參苓白術(shù)散對潰瘍性結(jié)腸炎患者腸道菌群的影響*

楊龍，宋媛媛，牛靜虎

西安市中醫(yī)院，陜西 西安 710001

潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）是一種慢性非特異性結(jié)腸和直腸炎癥性疾病，病因尚不清楚，病變主要累及乙狀結(jié)腸和直腸，可以延伸到降結(jié)腸甚至整個結(jié)腸［1－2］。現(xiàn)代醫(yī)學使用氨基水楊酸類藥物、激素、免疫抑制劑等治療，癥狀可以在短時間內(nèi)得到控制，但長期服用則不良反應(yīng)較多，且停藥后癥狀易反復(fù)。臨床研究表明，參苓白術(shù)散治療潰瘍性結(jié)腸炎脾虛濕盛證療效顯著，可降低復(fù)發(fā)率［3－4］。筆者從調(diào)節(jié)腸道菌群及改善腸黏膜屏障角度探討參苓白術(shù)散治療潰瘍性結(jié)腸炎的相關(guān)機制。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2018年5月至2019年7月在本院住院及門診治療的潰瘍性結(jié)腸炎患者52例，隨機分為對照組和治療組各26例。對照組男13例，女13例；年齡（41.00±7.63）歲。治療組男15例，女11例；年齡（43.00±6.84）歲。健康志愿者20例，為健康組，男10例，女10例；年齡（40.00±7.51）歲。各組年齡及性別比較無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 診斷標準

1.2.1 西醫(yī)診斷標準 參照《炎癥性腸病診斷和治療共識意見（2012年，廣州）》［5］中診斷標準。

1.2.2 中醫(yī)診斷標準 依據(jù)《潰瘍性結(jié)腸炎中醫(yī)診療專家共識意見（2017）》中久痢證，脾虛濕蘊證［6］。主癥：①黏液膿血便，白多赤少，或為白凍；②腹瀉便溏，夾有不消化食物；③脘腹脹滿。次癥：①腹部隱痛；②肢體困倦；③食少納差；④神疲懶言。舌脈：①舌質(zhì)淡紅，邊有齒痕，苔薄白膩；②脈細或細滑。

1.3 病例納入標準符合中西醫(yī)潰瘍性結(jié)腸炎診斷標準；18～60歲；簽署知情同意書。

1.4 病例排除標準細菌性痢疾、阿米巴痢疾、慢性血吸蟲病、腸結(jié)核、缺血性結(jié)腸炎、放射性結(jié)腸炎、結(jié)腸癌等；未定型結(jié)腸炎；兒童炎癥性腸病；妊娠期或哺乳期婦女；合并大腸腫瘤；合并全身其他部位腫瘤及惡性血液病；合并肝硬變、糖尿病、腎功能衰竭、重度脂肪肝、肥胖；病理發(fā)現(xiàn)有結(jié)節(jié)病樣肉牙腫。

1.5 治療方法對照組口服美沙拉嗪腸溶片（德國福克制藥股份有限公司，批號：H20171358），每次1.0 g，每日3次。治療組給予參苓白術(shù)散加減口服，藥物組成：人參15 g，茯苓15 g，白術(shù)15 g，陳皮9 g，蓮子肉9 g，白扁豆（去皮）12 g，薏苡仁9 g，砂仁6 g，山藥15 g，炙甘草9 g。用法：日1劑，水煎，早晚2次溫服。

兩組均以30 d為1個療程，治療1個療程后檢測相關(guān)指標。

1.6 觀察指標采用QIAamp糞便DNA提取試劑盒（QIAamp DNA stool mini kit）對糞便樣本進行總DNA抽提，并對抽提好的總DNA進行檢測。采用熒光分光光度計（Quantifluor－STfluorometer，Promega；Quant－iT PicoGreen dsDNA Assay Kit，Invitrogen）檢測DNA的濃度，并用1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA的質(zhì)量。

針對樣本DNA的V3、V4區(qū)進行PCR擴增，并回收純化樣本，再進行樣本定量并采用標準的Illumina TruSeq DNA文庫制備實驗流程（Illumina TruSeq DNA Sample PreparationGuide），構(gòu)建所需的微生物組上機文庫。

