錳超氧化物歧化酶和過氧化物酶6在彌漫性大B細胞淋巴瘤中的表達及臨床意義

馬淑萍，蒙玉娜，黨春艷，李紅玲

(1.甘肅省人民醫院腫瘤內科，甘肅 蘭州 730000；2.寧夏醫科大學，寧夏 銀川 750000)

彌漫性大B細胞淋巴瘤(Diffuse large B-cell lymphoma，DLBCL)是淋巴瘤的常見亞型，占成人非霍奇金淋巴瘤(Non-hodgkin lymphoma，NHL)的30%～40%[1]。目前DLBCL的發病原因和機制尚不完全清楚，臨床上缺乏特異性診斷標志物[2]。盡管R-CHOP方案可顯著改善患者的治療效果和預后，但仍有10%～15%的患者對治療無效，20%～30%的患者在治療后復發并且預后差[3]。據文獻[4]報道，氧化應激在淋巴瘤的發生與發展中起重要作用，其中錳超氧化物歧化酶(Manganese-containing superoxide dismutase，MnSOD)和過氧化物酶6(Peroxiredoxin 6，PRDX6)是抗氧化應激的相關蛋白。MnSOD、PRDX6分別屬于超氧化物歧化酶家族(SODs)和過氧化物酶家族(PRDXs)。MnSOD可以催化超氧陰離子進行歧化反應生成過氧化氫(H2O2)和氧氣(O2)，隨后PRDX6可將H2O2還原為H2O和O2，兩者在清除氧自由基、保護細胞免受超氧陰離子損害中起重要作用[5-6]。文獻[7-9]報道，MnSOD和PRDX6在多種實體腫瘤中表達異常，兩者均與多種惡性腫瘤的發生與發展密切相關。目前，國內外關于MnSOD和PRDX6表達和DLBCL臨床參數間的研究鮮有報道。本研究通過免疫組化法研究MnSOD和PRDX6的表達與DLBCL 臨床病理特征間的關系，以及兩者在DLBCL的發生與發展中所起的作用。

1 對象與方法

1.1 研究對象 收集2016年1月至2019年12月由甘肅省人民醫院病理科確診的60例初發DLBCL患者作為DLBCL組，其中男性31例，女性29例；年齡12～80歲，中位年齡57歲；其診斷符合WHO 2016年版《淋巴造血系統腫瘤分類標準》。另外，收集同期確診的淋巴結反應性增生(RHL)病例20例作為RHL組，其中男性8例，女性12例；年齡16～70歲，中位年齡44.5歲。兩組患者性別、年齡比較無統計學差異(均P>0.05)。

1.2 主要試劑 本研究采用免疫組化SP法檢測DLBCL及RHL中MnSOD和PRDX6的表達。兔抗人MnSOD多克隆抗體(批號：GR275917-1)、兔抗人PRDX6多克隆抗體(批號：ab133348)購自美國Abcam公司。免疫組化SP試劑盒(批號：SP-1006)購自北京博奧森生物技術有限公司。

1.3 研究方法 所有標本10%中性福爾馬林固定，常規石蠟包埋，連續切片，片厚4 μm。檢測過程嚴格按照試劑盒說明書進行。MnSOD和PRDX6抗體稀釋濃度均為1∶100。結果判定由兩位臨床經驗豐富的病理科醫師采用雙盲法閱片評估：隨機選取5個高倍視野(×400)，每個視野計數100個細胞。染色強度評分：無色為0 分，淡黃為1分，黃褐色為2分，深褐色為3分。陽性細胞所占百分比評分：<5%計0分，6%～25%計1分，26%～50%計2分，51%～75%計3分，>75%計4分。取兩項之積為最終得分：0分為陰性；1～12分為陽性，其中1～4分為弱陽性(+)，5～8分為中度陽性()，9～12分為強陽性()。另外，收集DLBCL組和RHL組的性別、年齡、乳酸脫氫酶(LDH)、B癥狀、國際預后指數(IPI)評分等臨床病例資料進行統計分析。

1.4 統計學方法 采用SPSS 22.0統計學軟件對數據進行分析。計數資料以例表示，組間比較采用χ2檢驗。MnSOD和PRDX6表達水平的相關性采用Spearman相關性分析。P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 兩組患者MnSOD和PRDX6表達比較 見圖1、2。MnSOD和PRDX6主要位于細胞質中，其陽性表達呈棕黃色或棕褐色顆粒。DLBCL組MnSOD和PRDX6陽性表達率為75%(45/60)和35%(21/60)，RHL組兩者陽性表達率為50%(10/20)和5%(1/20)，因此DLBCL組MnSOD和PRDX6陽性表達率高于RHL組(χ2=4.364、5.350，P=0.037、0.021)。

