國產鹽酸文拉法辛緩釋膠囊的虛擬生物等效性*

王茜，姜紅，周茜，劉晨曦，趙亞萍

(1.湖北中醫藥大學藥學院，武漢 430065；2.湖北省藥品監督檢驗研究院，武漢 430075；3.湖北省藥品質量檢測與控制工程技術研究中心，武漢 430075)

我國仿制藥一致性評價工作自2016年正式展開[1]。作為仿制藥生產大國，我國仿制藥企業占全部藥品生產企業90%以上，仿制藥在已有批號的藥品中超過95%[2-3]，因此對已上市仿制藥品開展一致性評價，是我國當前及今后一段時間的研究熱點。生物等效性實驗是評價口服仿制藥物治療效果一致性的理想方法，但傳統的生物等效性實驗耗資過大。目前為止，基于生物藥劑學分類系統(biopharmaceutics classification system，BCS)分類的體外溶出實驗是最能替代藥物體內生物等效性研究的體外實驗方法[4]。Gastro plusTM軟件在建立藥物的體內外相關性、進行虛擬生物等效性實驗方面使用較為廣泛[5-9]。該軟件基于藥物的理化性質和人體胃腸道的生理特性，模擬藥物在體內的吸收情況，進而評價藥物的生物等效性和仿制藥工藝改進的有效性等。

鹽酸文拉法辛化學名為1-[2-( 二甲胺基 )-1-(4- 甲氧基苯基 ) 乙基 ]環已醇鹽酸鹽，是一種通過抑制5-羥色胺和去甲腎上腺素的再攝取而達到抗抑郁作用的抗重度抑郁藥[10-12]。本研究利用計算機模擬技術建立預測鹽酸文拉法辛緩釋膠囊體內外相關性模型，通過對其體外溶出特性的全面認識，結合鹽酸文拉法辛的BCS特性，探討在體外溶出度實驗中具有不同溶出行為的制劑在體內的藥動學參數(PK參數)，進而評價國產鹽酸文拉法辛緩釋膠囊的生物等效性，同時也為其他仿制藥的一致性評價提供工作思路和參考。

1 材料與方法

1.1藥品與試劑 受試制劑：鹽酸文拉法辛緩釋膠囊(批號：企業1：31811008，企業2：a46926a，規格：每粒75 mg)；參比制劑：鹽酸文拉法辛緩釋膠囊(商品名：怡諾思，Pfizer，規格：每粒75 mg，批號：AG6343)；鹽酸文拉法辛對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：100543-201602，含量：99.9%)；乙腈(色譜純，Merck KGaA)；鹽酸、醋酸鈉、醋酸、磷酸二氫鉀、氫氧化鈉(分析純，國藥集團化學試劑有限公司)；實驗用水為超純水(Milli-Q 制備)。

1.2儀器 高效液相色譜儀(型號：Waters e2695，沃特世科技上海有限公司)，電子天平(型號：XP205，梅特勒-托利多儀器公司，感量：0.01 mg) ，溶出儀(型號：AT-7，SOTAX公司)，真空脫氣儀(型號：ZKT-7F，天大天發科技有限公司)； pH 計(Sevencompact，梅特勒-托利多儀器公司) ； 純水儀(型號：Milli-Q，Merck Millipore公司)；Gastro plusTM軟件(Version 9.6，美國Simulations Plus Inc，包括PBPK模型、PK Plus、Group simulation等模塊)。

1.3溶出度實驗方法 取鹽酸文拉法辛緩釋膠囊的參比制劑和受試制劑，參考文獻[13]，采用籃法，分別以水、pH值1.2緩沖溶液、pH值4.5醋酸鹽緩沖溶液、pH值6.8磷酸鹽緩沖溶液為溶出介質，轉速100 r·min-1，在2，4，6，8，12，16，24 h時取續濾液作為供試品溶液。另精密稱取鹽酸文拉法辛對照品10.46 mg，配置成104.6 μg·mL-1對照品溶液。按照高效液相色譜法測定，以Inertsil C8-3色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以0.1 mol·L-1磷酸二氫鉀溶液-乙腈(70：30)為流動相，檢測波長：225 nm，流速：1.0 mL·min-1，柱溫：40 ℃。精密量取對照品溶液和供試品溶液10 μL，分別注入液相色譜儀，以外標法計算各自溶出量。