1.7 生物信息學分析首先對高通量測序的原始下機數(shù)據(jù)根據(jù)序列質(zhì)量進行初步篩查，通過質(zhì)量初篩的序列按照引物和Barcode信息，識別分配入對應(yīng)樣本，并去除嵌合體等疑問序列；對獲得的序列在0.97的相似度下進行OTU歸納并劃分，每個OTU的代表序列利用GreenGene數(shù)據(jù)庫進行物種注釋，用于分類地位鑒定以及系統(tǒng)發(fā)育學分析；根據(jù)OTU在不同樣本中的豐度分布，評估每個樣本的多樣性水平；對各樣本在不同分類水平的具體組成進行分析，并檢驗組間是否具有統(tǒng)計學意義；通過與數(shù)據(jù)庫進行對比，分析組間菌群數(shù)量差異。結(jié)果均取常用對數(shù)值（Lg菌落數(shù)／g）形式。

1.8 統(tǒng)計學方法采用SPSS 22.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，服從正態(tài)分布的兩組計量資料之間的比較采用t檢驗。組內(nèi)比較采用配對t檢驗，組間采用兩樣本t檢驗。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組UC患者治療前后菌落數(shù)量比較治療組治療后腸道內(nèi)腸桿菌、腸球菌、梭菌、擬桿菌較治療前顯著下降（P＜0.05），消化球菌、雙歧桿菌、乳桿菌較治療前顯著上升（P＜0.05），對照組腸道菌群變化趨勢與治療組基本一致；組間比較，治療組酵母菌數(shù)量低于對照組（P＜0.05），雙歧桿菌數(shù)量明顯高于對照組（P＜0.05），具體見表1。

表1 兩組UC患者治療前后菌落數(shù)量比較 （LgCFU·g－1）

2.2 兩組UC患者治療前后菌群數(shù)量與健康組比較對照組治療前腸道內(nèi)腸桿菌、腸球菌、消化球菌、梭菌、擬桿菌、雙歧桿菌、乳桿菌、真桿菌與健康組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；治療后除雙歧桿菌外，其他菌群與健康組比較均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。治療組治療前腸道內(nèi)腸桿菌、腸球菌、梭菌、雙歧桿菌、真桿菌與健康組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），治療后除腸桿菌與酵母菌外，其他菌群與健康組比較均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），其中腸球菌、消化球菌、擬桿菌、雙歧桿菌、乳桿菌高于健康組，葡萄球菌與真桿菌低于健康組，見圖1－圖4。

圖1 治療組治療前與健康組菌群數(shù)量比較

圖2 治療組治療后與健康組菌群數(shù)量比較

圖3 對照組治療前與健康組菌群數(shù)量比較

圖4 對照組治療后與健康組菌群數(shù)量比較

3 討論

人體腸道中定值著超過自身細胞10倍以上的腸道細菌［7］，它們在宿主健康與疾病方面起著重要的作用。腸道菌群在維持腸道黏膜通透性、防御外源性微生物入侵、阻止細菌定植等維持腸道黏膜屏障功能方面起著重要的作用［8－9］。腸道菌群紊亂，益生菌數(shù)量下降，致病菌數(shù)量增多，腸道菌群間的平衡被破壞，腸道黏膜屏障功能異常，局部微環(huán)境改變，引起腸道過度炎癥反應(yīng)，是潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病的主要機制之一［10－13］。

腸道中的菌群主要分為厚壁菌、擬桿菌、放線菌及變形菌，其中以厚壁菌與擬桿菌占比較多［14］。研究發(fā)現(xiàn)，潰瘍性結(jié)腸炎患者糞便中作為益生菌的雙歧桿菌、乳桿菌較正常人明顯下降［8－9］。口服雙歧桿菌三聯(lián)活菌膠囊后可直接補充腸道有益菌，競爭性拮抗致病菌在腸道的定植和生長，促進腸道正常菌群的恢復(fù)，維持腸道菌群平衡，重建腸道屏障［15－16］。還可刺激腸黏膜局部相關(guān)淋巴組織，激活局部防御功能，增強腸道抗感染能力。可見，增加益生菌、重建腸道黏膜屏障功能對改善潰瘍性結(jié)腸炎患者癥狀作用突出。

