粗粉”及“粗粉”的粒度范圍接近，這樣也使本方粉碎操作更加規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化。

1.2“錢”的考證 《太平圣惠方》《圣濟(jì)總錄》《太平惠民和劑局方》都明確提到“今則加減合度，分兩得中，削舊方之參差，合今時之行用。其方中凡言分者，即二錢半為一分也。凡言兩者，即四分為一兩也。凡言斤者，即十六兩為一斤也。凡言等分者，非分兩之分，即諸藥斤兩多少，皆同為等分也。”丘光明等[12]經(jīng)過考證認(rèn)為宋代1斤約合661 g，1兩約合41.3 g。

金代作為與宋代平行的另一個朝代，有許多律歷之法與宋相同。但《金史》對度量衡制度的記載有限，對該時期的度量衡制度只能從其中的只字片語進(jìn)行推測。《金史·食貨二》[13]：“量田以營造尺”。“營造尺”即營造官尺，也稱曲尺，是北宋土木建筑家李誡在《營造法式》中記載的一種官尺，說明金代仍然沿用宋代的尺度。《金史·食貨三》：“錢幣。金初用遼、宋舊錢，...正隆二年，歷四十余歲，始議鼓鑄。...三監(jiān)鑄錢，文曰‘正隆通寶’，輕重如宋小平錢，...與舊錢通用。”金代建國初使用的是遼、宋的舊錢，即使正隆二年(1158)進(jìn)行重鑄錢幣之后，通行的“正隆通寶”的重量仍與宋時的“小平錢”相同，因此可以認(rèn)為金代的度量衡制度與宋代基本相同[14-16]。通過考證可知《當(dāng)歸六黃湯》出自金代，故考證1錢≈4.13 g。

1.3“盞”的考證 宋代度量衡的文獻(xiàn)資料詳實(shí)，實(shí)物資料也齊備。首先考訂常用尺(太府布帛尺、三司布帛尺)，認(rèn)為其長度為31.4 cm。所以能計(jì)算出精確的宋代標(biāo)準(zhǔn)升、斗的容積。太府升的容積為22.68立方寸，合702.1cm3。值得注意的是，宋代醫(yī)書中加水量往往不用“升”作單位，而是用“盞”，并且將“盞”“升”“合”等常用容量單位之間的換算關(guān)系做明確規(guī)定。如《太平圣惠方》曰：“古方藥味，多以銖兩；及用水，皆言升數(shù)。年代綿歷浸遠(yuǎn)……器量全殊。若不別其精粗，何以明其取舍。今則加減合度，分兩得中。削舊方之參差，洽今時之行用……凡煮湯，云用水一大盞者，約一升也；一中盞者，約五合也；一小盞者，約三合也。務(wù)從簡易，庶免參差。”《太平圣惠方》其中的規(guī)定對當(dāng)時和后世有指導(dǎo)意義。書中引入宋代醫(yī)方常用的盞代替古時的升，明確指出古今容量間的換算關(guān)系：古時1 L約等于宋時1大盞，古時5合約等于宋時1中盞，古時3合約等于宋時1小盞。古時1 L為200 mL，1 L為10合，因此1大盞為200 mL，1中盞為100 mL，1小盞為60 mL。北宋末年官頒的《圣濟(jì)總錄》[17]：“古今升斗大小不同，蓋古之三升為今一升，凡方中用水言升合者，今以中盞為率，庶與世俗相通，無多少之惑。”盞的應(yīng)用在宋代極多，尤其是“大盞”，基本上都是用于計(jì)量煎藥所用水。由于經(jīng)考證元代鮮有量器流傳下來，考慮金代為戰(zhàn)亂年代，更傾向延續(xù)之前的劑量單位[18]。通過考證可知《當(dāng)歸六黃湯》出自金代，故考證1盞≈200 mL。

2 制備工藝考證

2.1煎煮方法及服用次數(shù) 《千金要方》[19]曰：“凡煮湯，用微火，令小沸，其水?dāng)?shù)依方多少，大略二十兩藥用水一斗，煮取四升，以此為率。皆絞去滓而后酌量也。”《太平惠民和劑局方》曰：“凡煮湯，當(dāng)以井花水，極令凈潔。其水?dāng)?shù)多少，不得參差。常令文火小沸，令藥味出，煮之調(diào)和，必須用意。”《本草通玄》[20]曰：“藥渣再煎，殊非古法，味有厚薄，氣有輕重。若取二煎，其厚且重者尚有功力，其輕且薄者，己無余味。”

