UPLC-MS/MS法測定涼皮湯料中的罌粟殼成分

◎ 陳小雪，喬 彬，王 斌

（喀什地區食品藥品檢驗所，新疆 喀什 844000）

近年來，人們越來越關注食品中非法添加劑的問題，黨的十九大報告明確指出“實施食品安全戰略，讓人民吃得放心”。中央已經把食品安全提高到戰略高度，但在食品中非法添加罌粟殼來吸引顧客的行為仍屢禁不止，長期食用含罌粟殼的食品會對人的神經系統、消化系統、內分泌系統造成危害[1-4]。受一些媒體宣傳的影響，大部分人們認為罌粟殼主要存在于火鍋類底料中，但從案件的統計數據可知[5]，被非法添加的食品種類除了火鍋類底料，熟食湯料、菜品調料和涼皮湯也是重災區。特別是在新疆，涼皮作為大眾喜歡的快餐美食，不法商販常會利用罌粟殼的成癮特性，在涼皮湯汁中非法添加罌粟殼，使消費者成癮，以此來增加客源。因此，建立快速篩查涼皮中非法添加罌粟殼的方法就顯得格外重要。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

涼皮樣品（100份），隨機購自喀什市的不同飯店。

嗎啡、罌粟堿、那可丁，購自中國食品藥品檢定研究院；可待因、蒂巴因，購自Stanford Analytical Chemicals inc；嗎啡-D3、可待因-D3，購自Sigma公司；乙腈、甲醇，均為色譜純，購自賽默飛世爾科技有限公司）；甲酸銨、無水硫酸鎂，購自麥克林生化科技公司）；甲酸，色譜純，購自天津市致遠化學試劑有限公司）；水為Milli-Q純水系統制得的高純水。

1.2 儀器

TSQ Quantival and Endura液相質譜聯用儀、MS205DU十萬分之一電子天平、Elmasonic S 100 H超聲波清洗器、Universal 320R高速冷凍離心機。

1.3 溶液制備

1.3.1 標準溶液

分別精密稱取標準品適量，用0.5%甲酸甲醇溶液溶解，配制成100 μg·mL-1的單一成分標準品儲備液，于-18 ℃下冷凍保存。取上述單標準儲備液，用乙腈稀釋成1 μg·mL-1的標準混合工作液。取適量嗎啡-D3和可待因-D3標準溶液，用水稀釋成10 μg·mL-1同位素內標工作溶液。

1.3.2 供試品溶液精密稱取涼皮湯汁2 g于50 mL聚四氟乙烯具塞離心管中，加入100 μL同位素內標工作溶液（10 μg·mL-1）， 渦旋振蕩30 s，準確加入15 mL乙腈，密封，渦旋振蕩1 min，超聲處理30 min，取出，加入6 g無水硫酸鎂和1.5 g無水醋酸鈉的混合粉末，立即渦旋振蕩 2 min，使吸附樣品中的全部水分，以8 000 r·min-1離心5 min，取上清液，作為供試品溶液。

1.4 色譜-質譜條件

1.4.1 色譜條件

BEH HILIC柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）；柱溫35 ℃；流速0.3 mL·min-1；進樣體積5 μL；流動相：含0.1%甲酸的乙腈（A）-含0.1%甲酸的 0.01 mol·L-1甲酸銨溶液（B）；梯度洗脫：0～1 min， 95%A；1～6 min，85%A；6～8 min，85%A； 8～8.1 min，95%A；8.1～10 min，95%A。

1.4.2 質譜條件

電離方式：電噴霧離子源；電離模式：正離子掃 描；檢測方式：多反應檢測（MRM）；霧化溫度： 350 ℃；離子傳輸管溫度：350 ℃；毛細管電壓3 500 V；鞘氣：35（Arb）；輔助氣：10（Arb）。7種化合物監測離子對及相關參數設定見表1。