參苓白術(shù)散出自《太平惠民和劑局方》，全方由黨參、茯苓、白術(shù)、桔梗、山藥、陳皮、蓮子肉、砂仁、薏苡仁、白扁豆、甘草組成，適用于脾虛濕盛之潰瘍性結(jié)腸炎，其療效確切，且不良反應(yīng)少［17－20］。有學者臨床觀察參苓白術(shù)散治療潰瘍性結(jié)腸炎的治愈率在96%以上［20］。有研究表明，參苓白術(shù)散可扶植腸道益生菌，明顯增加腸道雙歧桿菌含量，而對于條件致病菌及病原菌則有顯著的抑制作用，尤其能夠有效降低腸道內(nèi)的腸球菌、大腸桿菌的數(shù)量［21］。動物實驗研究表明，黨參的有效成分黨參多糖通過選擇性刺激三種重要益生菌屬（雙歧桿菌屬、阿克曼菌屬及乳桿菌屬）的生長，下調(diào)有害菌屬，從而改善小鼠腸道菌群的紊亂［22］。白術(shù)、茯苓、薏苡仁、山藥在體外對大腸埃希菌、糞腸球菌均有較好的抑菌作用［23］。砂仁具有促進胃液分泌，增強胃腸蠕動的功能，并能抑制大腸桿菌、肺炎克雷伯菌及銅綠假單胞菌等厭氧菌生長［24］，可有效恢復(fù)小鼠的腸道菌群失調(diào)［25］。白扁豆對痢疾桿菌具有顯著的抗菌作用［26］。蓮子具有抗氧化、清除自由基、減輕機體炎癥反應(yīng)的功能［27］。桔梗能增強機體免疫功能，具有抗炎抑菌的功效［28］。甘草能減輕機體炎癥反應(yīng)，抑制枯草芽孢桿菌和大腸桿菌生長［29］。諸藥合用，能促進腸道菌群恢復(fù)動態(tài)平衡，保護腸道黏膜屏障［21］。

本研究發(fā)現(xiàn)，治療組治療后腸道內(nèi)腸桿菌、腸球菌、梭菌、擬桿菌較治療前下降，消化球菌、雙歧桿菌、乳桿菌較治療前上升，對照組腸道菌群變化趨勢與治療組基本一致，但治療后，治療組腸道內(nèi)雙歧桿菌數(shù)量明顯高于對照組，且同時高于健康組。雙歧桿菌是維持腸道微生態(tài)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的重要菌屬，可與腸上皮表面的相關(guān)受體及磷壁酸相結(jié)合，形成菌膜屏障，同時增強腸內(nèi)巨噬細胞的吞噬能力，增強腸道黏膜的抗炎作用［30］。對照組在治療后與健康組比較，雙歧桿菌與乳桿菌數(shù)量升高，但與治療組比較，雙歧桿菌、消化球菌數(shù)量仍較低，而雙歧桿菌、消化球菌可維持腸黏膜通透性，增加腸道黏膜處的黏蛋白、緊密連接蛋白的表達［31］。值得說明的是，本次實驗結(jié)果中，治療后，治療組雙歧桿菌數(shù)量多于健康組，有學者研究發(fā)現(xiàn)，雙歧桿菌主要位于結(jié)腸黏液層，黏液層是腸道物理屏障的主要構(gòu)成部分［8］，雙歧桿菌可以修復(fù)被破壞的腸道黏液層，阻止細菌黏附于腸黏膜，維持腸道穩(wěn)態(tài)，同時在適宜的腸道微環(huán)境中，更適合除雙歧桿菌之外的其他益生菌如擬桿菌、乳桿菌、消化球菌的生長，這將進一步加強腸道機械屏障的防御功能，也從側(cè)面解釋了參苓白術(shù)散療效持久的原因。

此外，筆者還發(fā)現(xiàn)，作為條件致病菌的酵母菌、梭菌的變化為對照組在治療后梭菌數(shù)量低于健康組，但酵母菌數(shù)量仍高于健康組，且治療后對照組酵母菌數(shù)量明顯高于治療組，這說明對照組腸道內(nèi)環(huán)境相對不穩(wěn)定，在適宜情況下會增加致病菌定植的可能性而導(dǎo)致癥狀反復(fù)，這可能是參苓白術(shù)散治療不易復(fù)發(fā)的原因之一。

研究證明，糞便中雙歧桿菌與腸桿菌的數(shù)量比值（B／E值）是評價腸道微生物定植抗力的重要指標，B／E值＜1提示對致病菌的抑制力降低［32－33］。本研究顯示，對照組與治療組在治療前B／E值均小于1，說明腸上皮抗侵襲能力下降，致病菌易于定植而誘發(fā)腸黏膜炎性反應(yīng)。治療后對照組仍小于1，治療組B／E值＞1，表明通過參苓白術(shù)散治療，提高了腸道微生物的定植抗力，恢復(fù)腸黏膜正常通透性，維持局部微環(huán)境的平衡。

綜上，參苓白術(shù)散在治療潰瘍性結(jié)腸炎時能夠以腸道菌群為靶點，輔助益生菌生長，抑制致病菌增殖及定植，維持腸道局部微生態(tài)環(huán)境穩(wěn)態(tài)，保護腸黏膜，從而減輕炎癥反應(yīng)，促進潰瘍愈合。