經(jīng)方大部分采取一次煎取，分次服用，張仲景湯劑除了一些特殊煎法如去滓再煎、分煎和合煎等，大部分方劑都是水煮或其他溶媒煎煮一次，不進(jìn)行二次煮藥。直到唐代，湯劑在絕大多數(shù)情況下都是僅煮一次，只有對部分補(bǔ)益功效的藥劑，在患者家庭經(jīng)濟(jì)貧乏的時候，才進(jìn)行二次水煮提取。宋、金元時期，臨床應(yīng)用的主要劑型為煮散，只煮一次。明代以來，湯劑的二次煮藥法逐漸增多[21]。經(jīng)方其中日二三服為最常見。服藥次數(shù)的多少與疾病情況、藥物峻緩、人體強(qiáng)弱息息相關(guān)[22]。湯劑服法在宋以前靈活機(jī)變，以一劑一煎三服為多見；迨至宋代，由于散劑盛行，使得古方湯劑一律改為煮散，多一煎一服，而日服次數(shù)語焉不詳；自元明湯劑重新恢復(fù)使用，沿用散劑服法，以一劑一煎一服最為多見[23]。

通過考證可知，古代湯劑的煎煮多為一劑一煎，按方書中所列加水?dāng)?shù)為主。而每日服用量多以日三服為主，每服量如方所示。宋代多為煮散劑，對于煮散劑而言，多強(qiáng)調(diào)每服量，大多方書中均會標(biāo)注每服量、加水量，煎煮時間多根據(jù)剩余水量而定，服用方法多為一煎一服，或遵方后所示。

2.2去渣考證 當(dāng)歸六黃湯出自于《蘭室秘藏》[24]，其用法為“上為粗末，每服五錢，水二盞，煎至一盞，食前服。小兒減半服之”。未提及是否去渣服用。縱觀《蘭室秘藏》全書，“咀”共92條，其中煮散89條，而89條煮散中，77條服用方法為“去渣”，12條服用方法未標(biāo)明“去渣”；“銼如麻豆大”共53條，其中煮散46條，在46條煮散中，41條服用方法未“去渣”，5條服用方法未標(biāo)明“去渣”；關(guān)于“上為粗末”煎煮的條文共23條，其中16條均有“去渣”服用的描述，2條有“取清服用”的論述，5條未明確去渣服用，分別是當(dāng)歸六黃湯、益胃散、消痞湯、清肺飲子及正氣湯。綜上所述，《蘭室秘藏》中煮散共158首，其中服用方法“去渣”有134首，2首“取清服用”，22首未明確去渣服用。

《蘭室秘藏》中升陽益血湯曰：“二月間有一小兒，未滿一百日，……利大便。”《蘭室秘藏》中補(bǔ)陽湯曰：“時初冬，一小兒二歲，大寒證，……無搐則寒。”可知在《蘭室秘藏》中小兒既包括嬰兒即“未滿一百日”，又包括幼兒期即“小兒二歲”。《蘭室秘藏·小兒門》中共有13首方劑，其中煮散9首，且服用方法均為“去渣”。

當(dāng)歸六黃湯服用上有“小兒減半”，綜合以上考證結(jié)果，認(rèn)為當(dāng)歸六黃湯應(yīng)為去渣用。

3 制備工藝研究

本著“遵古”的基本原則，經(jīng)考證及實(shí)驗(yàn)研究，確定物質(zhì)基準(zhǔn)的現(xiàn)代制備工藝為：當(dāng)歸、生地、熟地、黃芩、黃連、黃柏各2.58 g，黃芪5.16 g，粉碎為粗粉，加水400 mL，武火煮沸轉(zhuǎn)文火煎煮至煎液200 mL，約20 min，濾過，經(jīng)真空冷凍干燥72 h，即得。

3.1粉碎粒度的確定 經(jīng)前文考證，見“1.1”項(xiàng)，古代“粗末”與《中華人民共和國藥典》規(guī)定的“粗粉”的粒度范圍接近，故本方粉碎粒度確定為“粗粉”即指能全部通過二號篩，但混有能通過四號篩(0.25 mm)不超過40%的粉末。