1.4虛擬生物等效性研究方法 采用Gastro plusTM軟件，依據鹽酸文拉法辛的理化與生物藥劑學性質參數，結合文獻報道或臨床實驗的人體靜脈給藥、口服緩釋制劑給藥后的藥動學數據作為參照，建立鹽酸文拉法辛的PBPK模型(生理藥動學模型)，建模基本參數如下：相對分子質量277.41，lgP=2.8，pKa=8.94[4]，溶解度641.48 mg·mL-1(pH值6.8) ，滲透性2.268×10-4cm·s-1，擴散系數0.75×105( cm2)-1·s-1，顆粒密度1.2 g·mL-1，粒徑 25 μm，全血/血漿藥物濃度比為1，Fup=73%[4]。采用Gastro plusTM軟件中的群體模擬，將各制劑體外溶出曲線預測的藥時曲線均進行3次正交模擬，模擬的峰濃度(Cmax)與AUC平均值90%置信區間落在參比值80%～125%即認為兩者等效[15]。

2 結果

2.1體外溶出曲線 分別考察鹽酸文拉法辛緩釋膠囊2家國產仿制制劑和參比制劑在模擬人體消化道體內環境的4種溶出介質(pH 值1.2，4.5，6.8，水)中溶出行為，結果見圖1。

A.水；B.pH值1.2；C.pH值4.5；D.pH值6.8。

我國現有仿制鹽酸文拉法辛緩釋膠囊生產企業2家，其中企業1為國產仿制生產企業，企業2為原研地產化生產企業，比較兩家企業與參比制劑在不同溶出介質中的溶出曲線發現，企業2產品與參比制劑在四種溶出介質中的溶出曲線一致，企業1產品的溶出曲線與參比制劑略有區別，表現為前8 h溶出速率較參比緩慢，8 h后溶出曲線與參比基本一致，兩企業生產的仿制制劑與參比制劑溶出曲線f2相似因子值見表1。

表1 不同仿制制劑與參比制劑f2相似因子值

鹽酸文拉法辛作為BCSⅠ類藥物，在不同pH溶液中進行溶解度測定，發現溶解度無pH依賴性，均達到600 mg·mL-1。故鹽酸文拉法辛緩釋膠囊在各溶出介質中的良好溶出主要由活性成分的溶解特性決定，不能反映各仿制企業制劑生產水平的高低，僅用f2因子法無法判定與參比制劑溶出行為是否一致，故采用計算機模擬的方式對其生物等效性進行評價。

2.2PBPK模型的搭建 將理化參數與文獻報道不同給藥方式PK數據輸入Gastro plusTM軟件。采用PK PlusTM模塊計算建立鹽酸文拉法辛緩釋膠囊的體內吸收與處置模型，進行藥物濃度-時間曲線的預測，并對比預測與文獻[14]報道實測藥物濃度-時間曲線之間吻合程度，結果見圖2。模擬結果顯示，主要PK參數的預測值與實測值基本一致，預測的Cmax、AUC值分別為57.15 ng·mL-1、1 108.8 ng·h-1·mL-1，實測的Cmax、AUC值分別為59.79 ng·mL-1、1 338.5 ng·h-1·mL-1[14]。滿足模型預測Cmax、AUC值與實測值的誤差在2倍以內則認為模型預測較為準確的要求[15]。擬合曲線顯示，緩釋膠囊實測數據與預測曲線的點基本重合，表明基于Gastro plusTM軟件，采用文獻中藥動學參數建立的模型能夠較準確地反映鹽酸文拉法辛緩釋膠囊在體內的吸收、分布、清除過程，可用于接下來的體內外相關性模型的搭建和生物等效性研究。