A：MnSOD表達呈陰性；B：MnSOD表達呈中等陽性；C：MnSOD表達呈強陽性

2.2 DLBCL患者臨床病理特征與MnSOD、PRDX6表達的關系 見表1。DLBCL患者臨床分期、B癥狀、IPI評分與MnSOD和PRDX6表達有關，臨床分期越晚(Ⅲ-Ⅳ期)，有B癥狀，IPI評分越高(3～5分)，兩者陽性表達率越高(均P<0.05)。患者年齡、性別及LDH水平與兩者表達無相關性(均P>0.05)。

表1 DLBCL患者臨床病理特征與MnSOD、PRDX6表達的關系(例)

2.3 MnSOD和PRDX6在DLBCL組織中的表達情況 見表2。Spearman相關性分析結果表明，兩者在DLBCL組織中的表達呈正相關(r=0.133，P=0.019)。

表2 MnSOD和PRDX6在DLBCL組織中的表達情況(例)

3 討 論

DLBCL是一組起源于B淋巴細胞的惡性腫瘤，主要表現為高度侵襲性和異質性。其病因目前尚不完全清楚。有研究表明，氧化/抗氧化失衡在淋巴瘤的發生與發展中起重要作用。本研究主要探討MnSOD和PRDX6作為抗氧化應激的蛋白，在DLBCL組織中的表達及其與患者臨床病理特征的關系。

MnSOD是抗氧化酶家族中的一種，被認為是哺乳動物最重要的超氧化物岐化酶(SOD)[10]。其主要功能是通過歧化反應催化O2-生成H2O2和O2，從而保護細胞免受超氧陰離子的損害[5-6]。MnSOD基因定位于染色體6q25，這一位點恰是淋巴瘤、黑色素瘤、卵巢癌等多種腫瘤染色體畸變的好發部位[11]。因此，這一特殊基因位點可能是MnSOD在DLBCL組織中高表達的原因。Oberley等[12]研究發現，MnSOD在卵巢癌、胃癌和結腸直腸癌中表達上調，推測這是白細胞介素-1(IL-1)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)等激活了MnSOD表達的結果，并且認為MnSOD是一種新的腫瘤抑制因子。也有研究[13]發現，MnSOD在胃癌、結直腸癌等腫瘤中表達升高，提示MnSOD與腫瘤的高侵襲性及耐藥性密切相關，并且預后不良。MnSOD不僅在不同腫瘤中表達不一，而且在同一種腫瘤不同時期的表達也不盡一致。Dhar等[14]在皮膚癌的研究中發現，MnSOD在早期呈低表達，而在晚期呈高表達。在某些晚期腫瘤中，尤其是一些轉移性腫瘤中，MnSOD幾乎呈高表達，并促進腫瘤細胞的侵襲遷移[13，15]。目前，MnSOD在淋巴瘤中的報道較少，一項關于淋巴瘤的研究[16]表明MnSOD在T細胞淋巴瘤中表達升高，并且加速了腫瘤的形成，但腫瘤大小并無統計學差異。Tome等[17]在DLBCL患者預后的研究中發現，MnSOD與患者不良預后呈正相關。在本研究中，我們發現MnSOD在DLBCL組織中陽性表達率為75%，這可能是因為炎癥引起氧化應激并釋放大量炎癥因子，通過調控氧化應激相關信號通路使MnSOD其發揮抗氧化作用。此外，DLBCL患者臨床分期越晚，有B癥狀，IPI評分越高，MnSOD的表達就越高，提示MnSOD可能參與了DLBCL的進展。

PRDX6是過氧化物酶家族中的一員，在抗氧化、調節和介導細胞信號等過程中起重要作用[18]。PRDX6可以利用自身谷胱甘肽過氧化物酶活性來清除機體內的H2O2以及其他氫過氧化物，將其還原為H2O和O2，也可以利用磷脂酶A2活性減少磷脂氫過氧化物，調節細胞的凋亡程度。文獻[19-20]報道，PRDX6在肺癌、乳腺癌、皮膚癌等腫瘤中表達增高，并與腫瘤細胞的侵襲轉移有密切關系。Kuusisto等[21]在DLBCL中的研究中發現，PRDX6在DLBCL組織中高表達，并且是獨立于IPI的預后因素。本研究中，PRDX6在DLBCL組織中表達升高，與其他文獻報道一致，并且其表達與臨床分期、B癥狀、IPI評分相關，因此可推測PRDX6也參與了DLBCL的發生與發展。由于與IPI評分相關，可以推測PRDX6與DLBCL的預后相關，但仍需進一步隨訪來驗證。另外，由于PRDX6可促進血管內皮生長因子生成，可以作為潛在的腫瘤標志物，具有較為廣闊的臨床前景。

本研究還發現，MnSOD和PRDX6在DLBCL組織中的表達呈正相關，考慮可能是由于多種調控機制交叉影響及其本身抗氧化作用使兩者發揮協同作用。

綜上所述，MnSOD和PRDX6在DLBCL組織中均呈高表達，與臨床分期、B癥狀、IPI評分相關，可能參與了DLBCL的發生與發展過程，但具體作用機制及其與患者預后的分析仍需進一步研究，以便為今后 DLBCL的診治提供新的思路。