叉頭框轉錄因子M1和增殖細胞核抗原在食管癌組織中的表達及與放化療預后相關性分析

馬顯平，張海斌

(1.陜西省核工業二一五醫院腫瘤放療科，陜西 咸陽 712000；2.銅川市人民醫院普外胸外科，陜西 銅川 727000)

食管癌是我國常見惡性腫瘤，長期占惡性腫瘤死亡的前5位[1-2]。隨著醫學技術的發展，出現了一些新的治療方法及新的治療藥物，但是食管癌患者5年生存率一直維持在20%左右[3]。放化療為中晚期食管癌的主要治療方法，但是除了治療過程中的不良反應外，腫瘤局部未控率和復發率也一直比較高。因此，尋找影響食管癌病情與預后的分子標志物并對其機制進行深入研究，對于改善患者預后具有重要作用[4-5]。現代研究表明食管癌的發生是環境因素與宿主因素相互作用的結果，也是多階段、多基因變化的過程。叉頭框轉錄因子M1(Forkhead box protein M1，FOXM1)可通過與下游基因的啟動子結合，從而調控下游基因轉錄，參與機體DNA損傷修復、細胞周期調控、染色質組裝等多個過程[6-7]。增殖細胞原核抗(Proliferating cell nuclear antigen，PCNA)是反映細胞增殖的主要生物指標之一，其表達水平與細胞增殖和轉移水平密切相關[8-10]。本研究探討FOXM1和PCNA在食管癌組織中的表達與放化療預后的相關性，希望為明確食管癌的發生機制與改善放化療預后提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年6月至2020年6月于本院行同期放化療的86例食管癌患者作為研究對象。其中，男性46例，女性40例；平均年齡(59.38±9.47)歲；平均病灶最大直徑(5.28±0.28)cm；淋巴結轉移32例；組織學高分化28例，低分化22例，中分化36例；臨床分期Ⅱ期42例，Ⅲ期28例，Ⅳ期16例。病例納入標準：所有患者均行病理檢查確診為食管鱗狀細胞癌，具有完整的病灶組織標本與癌旁組織本標(與癌灶距離≥5 cm)；年齡18～80歲；未合并其他惡性腫瘤；臨床分期Ⅱ期及以上。排除標準：懷孕或母乳喂養期間婦女；對本研究放化療藥物過敏者；合并嚴重內科疾病者。患者簽署了知情同意書。本院倫理委員會批準了本研究。

1.2 FOXM1和PCNA表達檢測 取所有患者癌組織標本與癌旁組織標本，即刻置于液氮中-80 ℃保存。制成原位雜交標本，暴露特異性片段，0.1% Tritoon-100和0.1 mol/L PBS溶液孵育30 min，然后室溫固定10 min。每張切片加入20 μl雜交液(FOXM1、PCNA雜交液)，42 ℃雜交過夜。使用DAB進行顯色，蘇木素復染細胞核，顯微鏡下觀察。經Image Pro Plus 6.0軟件分析，計數各視野總細胞數和陽性細胞數，計算標本的FOXM1和PCNA陽性標記指數。

1.3 放化療方法 所有患者都采用相同的放化療方案。放療方案：使用瓦里安直線加速器，采用三維適形放療技術。計劃靶區給予劑量2 Gy/次，5次/周，共5周。完成后縮靶至計劃腫瘤靶區，推量至60 Gy。化療方案：放療第1天為順鉑60 mg/m2，第1～4天為氟尿嘧啶500 mg/m2，4周后重復該化療方案。

1.4 調查資料 調查所有患者的病理資料，包括性別、年齡、淋巴結轉移、組織學分化、病灶最大直徑、臨床分期。同時隨訪到2020年12月1日，調查患者的生存與死亡情況。

1.5 統計學方法 采用SPSS 23.00統計學軟件進行分析，計量資料用均數±標準差表示，行t檢驗或方差分析，相關性分析采用Pearson法，影響因素分析采用Logistic回歸模型，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 食管癌組織與癌旁組織FOXM1和PCNA表達水平比較 見表1(圖1)。食管癌組織FOXM1和PCNA表達水平高于癌旁組織(均P<0.05)。