3.2劑量的確定 經(jīng)前文考證，見“1.2”項(xiàng)，宋金元時期，1錢≈4.13 g，5錢≈20.65 g，因此處方確定為：當(dāng)歸、生地、熟地、黃芩、黃連、黃柏各2.58 g，黃芪5.16 g。

3.3煎煮時間的確定 原方記載：“水兩盞，煎至一盞”，經(jīng)實(shí)驗(yàn)研究，以武火煮沸轉(zhuǎn)為文火煎煮約20 min時，煎煮液為加水量的一半，達(dá)到原文要求。故確定煎煮時間約為20 min。

3.4加熱器具及加熱方式的確定 古代煎煮所用容器多為陶瓷材質(zhì)的藥罐，加熱方式多為明火加熱。隨著現(xiàn)代科學(xué)的發(fā)展，所能選擇的容器眾多，常用的多為鋁鍋、陶瓷鍋等；而加熱方式也有電加熱和明火加熱等多種方式。依據(jù)遵古的思想，在確保處方質(zhì)量一致性以及可溯性的原則上，器皿仍選擇陶瓷材質(zhì)，進(jìn)而考慮到明火加熱較為不可控，因此本實(shí)驗(yàn)對當(dāng)歸六黃湯的加熱方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，以出膏率、浸出物含量及指紋圖譜相似度為指標(biāo)，對天然氣與電陶爐煎煮的工藝轉(zhuǎn)化進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。

3.4.1儀器與材料 島津高效液相色譜儀(Prominence-ILC-2030，島津制造所)，ME104E電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司，感量：0.1 mg)；AUW120D 電子天平(島津制造所，感量：0.01 mg)；HH-S24型電熱恒溫水浴鍋(金壇市大地自動化儀器廠)。乙腈、甲醇(色譜級)；磷酸(色譜級)；屈臣氏純凈水；其他試劑為分析級。

對照品：阿魏酸、漢黃芩苷、黃芩素、黃芩苷、漢黃芩素、鹽酸小檗堿、鹽酸黃柏堿、毛蕊異黃酮葡萄糖苷和毛蕊花糖苷均購于中國食品藥品檢定研究院。所用七味藥材由長春中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室翁麗麗教授鑒定，并按照《中華人民共和國藥典》2015年版一部進(jìn)行檢驗(yàn)，均為正品。見表1。

表1 藥材來源信息

3.4.2方法與結(jié)果

(1)出膏率。以出膏率為評價指標(biāo)，分別使用天然氣和電陶爐對處方進(jìn)行煎煮，制備當(dāng)歸六黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)，平行操作兩次。出膏率(%)=干膏量/投藥量×100%。結(jié)果表明天然氣樣品平均出膏率為42.33%，電陶爐樣品平均出膏率為42.99%，RSD為1.52%，說明兩種加熱方式的出膏率結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

(2)浸出物含量。通過查閱文獻(xiàn)可知當(dāng)歸六黃湯中主要有效成分均易溶于70%乙醇，故照醇溶性浸出物測定法(通則2201)項(xiàng)下的熱浸法測定，用70%乙醇作溶劑，對天然氣及電陶爐樣品進(jìn)行浸出物含量測定，結(jié)果表明天然氣樣品平均浸出物含量為72.16%，電陶爐樣品平均浸出物含量為71.81%，RSD為1.72%，說明兩種加熱方式的浸出物含量結(jié)果無顯著差異。

(3)指紋圖譜條件及方法。①色譜條件，島津LC2030高效液相色譜儀，Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈為流動相A，以0.1%磷酸溶液為流動相B，梯度洗脫(0～15 min，5%→17%A；>15～35 min，17%→25%A；>35～65 min，25%→47%A；>65～85 min，47%→65%A；>85～110 min，65%→95%A)；流速1.0 mL·min-1；波長：275 nm；柱溫30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL；采樣時間：110 min。②對照品制備，精密稱取適量阿魏酸、毛蕊花糖苷、黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素、鹽酸小檗堿、鹽酸黃柏堿、毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品，加甲醇溶解，定容至100 mL，搖勻，經(jīng)孔徑0.45 μm濾膜濾過，制得混合對照品溶液。③供試品溶液制備，用天然氣和電陶爐按照煎煮方法，分別煎煮兩批平行水煎液后進(jìn)行凍干處理，即得供試品。精密稱取供試品0.5 g，精密加入甲醇25 mL，搖勻后，經(jīng)超聲(功率250 W，頻率50 kHz)30 min，濾過，取續(xù)濾液，經(jīng)孔徑0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。④方法學(xué)考察，通過對精密度實(shí)驗(yàn)、重復(fù)性實(shí)驗(yàn)以及穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)進(jìn)行考察，按色譜條件進(jìn)行進(jìn)樣分析，以黃芩苷為參照峰，計(jì)算27個共有峰的相對保留時間、相對峰面積的RSD值，結(jié)果均小于3%。說明儀器的精密度、方法重復(fù)性以及供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性均良好。

