液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對食品中氯吡脲 殘留的測定

◎ 牛 彥

（1.忻州市綜合檢驗檢測中心，山西 忻州 034000；2.山西省雜糧產(chǎn)品質(zhì)量檢驗中心，山西 忻州 034000；3.忻州市檢驗檢測研究院，山西 忻州 034000）

氯吡脲一般指氯吡苯脲，具有細(xì)胞分裂素活性，廣泛用作農(nóng)業(yè)、園藝和果樹生長調(diào)節(jié)劑[1]。氯吡脲在食品中的痕量殘留會對人體的神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生危害，能造成兒童腦炎、發(fā)育不良等。因此對食品中氯吡脲殘留進(jìn)行檢測顯得尤為重要。

目前，用于氯吡脲的檢測方法主要有高效液相色譜法[2-3]、氣相色譜法[4-5]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[6]等。其中液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法具有靈敏度高、準(zhǔn)確性好等優(yōu)點。而在文獻(xiàn)[7]中，主要涉及水果中氯吡脲殘留量的測定，對其他食品中氯吡脲殘留量的測定鮮有報道。因此，本文通過優(yōu)化質(zhì)譜條件，采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對結(jié)球甘藍(lán)、小麥粉和茶葉中氯吡脲的殘留量進(jìn)行測定，并對其在三者中的基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行了 對比。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

AB SCIEX Triple Quad5500液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀；GT16-3型高速臺式離心機(jī)（北京時代北利離心機(jī)有限公司）；DMT-2500多管漩渦混合儀（杭州米歐儀器有限公司）。

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：甲醇中氯吡脲溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)[壇墨： 1 000 μg·mL-1（GBW（E）084929a）]，4 ℃下保存。

乙腈、甲酸均為色譜純，水為超純水。2 mL QuEChERS離心管（上海安譜實驗科技股份有限公司），無水硫酸鎂，分析純（上海麥克林生化科技有限公司）；氯化鈉，分析純（天津市大茂化學(xué)試劑廠）。

1.2 樣品處理

結(jié)球甘藍(lán)：準(zhǔn)確稱取10.00 g結(jié)球甘藍(lán)置于50 mL離心管中，加入10.0 mL乙腈，渦旋3 min，向離心管中加入4.00 g無水硫酸鎂和1.00 g氯化鈉，渦旋 1 min；然后4 000 r·min-1離心5 min，取1.5 mL上清液帶凈化。

小麥粉：準(zhǔn)確稱取5.00 g小麥粉置于50 mL離心管中，加入10.0 mL水，渦旋30 s使試樣浸潤；加入10.0 mL乙腈，渦旋3 min，向離心管中加入5.00 g 氯化鈉，渦旋1 min；然后4 000 r·min-1離心5 min，取 1.5 mL上清液帶凈化。

茶葉：稱取2.00 g茶葉，提取方式與小麥粉相同。

凈化：將1.5 mL上清液放入2 mL QuEChERS離心管中；渦旋30 s，在5 000 r·min-1離心5 min，取上清液過0.22 μm微孔濾膜，待測。

1.3 計算公式

式中：X-試樣中被測組分含量，mg·kg-1；c-從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線得到的試樣溶液中被測組分的濃度，ng·mL-1；V-試樣溶液定容體積，mL；m-試樣的質(zhì)量， g；c0-空白溶液中被測組分的濃度，ng·mL-1。

1.4 儀器條件

（1）色譜條件。色譜柱：Kinetex?2.6 μm Biphenyl 100 ? LC Column 100×3 mm；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：5 μL。流動相：A為0.1%甲酸水，B為乙腈，流速及梯度比例見表1。

表1 流速及流動相梯度比例表

（2）質(zhì)譜條件。在正離子掃描模式（Q1 MS）下，對氯吡脲的質(zhì)譜參數(shù)及去簇電壓（DP）、碰撞能量（CE）進(jìn)行優(yōu)化，碰撞氣為60.05 kPa，離子源溫度為550 ℃，具體見表2。