表1 食管癌組織與癌旁組織FOXM1和PCNA表達水平比較

A：癌組織FOXM1；B：癌旁組織FOXM1；C：癌組織PCNA；D：癌旁組織PCNA

2.2 不同臨床病理特征食管癌患者FOXM1和PCNA表達水平比較 見表2。在食管癌患者中，不同組織學分化、臨床分期、淋巴結轉移、病灶直徑患者的FOXM1和PCNA表達水平對比差異均有統計學意義(均P<0.05)。

表2 不同臨床病理特征食管癌患者FOXM1和PCNA表達水平比較

2.3 食管癌患者放化療預后與FOXM1和PCNA表達水平相關性分析 所有患者經過放化療療治后，隨訪到2020年12月1日，86例患者死亡21例，病死率為24.4%。Pearson分析顯示，食管癌患者放化療預后與FOXM1和PCNA表達水平具有相關性(r=0.542、0.443，均P<0.05)。

2.4 食管癌患者放化療預后影響因素分析 見表3。Logistic回歸模型顯示，FOXM1和PCNA表達水平均為影響食管癌患者放化療預后的重要因素(均P<0.05)。

表3 食管癌患者放化療預后影響因素分析

3 討 論

我國是食管癌高發區，主要集中在太行山區，呈同心圓向外分布。該病的病因包括食物霉菌污染、微量營養素缺乏、遺傳因素等，但具體的發病機制還不明確。為探討FOXM1和PCNA在食管癌組織中的表達及與放化療預后的相關性，本研究選取86例食管癌患者展開研究。目前食管癌主要的治療手段為手術切除治療、化療、放療等，但是預后依然比較差[11-13]。隨著腫瘤分子生物學研究的不斷深入，積極進行分子靶點分析已成為食管癌的研究熱點。

本研究顯示，食管癌組織FOXM1和PCNA表達水平都高于癌旁組織；不同組織學分化、臨床分期、淋巴結轉移、病灶直徑食管癌患者的FOXM1和PCNA表達水平對比差異都有統計學意義。從機制上分析，FOXM1是FOX 轉錄因子家族成員之一，可參與調節細胞凋亡、代謝、增殖與分化，在惡性腫瘤細胞中呈現高表達。FOXM1能夠促進血管生成，為腫瘤的增殖提供大量養分，從而促進腫瘤轉移[14]。李佩琴等[15]發現，FOXM1在食管鱗癌中存在異常表達，經研究證實FOXM1與食管鱗癌細胞分化程度、臨床分期、淋巴結轉移以及預后有很大聯系，能為食管鱗癌的診治提供依據，與本研究結果基本一致。PCNA是一種相對分子量為3.6×104的酸性核蛋白，存在于細胞核內不同部位，其合成與表達與細胞增殖狀態密切相關。PCNA也是細胞核內合成DNA所必需的一種核蛋白，是反映細胞增殖的主要生物指標之一，可參與調節DNA復制。現代研究[16-17]顯示，PCNA在多種惡性腫瘤呈現高表達，可通過對多種基因的轉錄調控實現G2/M和G1/S轉換，推動有絲分裂的進行，可通過調節上皮間質轉化影響腫瘤細胞的遷移。

食管鱗癌主要從基底細胞過度增生、不典型增生進而發展為原位癌，進一步發展為浸潤型食管鱗狀細胞癌[18]。食管癌患者行根治性同期放化療后容易出現各種不良反應，且沒有從根本上提高患者的預后生存率。本研究中，所有患者經過放化療治療后，隨訪到2020年12月1日，86例患者中死亡21例，病死率為24.4%；Pearson分析顯示，食管癌患者放化療預后與FOXM1、PCNA表達水平具有相關性；Logistic回歸模型顯示，FOXM1、PCNA表達水平都為影響食管癌患者放化療預后的重要因素。從機制上分析，FOXM1可通過轉錄激活多種信號通路，作用于食管上皮的相關基因，引起食管上皮細胞癌變[19]；PCNA可在食管上皮癌變不同階段中起重要作用，其高表達可視為惡性腫瘤的危險預后因素[20]。

綜上所述，FOXM1和PCNA在食管癌組織中呈現高表達，與患者的病理特征存在相關性，也是影響患者放化療預后的重要影響因素。然而，本研究沒有進行1年或者多年生存率分析，且納入患者數量比較少，將在后續研究中加以完善。