右美托咪定調控急性痛風性關節炎模型大鼠血清炎性因子水平及滑膜功能效果研究

單兆亞，王 波

(1.陜西中醫藥大學附屬醫院麻醉科，陜西 咸陽 712000；2.寶雞市中醫醫院麻醉科，陜西 寶雞 721000)

急性痛風性關節炎是由于尿酸排泄障礙和嘌呤代謝紊亂，尿酸鹽結晶在組織間沉積，導致人體血尿酸水平異常增高而形成的一種異質性疾病[1]。該病在臨床上主要表現為慢性關節炎、高尿酸血癥、痛風石沉積點，嚴重影響患者的身心健康。痛風具有一定的家族史，但是多數患者的病因未明。痛風發生的機制十分復雜，特別是多種細胞因子、炎性體和炎癥細胞參與了該病的發生[2-3]。血清白細胞介素-1β(IL-1β)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)是痛風急性發作的重要致炎因子，可損壞滑膜細胞結構并使其崩解，能夠引起組織細胞增生，激發機體內膠原酶的活性，觸發炎癥級聯反應，最終導致痛風發生[4]。目前治療痛風廣泛使用的一類藥物是非甾體抗炎藥物，包括秋水仙堿、糖皮質激素類藥物，雖然有一定效果，但是長期服用可能加速關節軟骨病變，抑制軟骨基質成分蛋白多糖合成，停藥后病情易復發[5]。右美托咪定(Dexmedetomidine，DEX)為一種α2腎上腺受體激動劑，對α2腎上腺受體結合力非常強，可緩解機體痛覺過敏，下調脊髓切片和培養傳入神經元中傷害刺激誘發的P 物質和降鈣素基因相關肽的表達，從而抑制外周炎癥因子的釋放[6-7]。本研究探討右美托咪定調控急性痛風性關節炎模型大鼠血清炎性因子水平及滑膜功能的效果，以明確右美托咪定的作用價值與機制。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 成年雄性SD大鼠，平均體重(200±20)g，購于北京斯貝福生物技術有限公司。大鼠飼養在及時更換墊料、恒溫、恒濕、通風良好的SPF級動物房中，供以充足的食物和水，每天接受12 h光照。本研究獲得動物倫理委員會批準。右美托咪定(國藥準字H20090248)、尿酸鈉購于Sigma公司，酶聯免疫檢測試劑盒購于南京建成生物科技有限公司。

1.2 急性痛風性關節炎大鼠模型制備 采用改良Coderre法建立痛風模型，大鼠腹腔注射4%水合氯醛麻醉，取踝關節背側為穿刺點，用無菌注射器至脛骨肌腱內側向踝關節腔內注射100 μl 濃度為2.5 mg/100 ml微晶尿酸鈉混懸液。造模成功標準：造模關節較健側關節皮溫升高，踝關節均出現不同程度紅腫，行走緩慢，骨性標志消失，足爪卷曲，三足步態。

1.3 動物分組與處理 將造模成功的36只大鼠平分為模型組、秋水仙堿組與右美托咪定組，分別給予1 mg/kg 0.9%氯化鈉溶液、1 mg/kg秋水仙堿與1 mg/kg鹽酸右美托咪定灌胃，1次/d，連用14 d。

1.4 觀察指標 ①在治療第7、14天比較三組大鼠足跖容積。②在治療第7、14天比較三組大鼠踝關節腫脹度。③在治療第14天處死大鼠，分離右側踝關節滑膜組織，固定后進行石蠟包埋及組織切片，DAB顯色，蘇木素復染，脫水封片后，于顯微鏡下觀察三組大鼠滑膜組織病理形態變化。同時，取滑膜組織研磨后采用酶聯免疫法檢測UA和CRP含量并進行比較。④在治療第14天處死大鼠，采集腹主動脈血液，每只2～3 ml血置于促凝管，靜置2 h后以1000 r/min離心15 min，取上層血清采用酶聯免疫法檢測IL-1β和TNF-α含量并進行比較。

1.5 統計學方法 應用SPSS 20.00統計學軟件進行分析，計量資料采用均數±標準差表示，組間比較采用單因素方差分析，兩兩對比采用t檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結 果

2.1 三組大鼠不同時間點足跖容積比較 見表1。秋水仙堿組與右美托咪定組治療第7、14天足跖容積低于模型組，且右美托咪定組低于秋水仙堿組(均P<0.05)。

表1 三組大鼠不同時間點足跖容積比較(ml)

2.2 三組大鼠不同時間點踝關節腫脹度比較 見表2。秋水仙堿組與右美托咪定組治療第7、14天踝關節腫脹度低于模型組，且右美托咪定組低于秋水仙堿組(均P<0.05)。

