外周血T-SPOT試驗聯合血沉檢測對肺結核患者診斷效能的影響

王菊紅，張文艷

(1.平頂山市傳染病醫院 檢驗科，河南 平頂山 467000；2.鶴壁市傳染病醫院 檢驗科，河南 鶴壁 458030)

肺結核作為慢性傳染性疾病，多因結核分枝桿菌感染，可通過多種途徑傳播，浸潤全身器官，引發器官病變，嚴重影響患者生活質量與健康[1]。因肺結核無特異性癥狀，患者無法察覺異常，而臨床常用檢測手段可受人體免疫系統影響，導致診斷準確率降低。目前臨床最準確診斷肺結核方式為病原學檢測，但因其取樣時間較長、取樣要求較高，對早期肺結核診斷具有一定局限性[2]。相關研究認為，肺結核感染早期，可通過外周血結核感染T 細胞斑點試驗刺激外周血單個核細胞(PBMC)，通過釋放γ- 干擾素確認是否感染，且此檢測手段不受疫苗影響，為臨床診斷肺結核主要方式之一[3]。紅細胞沉降率作為急性時相蛋白，常用于評估炎癥反應進展情況，為監測疾病活動嚴重程度重要指標[4]。但上述診斷方式單一使用均具有一定局限性，基于此，本研究探討外周血T-SPOT 試驗聯合血沉檢測對肺結核診斷準確率、敏感性、特異度的影響，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取平頂山市傳染病醫院2018年8月至2019年3月收治的270 例肺結核患者作為觀察組，其中男185 例，女85 例；年齡40～78 歲，平均(58.14±6.40)歲。同時選取254 例非肺結核患者作為對照組，其中男163 例，女91 例；年齡42～80 歲，平均(60.29±5.72)歲；疾病類型：肺炎67 例，支氣管擴張43 例，肺膿腫65 例，間質性肺炎79 例。兩組基線資料(性別、年齡)比較，無統計學差異(P＞0.05)，具有可比性。本研究經本院倫理委員會審核批準。

納入標準：觀察組符合《肺結核基層診療指南(2018年)》[5]診斷標準；伴不同程度發熱、消瘦、乏力；經影像學檢查肺部存在陰影。

排除標準：合并嚴重心、肝、腎等臟器功能障礙；生命體征不穩定；臨床資料不完整。

1.2 方法

1.2.1 外周血T-SPOT 試驗

外周血T-SPOT 試驗方法：抽取兩組患者空腹靜脈血8 mL，肝素抗凝，充分搖勻，3 000 r/min 離心20 min，獲取外周血單個核細胞(PBMC)，操作步驟嚴格按照T-SPOT 試劑盒說明書進行。分別取抗原A(結核分枝桿菌特異混合多肽A)、抗原B(結核分枝桿菌特異混合多肽B)、空白對照細胞培養液、陽性對照植物血凝素各50 μL，加之至抗體微量板檢測孔中，100 μL/ 孔，后置于含5% CO2恒溫37℃培養箱中，孵育16～20 h，自培養箱中取出微量板，倒出培養液，使用磷酸鹽緩沖液沖洗≥3 遍，加入磷酸緩沖鹽溶液200 倍稀釋濃縮標記抗體試劑，將其制作為標記抗體工作液，倒入檢測孔中，50 μL/ 孔，培養箱溫度調節至2～8 ℃孵育1 h，后沖洗≥3 遍。每個檢測孔內加入50 μL 底物顯色溶液，室溫孵育7 min，使用離子水徹底清洗檢測板，終止反應，后置于37 ℃保溫箱中烘干，觀察每個檢測孔內深藍色清晰斑點。

T-SPOT 判定標準：空白對照孔斑點數0～5 個，且抗原A 或B 檢測孔內版點數—空白對照孔斑點數≥6 個，即為陽性；空白對照孔斑點數6～10 個，且抗原A 或B斑點數—空白對照孔斑點數≥2×空白對照組孔斑點數，即為陽性。未達上述標準，且陽性對照孔正常者為陰性。

1.2.2 血沉檢測

血沉檢測：抽取兩組患者外周靜脈血3 mL，置于試管內，充分搖勻，打開試管點帽，將其垂直插入血管測試至試管入口位置，完全封閉。旋轉測試管及試管，自下向上輕推試管，確保血流至零刻度處與封鎖喉結合，裝置自動封閉系統，垂直向上放置于試管架上，1 h 后讀數。

血沉判定標準：男性正常紅細胞沉降率＜15 mm/h，女性紅細胞沉降率＜20 mm/h，未達上述標準即為陽性。

1.3 觀察指標

①比較兩組抗原A 點數、抗原B 點數、紅細胞沉降率結果。②比較外周血T-SPOT 試驗、血沉檢測及聯合檢測診斷結果，聯合診斷中單一陽性即為陽性。③比較外周血T-SPOT 試驗、血沉檢測及聯合檢測的診斷準確率、敏感性及特異度。