(4)測定法。取供試品溶液，進(jìn)樣量為10 μL，按色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。

(5)共有模式中對照圖譜的建立。應(yīng)用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)(2012版)》對樣品的HPLC圖譜進(jìn)行處理，建立27個共有峰的評價模式，得到當(dāng)歸六黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)指紋圖譜共有特征峰和共有模式的對照圖譜。結(jié)果見圖1，圖2。

4.鹽酸黃柏堿；7.阿魏酸；8.毛蕊異黃酮葡萄糖苷；11.毛蕊花糖苷；16.黃芩苷；17.鹽酸小檗堿；23.漢黃芩苷；25.黃芩素；26.漢黃芩素。

4.鹽酸黃柏堿；7.阿魏酸；8.毛蕊異黃酮葡萄糖苷；11.毛蕊花糖苷；16.黃芩苷；17.鹽酸小檗堿；23.漢黃芩苷；25.黃芩素；26.漢黃芩素。

(6)指紋圖譜相似度分析。采用中華人民共和國藥典委員會頒布的中藥指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)軟件，計(jì)算供試品的指紋圖譜的相似度。結(jié)果供試品相似度均>0.98，表明通過不同加熱方式提取的成分一致且相似度極高，可以看出加熱方式從天然氣轉(zhuǎn)化為電陶爐對處方制備差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4 工藝驗(yàn)證

使用電陶爐進(jìn)行工藝煎煮，制備6批當(dāng)歸六黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)，計(jì)算其出膏率，浸出物含量以及指紋圖譜相似度。結(jié)果平均出膏率為42.04%，RSD為2.65%，浸出物平均含量為73.14%，RSD為1.10%，結(jié)果見表2。經(jīng)工藝驗(yàn)證結(jié)果可知，所建立的當(dāng)歸六黃湯工藝制備方法具有良好的穩(wěn)定性以及可行性。

表2 6批試樣工藝驗(yàn)證結(jié)果

5 討論

考證前期，本課題組已對七味藥材進(jìn)行基原考證，結(jié)果所用藥材均為《中華人民共和國藥典》收錄品種，通過度量衡考證可知，記載的“粗末”即《中華人民共和國藥典》中所規(guī)定的粗粉，一錢約為4.13 g，一盞約現(xiàn)今的200 mL。原方中并未規(guī)范煎煮時間，只對劑量作出要求，即“水兩盞，煎至一盞”，煎煮之后所得的水煎液應(yīng)為加水量的一半，中藥煮散劑粒度小，藥性易于煎出，故煎煮適宜短時、快速煎煮[10]。本方通過實(shí)驗(yàn)考察，最終確定以武火煮沸轉(zhuǎn)為文火煎煮20 min，煎煮液為加水量的一半，達(dá)到原文要求。確定工藝制備方法為當(dāng)歸、生地黃、熟地黃、黃芩、黃連、黃柏各2.58 g，黃芪5.16 g，將以上藥材飲片粉碎為粗粉，加水400 mL，武火煮沸轉(zhuǎn)為文火煎煮20 min，至煎液200 mL，濾過，經(jīng)真空冷凍干燥72 h，得當(dāng)歸六黃湯物質(zhì)基準(zhǔn)。

研究建立當(dāng)歸六黃湯指紋圖譜評價方法，最終以出膏率、浸出物含量以及指紋圖譜相似度作為評價指標(biāo)，對由明火天然氣的工藝制備轉(zhuǎn)化為現(xiàn)代使用方便且易得的電陶爐進(jìn)行制備，考察兩種加熱方式的差異性，結(jié)果表明兩種加熱方式相似度高，因此將天然氣轉(zhuǎn)化為電陶爐具有可行性依據(jù)。