表2 質(zhì)譜條件及參數(shù)表

2 結(jié)果與分析

2.1 線性范圍、基質(zhì)效應(yīng)

將氯吡脲儲備液1 000 μg·mL-1用甲醇分兩次稀釋成100 ng·mL-1的中間液，分別吸取10 μL、20 μL、 50 μL、100 μL、200 μL和500 μL中間液，分別用結(jié)球甘藍(lán)、小麥粉、茶葉空白基質(zhì)定容至1 mL，配制成1 ng·mL-1、2 ng·mL-1、5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、20 ng·mL-1和50 ng·mL-1基質(zhì)工作曲線。

圖1為茶葉、結(jié)球甘藍(lán)、小麥粉、溶劑中氯吡脲的標(biāo)準(zhǔn)曲線及相關(guān)系數(shù)。從圖中可以看出，茶葉、結(jié)球甘藍(lán)、小麥粉、溶劑中氯吡脲的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程分別為y=2.377 31×105x-6.491 15×104、y=3.138 38×105x- 3 440.958 93、y=3.386 14×105x+1.390 76×105、y= 5.233 41×105x+1.490 98×105；相關(guān)系數(shù)分別為0.999 45、 0.999 83、0.999 61、0.999 04?？?以看 出 氯 吡 脲 在 1～50 ng·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。表明采用上述優(yōu)化的質(zhì)譜條件以及儀器條件可對茶葉、結(jié)球甘藍(lán)、小麥粉、溶劑中氯吡脲進(jìn)行檢測。

圖1 結(jié)球甘藍(lán)、小麥粉、茶葉、溶劑中氯吡脲的標(biāo)準(zhǔn)曲線及相關(guān)系數(shù)圖

根據(jù)基質(zhì)因子的計算公式：MF=K1/K2，即溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率K2和基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率K1的比值[8]。計算得到氯吡脲在茶葉、結(jié)球甘藍(lán)、小麥粉中的MF分別為0.45、0.60、0.65，可以看出，氯吡脲在茶葉、結(jié)球甘藍(lán)、小麥粉中的MF均小于0.8，可認(rèn)為均具有較強的基質(zhì)抑制效應(yīng)，其中氯吡脲在茶葉中的基質(zhì)抑制效應(yīng)最強。

2.2 回收率及精密度

以陰性結(jié)球甘藍(lán)、小麥粉、茶葉為測試樣品，氯吡脲的加標(biāo)水平分別為2 μg·kg-1、5 μg·kg-1、20 μg·kg-1，每個水平做6個平行樣，外標(biāo)法定量，檢測結(jié)果見表3。

從表3可以看出，在2 μg·kg-1、5 μg·kg-1、20 μg·kg-1的加標(biāo)水平下，結(jié)球甘藍(lán)、小麥粉、茶葉的回收率分別為81%～86%、78%～112%、67%～83%；相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）分別為2.14%～3.24%、4.56%～6.23%、1.93%～6.88%。采用上述優(yōu)化的質(zhì)譜條件及儀器條件可使結(jié)球甘藍(lán)、小麥粉、茶葉中氯吡脲的定量下限達(dá)到2 μg·kg-1，滿足GB 23200.110—2018（定量限為10 μg·kg-1）中測定要求。

表3 氯吡脲在結(jié)球甘藍(lán)、小麥粉、茶葉中加標(biāo)回收率及精密度表

3 結(jié)論

本文建立了采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對食品中氯吡脲殘留量測定的檢測方法，并對氯吡脲在結(jié)球甘藍(lán)、小麥粉和茶葉中的基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)氯吡脲在3種基質(zhì)中均具有較強的基質(zhì)抑制效應(yīng)，在茶葉中的基質(zhì)抑制效應(yīng)最強。通過對質(zhì)譜條件優(yōu)化，使得應(yīng)用于結(jié)球甘藍(lán)、小麥粉和茶葉等食品檢測時，回收率、精密度均能滿足食品殘留分析要求。