表2 三組大鼠不同時間點踝關節腫脹度比較(%)

2.3 三組大鼠滑膜組織病理形態比較 見圖1。模型組滑膜細胞增生，彌漫性炎癥細胞浸潤，毛細血管充血擴張，間質疏松水腫。秋水仙堿組滑膜組織間無明顯炎癥細胞滲出，水腫減輕，毛細血管無明顯充血，結構基本完整。右美托咪定組滑膜組織間無明顯炎癥滲出，毛細血管充血不明顯，組織水腫減輕，纖維組織排列趨于正常。

2.4 三組大鼠滑膜組織UA和CRP含量比較 見表3。治療第14天，秋水仙堿組與右美托咪定組滑膜組織UA和CRP含量低于模型組，且右美托咪定組低于秋水仙堿組(均P<0.05)。

表3 三組大鼠滑膜組織UA和CRP含量比較

2.5 三組大鼠血清IL-1β和TNF-α含量比較 見表4。治療第14天，秋水仙堿組與右美托咪定組血清IL-1β和TNF-α含量低于模型組，且右美托咪定組低于秋水仙堿組(均P<0.05)。

表4 三組大鼠血清IL-1β和TNF-α含量比較(pg/ml)

A：模型組 B：秋水仙堿組 C：右美托咪定組

3 討 論

急性痛風性關節炎是一種慢性遷延性風濕病，高尿酸血癥是該病發作的重要前提之一。該病男性多發于中年，女性多發病于絕經以后，主要首發于第1跖趾關節，起病急驟、咬噬樣疼痛為典型臨床癥狀，嚴重影響患者的生活質量和工作狀態[8]。本研究參考Coderre的造模方法建立了痛風大鼠模型，各組出現病變關節尿酸鹽沉積，光鏡下可見關節腔內有大量炎性滲出物，局部紅腫明顯，滑膜表層水腫、充血，說明造模成功。

秋水仙素為急性痛風性關節炎的主要治療藥物，能夠干擾細胞的有絲分裂過程，擾亂微管的形成過程，抑制紡錘體的形成，影響細胞的變形和移動能力，從而達到抗炎的目的[9-10]。本研究顯示秋水仙堿組與右美托咪定組治療第7、14天足跖容積和踝關節腫脹度低于模型組，且右美托咪定組低于秋水仙堿組。從機制上分析，右美托咪定屬α2腎上腺素受體激動劑，可作用于脊髓灰質后角，阻礙傷害性傳入纖維匯聚，致使突觸后膜超極化，同時啟動自然非動眼睡眠狀態，從而發揮治療急性痛風性關節炎的作用，降低足跖容積與踝關節腫脹度[11-12]。

急性痛風性關節炎機體伴隨有嘌呤代謝紊亂與尿酸排泄障礙，特別是血尿酸持續升高，在一定程度上可析出尿酸鹽結晶，激發巨噬細胞活性，沉積于關節組織，繼而推動氧化應激反應的發生，促進白細胞大量釋放并聚集，導致局部血管擴張和滲透性增加[13-14]。本研究顯示秋水仙堿組與右美托咪定組治療第14天滑膜組織UA和CRP含量均低于模型組，且右美托咪定組低于秋水仙堿組。從機制上分析，右美托咪定有顯著的鎮痛作用，可以降低單關節炎大鼠致炎側脊髓背角核因子-κB(NF-κB)和p65蛋白的表達，抑制關節炎誘發的膠質細胞活化，改變膠質細胞代謝、形態以及功能，從而抑制UA和CRP的釋放[15]。

急性痛風性關節炎是以關節滑膜炎和骨與軟骨破壞為特征的全身性疾病，也是尿酸鈉鹽在關節及關節周圍組織以結晶形式沉積引起的炎癥反應[16-18]。在這一過程中，巨噬細胞、淋巴細胞等可分泌大量的IL-1β和TNF-α，激活血管內皮細胞表達內皮細胞選擇素的表達，從而刺激中性粒細胞募集至晶體沉積部位，促進膠原酶和其他中性蛋白酶的產生，導致軟骨吸收和骨破壞[19]。本研究顯示秋水仙堿組與右美托咪定組治療第14天血清IL-1β和TNF-α含量低于模型組，且右美托咪定組低于秋水仙堿組。從機制上分析，右美托咪定具有鎮痛和抗炎作用，可促進軟骨基質成分蛋白多糖的合成，消耗機體內的氧自由基，進一步緩解大鼠踝關節腫脹，從而抑制IL-1β和TNF-α的表達[20]。

綜上所述，右美托咪定能夠降低急性痛風性關節炎模型大鼠足跖容積與踝關節腫脹度，抑制UA和CRP的釋放，也可抑制IL-1β和TNF-α的表達。