小兒牛黃清心散對幼年大鼠的毒性作用

范治云， 李志坤， 趙 巖， 孫昌華， 祝清芬

(山東省食品藥品檢驗研究院，國家藥品監督管理局仿制藥研究與評價重點實驗室，山東 濟南 250101)

藥品上市后再評價是對藥品上市前研究的必要補充及上市后研究的全面總結，是藥品評價過程的重要階段。由于歷史原因，大部分中成藥在臨床廣泛使用的同時，其安全性缺乏科學的臨床證據。尤其是近年來，中藥安全事件屢見報端，人們從“中藥安全無毒”的片面認識走入了“中藥謀財害命”的另一個片面認識，其安全性問題成為醫藥界乃至社會各界所關注的熱點[1-2]。小兒牛黃清心散主要由天麻、雄黃等14味中藥配伍而成，為臨床較為常用的兒科藥物[3-5]，其用藥安全性問題更為引起重視，但其安全性研究國內外未見報道[6-7]。為此，本文依據長期毒性實驗方法和技術要求，并根據小兒牛黃清心散兒童用藥的特點，選用幼年大鼠，對其進行了為期14 d的毒性試驗。

1 材料

1.1 動物 SD大鼠，4～5周齡，體質量54～63 g，雌雄各半，購于濟南朋悅實驗動物繁育有限公司，實驗動物生產許可證號SCXK(魯)2014-0007，溫度20～26 ℃，相對濕度40%～70%，實驗動物使用許可證號SYXK(魯)2013-0012。

1.2 藥物 小兒牛黃清心散(山東方健制藥有限公司，批號20160914，0.3 g/袋)。實驗時用蒸餾水配制成所需濃度。

1.3 儀器 ADVIA 2120i全血細胞分析儀(德國西門子公司)；CA-530全自動血凝分析儀(日本希森美康公司)；7180全自動生化分析儀、DCS-600EXV骨密度儀(日本日立公司)；DP72病理圖文處理系統、BX51生物顯微鏡(日本奧林巴斯公司)。

2 方法

參考文獻[8-10]報道。

2.1 分組與給藥 取上述大鼠120只，按體質量隨機分成4組，每組30只，雌雄各半。檢疫7 d后，每籠3只，雌雄分養，并開始給藥，小兒牛黃清心散低、中、高劑量分別用蒸餾水配成62.5、125、250 mg/mL的混懸液，給藥容量15.0 mL/kg，每日上下午各灌胃給藥1次，劑量分別達1.875、3.75、7.5 g/kg，對照組同法給等體積蒸餾水。給藥后予常規顆粒飼料喂飼，連續給藥14 d。每周測體質量2次，攝食量2次，并根據體質量變化調整藥量。每日觀察動物的外觀、行為體征、活動、精神狀態、進食、體質量變化及糞便等情況。在給藥14 d和恢復期(停藥14 d)后，各劑量組分別抽取2/3和1/3的大鼠，麻醉采血后處死。收集全血，檢測血常規、血凝、血生化指標。同時剖取取心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、腦、子宮、卵巢、睪丸、附睪等重要臟器組織，肉眼觀察組織臟器的變化、稱重，計算各臟器指數(單位g/100 g體質量)，并作病理學組織檢查。另取一側股骨作骨密度檢查。

3 結果

3.1 一般觀察 在給藥期間，各劑量組大鼠的外觀體征、行為活動等均無明顯異常；給藥當天下午，藥物組糞便呈土黃色軟便，恢復期停藥第2天，逐漸恢復正常；中、高劑量組大鼠日攝食量降低，體質量增長緩慢；恢復期體質量、日攝食量等均恢復正常。見表1～2。

表1 大鼠給藥前、給藥期間和恢復期體質量

表2 大鼠給藥期間及恢復期日攝食量統計結果(g/只,

3.2 對大鼠血常規、血凝學的影響 給藥結束，其血常規指標無顯著變化(P>0.05)。 高劑量纖維蛋白原(Fbg)指標高于對照組，恢復期恢復正常。血凝學檢查結果見表3～4。

表3 給藥結束血凝學檢查結果(±s, n=10)

表4 恢復期觀察結束血凝學檢查結果

3.3 對大鼠血生化的影響 低劑量組血生化指標無顯著變化(P>0.05)。中劑量大鼠血清丙氨酸轉氨酶(ALT)、總膽紅素(TBIL)、甘油三酯(TG)指標增高；高劑量組大鼠血清丙氨酸轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)、總膽紅素(TBIL)、甘油三酯(TG)指標增高；停藥14 d后，除AST外，其他各項指標基本恢復正常。見表5～8。

表5 雄性動物給藥結束血清生化指標檢測結果

表6 雌性動物給藥結束血清生化指標檢測結果

表7 雄性動物恢復期結束血清生化指標檢測結果

表8 雌性動物恢復期結束血清生化指標檢測結果

3.4 對大鼠臟器系數、骨密度及臟器病理組織學的影響 給藥結束、恢復期結束各組動物組織臟器肉眼觀察其位置，形態，色澤，硬度等均無明顯異常情況，各組主要臟器系數及骨密度與對照組比較均無統計學差異(P>0.05)。組織病理學檢查，本品各劑量組灌胃給藥14 d后恢復14 d，未見明顯藥物相關性組織病理學改變。

4 討論

小兒牛黃清心散由天麻、膽南星、黃連、赤芍、大黃、全蝎、水牛角濃縮粉、僵蠶(麩炒)、體外培育牛黃、琥珀、雄黃、冰片、朱砂等組成， 其中黃連、大黃、牛黃、雄黃等多種成分為黃色，因此大鼠各劑量組連續灌胃給予小兒牛黃清心散后糞便呈黃色為樣品本身顏色所致，無毒理學意義，且停藥后各劑量組大鼠糞便相繼恢復正常。與對照組比較，高劑量組大鼠攝食量顯著降低，體質量呈現顯著抑制作用，這可能與本品含具有瀉下利便作用的大黃等成分有關。

中劑量組大鼠血清ALT、TBIL、TG指標顯著升高；高劑量組大鼠血清ALT、AST、TBIL、TG及血凝Fbg指標顯著升高；停藥14 d后，除高劑量組AST指標外，其他各項指標基本恢復正常。給藥結束和恢復期結束，肉眼觀察和組織病理學檢查各組動物臟器組織均未發現有明顯藥物相關性病理學改變[11-12]，提示中、高劑量的小兒牛黃清心散可能對幼年大鼠的肝、腎功能造成損害[13]，但未造成器質性損害，且這種損害經過一段時間可基本恢復正常。

綜上所述， 小兒牛黃清心散高劑量(7.5 g/kg)、中劑量(3.75 g/kg)、低劑量(1.875 g/kg)(分別相當于14 kg兒童一日最大用量的87.5、43.8、21.9倍)對幼年大鼠重復給藥14 d，恢復14 d，小兒牛黃清心散的毒性靶器官可能為肝、腎，1.875 g/kg為幼年大鼠無毒性反應劑量。本研究為小兒牛黃清心散臨床用藥安全提供了參考，并為更長期的毒性試驗研究提供了數據支持。