熒光免疫定量分析法檢測降鈣素原與血培養結果的關系

劉小朵

南通大學附屬通州醫院檢驗科，江蘇南通 226300

據相關調查發現，近幾年臨床出現敗血癥、菌血癥等概率呈升高態勢，對患者的健康及生命安全造成不良危害。感染患者普遍存在發病急、進展快、死亡率高等特點，因此找尋一種快速、便捷、準確的診斷方法至關重要。 熒光免疫定量分析法具有專一性強、靈敏度高、實用性好等優點[1]。血培養是目前較為常用診斷血流感染疾病的措施，然而結果容易受采血位置、采血時機、抗生素藥物等干擾，且診斷周期較長，難以及時得到結果，且容易出現假陰性、假陽性問題。降鈣素原屬于人體蛋白質指標之一，臨床研究發現敗血癥患者普遍存在降鈣素原升高情況，因此提出能否通過檢測降鈣素原用于預測血液感染[2]。該文以2019 年1 月—2020 年1 月該院收治患者1 690 例進行分析，利用熒光免疫定量分析法檢測降鈣素原，分析其與血培養結果的關聯性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取該院收治患者1 690 例作為研究對象，包括男性患者890 例，女性患者800 例；年齡最小為1 歲，最大為 90 歲，平均年齡（45.6±1.3）歲。 所有患者血培養送檢時間和PCT 送檢時間相差不超過24 h ，每次只記錄第1 次血培養和PCT 檢測結果。 經過倫理委員會批準，患者及家屬知情同意。

1.2 方法

要求所有患者在入院后采集血液樣本，血培養遵照SOP 手冊要求選擇合適的采集時間并保證在未使用任何抗生素類藥物的前提下采集，利用此樣本開展PCT 和血培養兩項檢測。

1.2.1 熒光免疫定量分析法 將采集血樣以3 000 r/min離心5 min，提取上清液作為血清樣本以供檢測。使用熒光免疫定量分析儀進行檢測，要求必須使用配套試劑盒，嚴格按照設備說明書開展相關操作[3]。試劑盒顯示PCT 陽性臨界值為0.10 ng/mL，如PCT＞0.10 ng/mL提示PCT 陽性，并按要求進行每日質控活動。

1.2.2 血培養方法 血培養儀為Bact/Alert3D120 瓶，使用配套的培養瓶，鑒定與藥敏采用Vitek-2 全自動分析系統，并按以下要求執行：

①血液采集必須嚴格遵照SOP 標準進行， 最佳時機為患者已出現明顯體溫升高、 寒戰等癥狀時，如入院后未發生也需在使用抗生素藥物前采集，成年人需為 5～10 mL，嬰幼兒則 1 ～5 mL 即可。 血樣采集完成后需在保證無菌的環境中注入全自動血培養設備內，目前我院要求做到雙側單瓶。 ②需及時將培養瓶轉運至檢驗科并置入恒溫培養箱進行培養[4]。 根據儀器提示觀察樣本變化情況， 如血樣當中含有細菌，則其通過生理代謝會產生CO2氣體，此時盛裝樣本的培養瓶底部感應器便會接收到氣體反應，說明培養瓶當中呈細菌陽性。 且隨CO2氣體量的增加，感應器會每隔相應時間檢測1 次。 ③根據感應器定時監測的CO2氣體量制作成變化曲線圖， 同時記錄各報警時間點，待培養7 d 左右后，將感應器提示為陰性性的培養瓶卸載。 ④針對感應器提示為陽性的培養瓶進行檢查，使用無菌一次性注射器采集瓶內樣本，并直接涂抹于載玻片上，待自然干燥后進行革蘭氏染色[5]，記錄形態特征，評估相應危機值，并報告給主治醫生，由醫生判斷患者具體病情狀態。 ⑤將樣本分別接種在血液、巧克力培養基上， 放置在35℃， 含有5%CO2的孵化箱內，24 h 后觀察培養基上菌落生長情況， 挑取單個菌落進行菌種鑒定和藥物敏感性實驗[6]。

1.3 觀察指標

探討血培養結果陽性與陰性患者降鈣素原水平差異，分析血培養陽性患者病原菌分布情況，并對比不同病原菌患者降鈣素原指標。 陽性判定標準：PCT≥0.05 ng/mL。

1.4 統計方法

采用SPSS 21.0 統計學軟件完成數據處理， 計量資料以（）表示，組間差異比較以t檢驗；計數資料以頻數及百分比表示， 組間差異比較以χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血培養結果與降鈣素原水平關系分析

該次1 690 例患者經血培養檢驗，340 例患者結果呈陽性，占比20.11%，1 350 例患者結果呈陰性，占比79.89%， 血培養結果呈陽性患者降鈣素原水平明顯高于血培養結果呈陰性患者， 差異有統計學意義（P＜0.05），見表 1。

表1 血培養結果與降鈣素原水平關系分析[(),ng/mL]

表1 血培養結果與降鈣素原水平關系分析[(),ng/mL]

