HPLC－ELSD法測定阿膠補血口服液中黃芪甲苷的含量

李 靜，林 曉，高 輝

(1.山東中醫藥大學附屬醫院，山東 濟南 250011;2.山東省藥品檢驗所，山東 濟南 250101)

阿膠補血口服液由阿膠、熟地黃 、黨參、黃芪、枸杞子、白術組成，其功效滋陰補血，補中益氣，健脾潤肺。常用于久病體弱，血虧目眩，虛勞咳嗽［1］，因其療效好而被廣泛應用。黃芪功效成分明確，具有扶正強壯、增強機體抵抗力，其主要成分為黃芪甲苷，因此本文以黃芪甲苷作為含量測定指標，采用高效液相色譜法測定方中主藥黃芪中有效成分黃芪甲苷的含量，為該藥質量控制提供科學依據。

1 儀器與試劑

Agilent1200高效液相色譜儀，Alltech2000 ELSD檢測器，Sartorius CP225D電子天平，KQ－300DE超聲波清洗儀;黃芪甲苷對照品由中國藥品生物制品檢定所提供(批號為110781－200512);阿膠補血口服液由藥圣堂(湖南)制藥有限公司(批號:080204、080202、080301、080302)提供;甲醇、乙腈為色譜純，其余為分析純。

2 方法與結果［1，2］

2.1 色譜條件 色譜柱:Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈－水(34∶66)為流動相;蒸發光散射檢測器;柱溫30℃;流速為1.0 mL·min－1;漂移管溫度為105℃，氣體流量為2.5 L·min－1;理論板數以黃芪甲苷峰計算應不低于4000。

2.2 溶液的制備 對照品溶液:精密稱取在五氧化二磷減壓干燥器中干燥12 h的黃芪甲苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液。

供試品溶液:精密量取本品50 mL，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40 mL，合并正丁醇提取液，用氨水洗滌2次，每次40 mL，棄去氨水溶液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇溶解并轉移至5 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，即得。

2.3 線性關系 精密吸取“2.2”項下黃芪甲苷對照品溶液5、10、15、20、25、30 μL，分別注入高效液相色譜儀，測得峰面積。以黃芪甲苷進樣量的對數值為橫坐標，峰面積積分值對數值為縱坐標，繪制標準曲線，其回歸方程為Y=1.5462X+5.9448，r=0.9998，結果表明黃芪甲苷在 2.57～ 15.42 μg范圍內呈良好的線性關系。

2.4 精密度試驗 精密吸取“2.2”項下黃芪甲苷對照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，連續進樣6次，測定峰面積。以黃芪甲苷的峰面積的自然對數值計算，RSD為0.28%，實驗結果表明本方法進樣精密度良好。

2.5 重復性試驗 按上述條件與方法對同一批號樣品重復分析測定6次，計算黃芪甲苷平均含量為29 μg·g－1，RSD為1.14%(n=6)。實驗結果表明本方法重現性良好，方法可行。

2.6 加樣回收率試驗 精密量取已知含量的樣品(含量為29 μg·mL－1)25 mL，共取6份，分別精密加入黃芪甲苷對照品溶液(0.0629 mg·mL－1)10 mL，按上述方法與條件進行測定，分別計算回收率，結果見表1。

表1 回收率實驗結果

結果表明:測定方法的回收率良好。

2.7 專屬性試驗 按照處方比例，取除去黃芪的其他藥味，按制備工藝方法制得陰性樣品。按上述條件與方法試驗，結果陰性樣品在與對照品色譜峰相應的位置上，無吸收峰。說明處方中其他藥味對測定結果無影響，結果見圖1～3。

圖1 黃芪甲苷對照品HPLC色譜圖

2.8 樣品測定 取4批樣品各2份，分別制備樣品溶液，進行測定，以外標法計算，測定結果見表2。

圖2 阿膠補血口服液HPLC色譜圖

表2 樣品測定結果

3 討論

3.1 本實驗采用三種不同型號的色譜柱，分別是Dikma Kromasil C18(250 mm ×4.6 mm，5μm)、Dikma Diamonsil C18(250 mm ×4.6 mm，5 μm)、依利特 Hypersil BDS C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)對方法耐用性進行了考察。結果三種色譜柱所測得的對稱因子、理論板數等均能符合2005年版藥典對高效液相色譜分析的有關要求，表明該方法測定阿膠補血口服液中的黃芪甲苷對色譜柱選擇性不強，適用范圍廣。

3.2 供試品溶液的制備比較了兩種提取方法:過大孔吸附樹脂提取和直接提取。結果表明過大孔樹脂柱可去除一部分雜質，但同時黃芪甲苷也會損失。為保證黃芪甲苷提取完全，采用直接提取方式。

3.3 實驗結果表明本文測定方法簡便易行，結果準確，重現性好，可有效控制該制劑質量。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2005年版(一部)［S］.北京:化學工業出版社，2005:213.

［2］袁紹莉，張金煉，朱小虎.HPLC－ELSD法測定保兒寧顆粒黃芪甲苷的含量［J］.中華實用醫藥雜志，2005，3(15):15－18.