2.3體內外相關性建立 “2.1”項下的溶出曲線表明，4種介質對鹽酸文拉法辛緩釋膠囊幾乎無區分性。通過Gastro PlusTM軟件，比較鹽酸文拉法辛緩釋膠囊參比制劑在水、pH值1.2、pH值4.5、pH值6.8的體內外相關性。首先通過Weibull 方程將體外釋放數據看做為體內釋放并預測PK，再根據預測PK擬合得到藥物體內釋放曲線，將此曲線與體外釋放曲線比較并建立相關性。由于鹽酸文拉法辛緩釋膠囊體外釋放行為各pH條件均一致，故選擇pH值6.8條件下的釋放曲線分析。預測結果見圖3，4所示，在各pH條件下的體外釋放均比體內釋放慢，若直接將緩釋膠囊體外釋放假設為體內釋放，會低估藥物的體內吸收。

A.單劑量給藥；B.多劑量給藥。

A.體外釋放；B.體內擬合釋放。

圖4 不同溶出介質中體外釋放曲線與體內釋放曲線

為更好將體外釋放差異反映體內釋放情況，將體外釋放和體內釋放進行了數據相關性分析，得到相關方程為：Y=1.163 9X+1.077 8，R2=0.998 9，后續可利用獲得的體內外相關性方程，評估體外釋放變化對體內PK和生物等效性(BE)的影響。

2.4文拉法辛緩釋膠囊仿制制劑虛擬生物等效性預測 本研究考察兩家企業鹽酸文拉法辛緩釋膠囊仿制制劑，采用Gastro PlusTM軟件中群體模擬實驗進行虛擬生物等效性研究，群體模擬結果見表2。模擬結果顯示，以Cmax和AUC為指標，企業1制劑結果統計中，文拉法辛Cmax均值90%CI超出原研制劑Cmax均值的80%～125%，說明企業1生產的鹽酸文拉法辛緩釋膠囊與原研緩釋膠囊是生物不等效的； 企業2制劑結果統計中，文拉法辛Cmax和AUC均值90%CI的值均完全在參比均值80%～125%，說明企業2生產的鹽酸文拉法辛緩釋膠囊與原研緩釋膠囊是生物等效的。

表2 溶出曲線模擬PK評估原研制劑與國產制劑生物等效性效果

3 討論

生物等效性實驗是評價固體口服仿制制劑治療效果一致性的理想方法，但是傳統的生物等效性實驗存在諸多限制。而近年來研究認為，基于BCS理論的體外溶出實驗是最能替代藥物生物等效性研究的體外實驗方法。鹽酸文拉法辛作為BCSⅠ類藥物，具有高溶解性，本研究表明僅通過體外溶出實驗及f2相似因子值無法準確判斷仿制制劑與參比制劑是否生物等效。

本研究中，采用溶出度實驗結合計算機模擬軟件Gastro PlusTM對仿制制劑進行虛擬生物等效性研究，Gastro PlusTM被譽為同類軟件中 “黃金標準”。

當前，國內鹽酸文拉法辛緩釋膠囊仿制制劑生產企業有兩家，其中企業1制劑為仿制制劑，而企業2的制劑為原研地產化制劑。從虛擬生物等效性的結果來看，企業1制劑與參比制劑不等效，企業2制劑與參比制劑等效，在驗證該模擬軟件準確性的同時，還提示當前國產鹽酸文拉法辛緩釋膠囊與參比制劑間尚存在一定的差異，提示企業應進一步改進制劑工藝以確保國產仿制鹽酸文拉法辛與參比制劑質量療效的一致性。研究對我國仿制制劑一致性評價工作的展開提供了新的思路，具有一定的理論及實踐意義。