表1 7種化合物質譜參數表

2 結果與分析

2.1 色譜柱選擇

考察了4種不同高效液相色譜柱對各組分的分離效果，結果表明，BEH HILIC色譜柱（2.1 mm×100 mm， 1.7 μm）流動相選0.1%甲酸的乙腈-0.1%甲酸的 0.01 mol·L-1甲酸銨溶液分離效果最好，且峰形更佳；Thermo C18柱（100 mm×2.1 mm，1.9 μm）流動相選0.1%甲酸的甲醇-0.1%甲酸的0.01 mol·L-1甲酸銨溶液分離效果較好；CAPCELL PAK ST色譜柱（2.0 mm× 100 mm，5 μm）、CAPCELL PAK CR色譜柱（2.0 mm× 100 mm，5 μm）分離效果一般。

2.2 混合標品線性關系考察

取標準工作溶液進樣，以罌粟堿、那可丁和蒂巴因的色譜峰面積為縱坐標，罌粟堿、那可和蒂巴因的濃度為橫坐標繪制標準工作曲線，外標法定量；以嗎啡和可待因的峰面積與相應內標物峰面積的比值為縱坐標，嗎啡和可待因的濃度為橫坐標繪制標準工作曲線，內標法定量[5]。5種化合物的回歸方程及線性范圍見表2。

表2 5種化合物線性方程表

2.3 單一標品檢出限與線性范圍

試驗還考察了單一標準品的檢出限和線性范圍，單一標準品罌粟堿、那可丁、蒂巴因0.1 ng·mL-1檢出，嗎啡、可待因1 ng·mL-1檢出，1～1 000 ng·mL-1范圍內線性關系良好，相關系數均大于0.999 0，5種標準品混合濃度100 ng·mL-1以上定量結果較好。

2.4 精密度試驗

精密吸取標準工作溶液5 μL，連續進樣6次，記錄峰面積，計算嗎啡、罌粟堿、那可丁、可待因、蒂巴因、嗎啡-D3和可待因-D3峰面積的RSD（n=6），分別為3.4%、3.2%、2.0%、5.7%、4.6%、7.9%和4.1%。

2.5 加樣回收率試驗

精密稱取陰性樣品6份，加入混合標準品溶液適量（1 μg·mL-1），按照“1.3”項下方法制備，作為回收率供試品溶液，按“1.4”項下色譜-質譜條件進行測定。結果嗎啡、罌粟堿、那可丁、可待因、蒂巴因的平均加樣回收率（n=6），分別為71.2%、85.3%、80.7%、73.2%和73.0%，RSD分別為7.2%、4.6%、7.6%、6.0%和7.9%。

2.6 樣品測定

100批涼皮樣品，分別按照“1.3”項下方法制備供試品溶液，“1.4”項下色譜-質譜條件進行測定，如果供試品中色譜峰的保留時間與混合標準溶液中某一組分保留時間一致（變化范圍在±2.5%），試樣中定性離子對的相對豐度與濃度相當的混合對照品溶液的相對豐度一致（相對豐度偏差不超過規定的范圍），則可判定為試樣中存在該組分[6]。100批涼皮中2批檢出罌粟堿，陽性率2%。

3 結論與討論

針對在食品中添加罌粟殼犯罪的原因進行分析可知，線索收集難，添加罌粟殼的食品沒有特殊的顏色和味道，不但消費者很難辨別，有時甚至可以瞞過監管部門的檢查。調查取證難。罌粟殼的添加方式愈發隱蔽，一些案件也由于證據不全、證據受損或程序違法而難以進入刑事程序。為有效打擊這種非法添加行為，保障飲食安全，本試驗采用超高效液相色譜-串聯質譜法，通過檢測設定好的特征離子對的方式來進行定性及定量檢測，與常規方法相比，該法特異性高，受樣品中其他物質的干擾小，能快速準確的篩查特定物質，充分發揮食品快檢分析在監管執法中的重要作用，提高監管工作的針對性，為更好打擊不法行為提供可靠的技術保障。