血培養結果 降鈣素原水平陽性（n=340）陰性（n=1 350）t 值P 值2.71±0.89 0.81±0.35 61.769＜0.05

2.2 血培養陽性患者病原菌分布

340 例血培養陽性患者總計發現病原菌包括革蘭陰性菌、革蘭陽性菌，其中以革蘭陰性菌占比最高，見表2。

表2 血培養陽性患者病原菌分布

2.3 不同病原菌患者降鈣素原水平對比

革蘭氏陰性菌患者降鈣素原水平明顯高于革蘭氏陽性菌及真菌患者，差異有統計學意義（P＜0.05），見表3。

表3 不同病原菌患者降鈣素原水平對比[(),ng/mL]

表3 不同病原菌患者降鈣素原水平對比[(),ng/mL]

血培養結果 降鈣素原水平革蘭陰性菌（n=250）革蘭陽性菌（n=79）真菌（n=11）F 值P 值5.74±1.15 1.62±0.47 1.41±0.39 550.819＜0.05

3 討論

血液感染性病變是臨床較為常見的感染性病變之一，例如敗血癥、菌血癥等，由于血液循環系統遍布全身， 一旦發生血液感染就會引發全身性炎癥反應，如不及時治療很容易累積各類臟器，因此當前臨床對該類病變的重視度越來越高。其中菌血癥即是指外源性細菌經開放性腔室，例如口腔、鼻腔、創口等進入到血液系統當中，進而定植并大量繁殖，隨血液循環至全身各臟器或組織內，造成大范圍感染癥狀。 敗血癥則是在菌血癥基礎上發展而成，在細菌在循環系統內大量繁殖后會釋放相應量的毒素，從而引起全身性重癥感染性病變，且根據所感染細菌種類不同、病情程度不同可分為多種疾病， 例如革蘭氏陰性菌敗血癥、革蘭氏陽性菌敗血癥、膿毒敗血癥等。 患者在發病后具有極高的死亡率，且全身性炎癥還會引發嚴重的高燒、寒戰等明顯癥狀，目前只能通過合理的抗菌藥物方案進行干預，最大程度保障其生存概率。 但與治療其它炎性病變一樣，首先需開展早期診斷，確定患者感染的細菌種類，并根據其藥敏結果選擇相應的抗菌藥物進行針對性治療。

血培養檢測方法在血液感染性疾病中應用時間較早，其操作和判斷方式相對簡便，但所得出的結果具有不穩定性，例如容易產生假陰性，操作過程步驟較多，如其中一步導致樣本污染，那么整體檢驗結果的準確率便會大打折扣，無法滿足臨床醫生判斷的準確需求[7]。

降鈣素原屬于降鈣素的前肽物質，在正常的狀態下無任何激素類活性， 其中絕大部分由甲狀腺C 細胞合成和分泌，屬于典型的糖蛋白類物質。 在健康人血液當中降鈣素原的含量極低，基本維持在0.1 ng/mL以下，當人體感染外源性細菌、病毒或出現過敏性反應時， 該物質在血液中的含量并不會出現明顯變化，但當細菌、微生物等感染引發臟器損傷后，會導致各類細胞因子分泌量增加，此時血液中降鈣素原的含量就會大幅度提升。因此臨床將其作為判斷感染性疾病程度的重要指標，一旦含量超過0.1 ng/mL，則說明患者感染病癥嚴重，需立即開展抗菌治療干預[8]。

根據臨床研究顯示，血液感染性疾病患者中超過90%以上者表現為降鈣素原血清含量超過0.1 ng/mL，且利用降鈣素原檢測方式獲得的陽性率普遍高于常規血液培養檢查，陽性準確率也普遍較高。 同時需要注意的是，部分血樣在血液培養時呈陰性，但經過熒光免疫定量分析法檢測后也可測量到降鈣素原高于0.1 ng/mL 的情況， 這是由于影響降鈣素原分泌量增加的因素有很多種，例如外傷、手術創傷、內分泌失調等，而這些因素也有可能成為引發血液感染性疾病的誘因[9]。因此，實際檢驗時臨床醫生需進一步結合患者自身臨床癥狀和其它指標進行綜合評估，有效排除局限性感染導致的指標異常問題[10-11]。 但從整體角度來看，血液培養檢測周期較長，并受到假陽性或假陰性的影響，不適合用于急性發作類患者[12]。 降鈣素原檢測則更加快速，且可直接反應患者血液感染的程度高低，對于感染源的鑒別也具有一定的指導意義，整體檢驗周期更短， 可有效彌補血液培養檢驗的缺陷，可將二者結合應用于血液感染性疾病的診斷中，以確保治療的準確性和快速性。

該研究結果顯示，血培養結果呈陽性患者降鈣素原水平（2.71±0.89）ng/mL 明顯高于血培養結果呈陰性患者（P＜0.05）。 該研究結果與金鑫[12]文章結果血培養陽性患者 PCT （2.64±1.01）ng/mL 高于陰性患者 PCT（0.79±0.39）ng/mL 相一致。

綜上所述，通過熒光免疫定量分析法檢測降鈣素原水平有助于鑒別診斷患者血流感染病原菌，為臨床提供可靠數據支持。