烏骨羊超數(shù)排卵效果的研究

任俊光 ，劉 佳 ，李 勇 ，張博宇 ，白恩宇 ，傅丞毅 ，孟 娜 ，菅瑞珍

（1.內(nèi)蒙古草原烏骨羊科技有限公司，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010010；2.內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院 內(nèi)蒙古 呼和浩特 010018）

超數(shù)排卵（通常簡(jiǎn)稱超排）是在繁殖機(jī)能正常母畜發(fā)情周期的適當(dāng)時(shí)期通過注射超過體內(nèi)正常水平的外源性促性腺激素[1]，以提高動(dòng)物體內(nèi)促性腺激素的濃度，繼而誘發(fā)卵巢中本將于排卵前閉鎖的卵泡突破閉鎖機(jī)制，從而使更多發(fā)育成熟的卵泡被排出。應(yīng)用超排技術(shù)可使每次排卵數(shù)由原來的1～3個(gè)增至10～20個(gè)。超數(shù)排卵是胚胎移植的核心技術(shù)環(huán)節(jié)。在家畜胚胎移植技術(shù)中，超數(shù)排卵在單胎或雙胎動(dòng)物胚胎移植中具有重要作用，可以讓優(yōu)良母畜排出比正常多幾倍甚至幾十倍的卵子，從而使其優(yōu)良品質(zhì)得到最大限度的利用。超數(shù)排卵所用激素主要有促卵泡素（FSH）、孕馬血清促性腺激素（PMSG）和促排卵素，前列腺素和孕激素是超排的輔助激素[2]。PMSG的效果比較平緩，使用后卵巢體積不會(huì)劇烈增大，處理后的卵巢容易恢復(fù)正常，排卵比較整齊且排卵效率高，但是由于其半衰期較長(zhǎng)，容易引發(fā)卵巢囊腫，從而引起供體體內(nèi)雌激素水平增高，進(jìn)而對(duì)卵子成熟、受精和胚胎的發(fā)育產(chǎn)生不利影響，導(dǎo)致回收胚胎的質(zhì)量下降[3-5]。在排卵率、受精率和高質(zhì)量胚胎的數(shù)量方面，F(xiàn)SH的超排效果比PMSG好，但FSH的半衰期短，需要進(jìn)行多次注射，處理程度比較繁瑣。人們經(jīng)過綜合對(duì)于后發(fā)現(xiàn)FSH的超排效果較為理想，是目前牛、羊超排中最常用的促性腺激素。

本試驗(yàn)對(duì)比不同季節(jié)烏骨羊的超排數(shù)，確定最佳的超排季節(jié)，為后期對(duì)烏骨羊開展純種擴(kuò)繁技術(shù)提供理論支持。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)時(shí)間和地點(diǎn)

分別于2020年12月與2021年8月在新疆和田皮山縣種羊場(chǎng)進(jìn)行。

1.2 試驗(yàn)羊的選擇與飼養(yǎng)管理

經(jīng)過預(yù)飼養(yǎng)、體格健壯、無傳染性及遺傳性疾病，繁殖機(jī)能正常，經(jīng)產(chǎn)羊沒有空胎史的烏骨羊。所有試驗(yàn)羊均圈養(yǎng)舍飼。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 超數(shù)排卵。任選一天為第0天放栓（同受體同步），開始超數(shù)排卵處理。在第10天采用CIDR（孕酮栓）-FSH（促卵泡素）-LH（促黃體素）法對(duì)供體進(jìn)行超數(shù)排卵，并持續(xù)3 d。

1.3.2 發(fā)情鑒定。第13天供、受體同步取栓，去栓后24 h進(jìn)行發(fā)情鑒定。準(zhǔn)確判斷供體的發(fā)情時(shí)間，從而為確定供體腹腔鏡輸精時(shí)間及胚胎采集時(shí)結(jié)合觀察母羊發(fā)情興奮行為判斷發(fā)情。

1.3.3 采集胚胎與鑒定。在超排供體羊發(fā)情后第3天和第6天，分別進(jìn)行輸卵管、子宮角采胚。將所采集的胚胎進(jìn)行形態(tài)鑒定，并依質(zhì)量好壞分為A、B、C、D4個(gè)等級(jí)[6]，A級(jí)胚胚胎發(fā)育與胚齡一致，形態(tài)完整，結(jié)構(gòu)緊湊，卵裂球輪廓清晰，細(xì)胞團(tuán)致密，色調(diào)均一，本試驗(yàn)只采用A級(jí)胚進(jìn)行胚胎移植。