1.4 統計學分析

采用SPSS 22.0 對數據進行分析，計量資料以±s表示，行t檢驗；計數資料以n(%)表示，行χ2檢驗；P＜0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 抗原A 點數、抗原B 點數、紅細胞沉降率

觀察組抗原A 點數、抗原B 點數、紅細胞沉降率高于對照組，差異有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 兩組抗原A點數、抗原B點數、紅細胞沉降率比較(±s)

表1 兩組抗原A點數、抗原B點數、紅細胞沉降率比較(±s)

紅細胞沉降率/(mm·h-1)觀察組27050.18±18.4330.64±12.5831.35±10.49對照組2541.43±0.291.48±0.726.07±3.04 t 42.14936.88336.973 P＜0.001＜0.001＜0.001組別例數抗原A點數抗原B點數

2.2 外周血T-SPOT 試驗、血沉檢測及聯合檢測診斷結果

外周血T-SPOT 試驗檢查肺結核249 例，非肺結核275 例；血沉檢測肺結核249 例，非肺結核275 例；聯合檢測肺結核287 例，非肺結核237 例。見表2。

表2 外周血T-SPOT試驗、血沉檢測及聯合檢測診斷結果

2.3 外周血T-SPOT 試驗、血沉檢測及聯合檢測診斷效能

聯合檢測準確率93.89%、敏感性95.19% 較外周血T-SPOT 試驗87.98%、84.44%，血沉檢測86.07%、82.59% 高，差異均有統計學意義(P＜0.05)；聯合檢測特異度88.19% 與外周血T-SPOT 試驗91.73%、血沉檢測89.76%比較，差異均無統計學意義(P＞0.05)。見表3。

表3 外周血T-SPOT試驗、血沉檢測及聯合檢測診斷效能

3 討論

肺結核作為嚴重傳染性疾病，發病率呈逐年升高趨勢，相關研究表明，2016年全球新發肺結核患者1 040萬人，死亡130 萬人[6]。肺結核患者多合并肺部感染，若未能及時治療易擴大病灶，加重疾病進展，甚至誘發呼吸衰竭，危及患者生命安全。因此，對肺結核患者進行準確、及時的治療，是控制病情進展、消除傳染源、改善患者預后的主要措施。

伴隨細菌學、影像學等相關診斷技術進步，合并癥、免疫損傷等肺結核患者逐漸增多，促使肺結核診斷日趨復雜。影像學檢查雖能有效檢測粟粒肺結核、活動性肺結核，但對早期無明顯癥狀、潛在性肺結核診斷效能較低[7]。病理學檢測雖具有較高診斷價值，但其創傷性、操作要求較高等因素，使其具有一定局限性。外周血T-SPOT 試驗基于T 淋巴細胞檢測原則基礎上，通過結合特異性抗原，刺激γ-干擾素釋放，加之斑點技術分析，科學計算抗原特異性細胞頻率，提高診斷準確率[8]。另外，外周血T-SPOT 試驗可根據單個外周細胞，檢測其反應，具有較高敏感性，可準確反映患者病情嚴重程度，但此類檢測方式對無特異性癥狀肺結核患者診斷準確率較低，因此，聯合其他方式予以診斷，以提高臨床診斷準確率。血沉檢測指紅細胞于靜止狀態下每小時下沉速度，由于紅細胞因細胞膜表面唾液酸所具負電荷等因素相互排斥，促使細胞分散懸浮，多數情況下，紅細胞沉降率可保持平衡狀態，但在器質性疾病或病變活動期時，紅細胞沉降率均呈異常升高趨勢[9]。相關研究表明，活動性肺結核患者血清中，紅細胞沉降率異常升高狀態，可作為評價肺結核活動度指標[10]。雖血沉檢測快速、準確，但敏感性不高，受較多因素影響，易出現結果誤差。因此，臨床認為二者聯合使用，可取長補短，提高診斷效能。本文結果顯示，觀察組抗原A 點數、抗原B 點數、紅細胞沉降率高于對照組，聯合檢測準確率、敏感性較外周血T-SPOT 試驗、血沉檢測高，差異均有統計學意義(P＜0.05)。由此可見，外周血T-SPOT 試驗聯合血沉檢測在肺結核疾病檢測中均可發揮良好指導作用，且準確率、敏感性均＞90%，由此表明，二者聯合診斷可有效彌補自身不足，提高臨床診斷有效性及科學性。

綜上所述，外周血T-SPOT 試驗聯合血沉檢測可提高肺結核診斷效能，為臨床診療提供科學依據。