備選的供體羊在超數(shù)排卵處理前觀察兩個(gè)發(fā)情周期，對(duì)供體羊進(jìn)行外陰部消毒清洗，把 CIDR放入消毒好的PVC投放管內(nèi)，將PVC投放管緩緩放入供體羊的陰道內(nèi)，然后用消毒好的玻璃棒把管內(nèi)的CIDR輕輕推入供體羊的陰道里。在埋入CIDR后的第11天對(duì)肉羊肌肉注射FSH，注射總劑量為350 IU，分3 d逐漸遞減注射量，每日早晚各一次，間隔 10～12 h，早晚注射劑量相同。 在埋植CIDR的第13天上午取出CIDR，同時(shí)每只肉羊注射0.1～0.15 mg PG。第2天開始試情，同時(shí)對(duì)發(fā)情的供體羊采用自然交配配種，8～10 h后復(fù)配一次，直到發(fā)情結(jié)束[6]。

1.4 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)利用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件GraphPad Prism 6.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)釆用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤進(jìn)行表示。

2 結(jié)果與分析

由表1可知，不同季節(jié)在飼養(yǎng)管理、操作方法、激素劑量相同的條件下對(duì)烏骨羊進(jìn)行超排。在冬季（12月份）進(jìn)行了3組試驗(yàn)，A組共有36只受體羊，A級(jí)胚平均出胚數(shù)為3.56，B組共有32只受體羊，A級(jí)胚平均出胚數(shù)為1.94，C組共有37只受體羊，A級(jí)胚平均出胚數(shù)為2.65。相同條件下在秋季（8月份）也進(jìn)行了3組試驗(yàn)，A組共有24只受體羊，A級(jí)胚平均出胚數(shù)為2.96，B組也有24只受體羊，A級(jí)胚平均出胚數(shù)為3.54，C組受體羊數(shù)為19只，A級(jí)胚平均出胚數(shù)為2.68。秋季對(duì)烏骨羊進(jìn)行超排，A級(jí)胚平均出胚數(shù)優(yōu)于冬季，差異不顯著。這表明季節(jié)對(duì)烏骨羊超數(shù)排卵有一定影響。

表1 不同季節(jié)對(duì)烏骨羊的超排效果的影響

3 結(jié)論與討論

北方綿羊是季節(jié)性繁殖動(dòng)物，除湖羊、小尾寒羊和多賽特等品種常年發(fā)情外，大多數(shù)品種都在短光照的秋冬季發(fā)情，每年的繁殖季節(jié)為7～8月；發(fā)情及排卵率在 10月份達(dá)到高峰。繁殖季節(jié)，成年母羊卵巢處于活動(dòng)狀態(tài)，對(duì)激素比較敏感，卵巢發(fā)育較好，卵泡數(shù)量較多且沒有較大卵泡，超排結(jié)果較為穩(wěn)定，且可用胚數(shù)量多。

關(guān)于季節(jié)對(duì)超排效果的影響至今沒有統(tǒng)一的意見。較多研究表明季節(jié)對(duì)超排效果有一定影響。趙霞[7]分別從8月中旬～12月中旬在內(nèi)蒙古地區(qū)對(duì)肉羊進(jìn)行超排試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果表明，8月中旬～11月中旬的秋季肉羊超排效果較好，且較為穩(wěn)定，11月中旬～12月中旬的冬季超排效果不是很好，這與本試驗(yàn)的結(jié)果一致，說明季節(jié)對(duì)肉羊超排效果有一定影響，秋季超排效果優(yōu)于冬季。尹峰[8]分別于春季、夏季、秋季對(duì)羔羊進(jìn)行超排試驗(yàn)。結(jié)果表明，秋季是羔羊超排效果最佳的季節(jié)。袁玉國(guó)等[9]分別于春季與秋季對(duì)山羊進(jìn)行超數(shù)排卵處理。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，秋季山羊的可用胚數(shù)明顯高于春季。余文莉等[10]的研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)氣溫急劇升高或降低時(shí)超排效果也會(huì)出現(xiàn)波動(dòng)，這可能與供體的應(yīng)激性內(nèi)分泌變化有關(guān)。當(dāng)氣溫改變時(shí)，山羊的生理及生殖特性也隨之改變、隨著溫度的升 高或降低，山羊的卵巢對(duì)促性激素的敏感性較為遲緩，所以超排效果會(huì)出現(xiàn)差異。

也有相關(guān)研究表明，季節(jié)對(duì)綿羊的超排效果沒有影響。Lehloenya[11]等分別于秋季和其他季節(jié)對(duì)波爾山羊進(jìn)行超數(shù)排卵。結(jié)果表明，雖然秋季的未受精率顯著高于非繁殖季節(jié)，但是可用胚總數(shù)不受季節(jié)影響，這與趙偉的結(jié)果一致。趙偉等[12]的研究結(jié)果表明，季節(jié)對(duì)排卵數(shù)沒有影響。