PPAR-γ、MMP-3及Bcl6水平變化與RA病情活動(dòng)性和病理評(píng)分的相關(guān)性

莊建陽(yáng) 劉雪梅 代思明 王艷麗 李恒

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（Rheumatoid Arthritis，RA）是一種致使周圍關(guān)節(jié)受累的多系統(tǒng)性炎癥性疾病［1］。RA 病情持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，易反復(fù)發(fā)作，嚴(yán)重影響患者的相關(guān)活動(dòng)功能［2］。近年來隨著人口老齡化，RA 發(fā)病率呈不斷上升趨勢(shì)發(fā)展。臨床實(shí)踐顯示RA 早期及時(shí)規(guī)范的治療后預(yù)后較好，但該疾病早期病情隱匿，診斷較困難。故尋求能為RA 診斷、病情監(jiān)測(cè)提供可靠依據(jù)的分子標(biāo)記物成為國(guó)內(nèi)外學(xué)者關(guān)注的焦點(diǎn)［3］。過氧化物酶體增殖活化受 體-γ（peroxisome proliferator-activated receptors，PPAR-γ）是一類配體依賴序列特異的核轉(zhuǎn)錄因子，在炎癥反應(yīng)中的作用引起了人們的關(guān)注［4］。研究發(fā)現(xiàn)，PPAR-γ 在自身免疫反應(yīng)及炎癥過程中發(fā)揮重要作用［5］。基質(zhì)金屬蛋白酶3（Matrix metalloprotein-3，MMP-3）是滑膜分泌的細(xì)胞因子，Han 等學(xué)者［6］報(bào)道，MMP-3 對(duì)金屬蛋白酶和其它蛋白水解酶的合成起著重要調(diào)節(jié)作用。Tsai 等［7］研究發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)錄抑制因子B 細(xì)胞淋巴瘤因子6（B cell lymphoma，Bcl6）與免疫系統(tǒng)的炎癥反應(yīng)相關(guān)。本研究就PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中的表達(dá)及其與病情活動(dòng)性及滑膜炎病理評(píng)分的相關(guān)性進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年8月至2020年8月本院收治的102 例RA 患者作為研究組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)［7］，并結(jié)合實(shí)驗(yàn)室檢查以及影像學(xué)檢查明確診斷。②臨床資料完整，均自愿參加本次研究，并簽署相關(guān)協(xié)議書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①存在其他系統(tǒng)疾病或惡性腫瘤等疾病患者；②伴隨嚴(yán)重心、肝、腎功能不全患者；③合并有免疫系統(tǒng)的其他疾病患者；④存在精神疾病無法配合本研究或依從性差者。根據(jù)《RA 患者的病情評(píng)分（Disease activity score 28，DAS28）》進(jìn)行活動(dòng)度劃分［8］：2.6＜DAS28≤3.2 為低活動(dòng)度組：29 例；3.2＜DAS28≤5.1 為中活動(dòng)度組：45 例；DAS28＞5.1為高活動(dòng)度組：28 例。

選取同期進(jìn)行健康體檢的102 例健康志愿者作為對(duì)照組。兩組性別、年齡、體質(zhì)指數(shù)等一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過。

表1 兩組一般資料比較［n（%），（±s）］Table 1 Comparison of general data between 2 groups［n（%），（±s）］

表1 兩組一般資料比較［n（%），（±s）］Table 1 Comparison of general data between 2 groups［n（%），（±s）］

組別研究組對(duì)照組χ2/t 值P 值n 102 102性別（n）男29（28.43）31（30.39）0.094 0.759女73（71.57）71（69.61）年齡（歲）48.42±11.32 46.03±13.17 1.390 0.166體質(zhì)指數(shù)（kg/㎡）23.53±3.14 24.26±2.33 1.886 0.061

1.2 檢測(cè)方法

取所有受試者清晨空腹靜脈全血5 mL，采用未加抗凝劑的標(biāo)準(zhǔn)采樣管進(jìn)行采集，離心（3 000 r/min，10 min）取血清后分別存放在聚丙烯EP 管中，在-80℃冰柜中待檢。采用熒光定量PCR 檢測(cè)PPAR-γ的表達(dá)；采用雙抗體夾心法檢測(cè)MMP-3 的表達(dá)。通過細(xì)針滑膜活檢術(shù)獲取滑膜組織，采用免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)Bcl6 的表達(dá)，檢測(cè)嚴(yán)格按照使用說明書進(jìn)行。Bcl6 陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)［9］：由2 名以上病理學(xué)專家復(fù)核判斷，取兩者平均分為最后得分用，Bcl6 呈細(xì)胞核著色，根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞百分比、染色強(qiáng)度判定。0 分無陽(yáng)性細(xì)胞，1 分陽(yáng)性細(xì)胞5%～10%，2 分10%～50%，3 分＞50%。染色強(qiáng)度判定：0 分無色，1 分淡黃色，棕黃色2 分，棕褐色3 分。總積分：上述2 項(xiàng)評(píng)分的乘積。陽(yáng)性：總積分≥3 分。

1.3 觀察指標(biāo)

①比較兩組不同人群的PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 表達(dá)水平；②比較不同病情活動(dòng)程度RA 患者PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 表達(dá)水平；③分析PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 與RA 患者病情活動(dòng)程度及滑膜炎病理評(píng)分的相關(guān)性。滑膜炎病理Krenn’s 評(píng)分［10］，即為滑膜襯里層增生評(píng)分、襯里下層炎癥程度評(píng)分以及血管生成情況評(píng)分累計(jì)總和，0 分表示無滑膜炎癥；1 分表示輕度滑膜炎癥、炎性細(xì)胞輕度浸潤(rùn)；2 分表示中度滑膜炎癥、炎性細(xì)胞中度浸潤(rùn)；3分表示重度滑膜炎癥、炎性細(xì)胞重度浸潤(rùn)。由2 位風(fēng)濕科醫(yī)生進(jìn)行雙人雙盲評(píng)分，取兩者平均分為最后得分。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用（）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用F檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用n（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)；采用Spearman分析PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 與RA 患者病情活動(dòng)程度及滑膜炎病理評(píng)分的相關(guān)性，以P＜0.05 為差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2 組PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 表達(dá)水平比較

研究組PPAR-γ、MMP-3 水平及Bcl6 陽(yáng)性表達(dá)率高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2、圖1。

表2 2 組PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 表達(dá)水平比較［n（%），（±s）］Table 2 Comparison of PPAR-γ，MMP-3 and Bcl6 expression levels of the 2 groups［n（%），（±s）］

表2 2 組PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 表達(dá)水平比較［n（%），（±s）］Table 2 Comparison of PPAR-γ，MMP-3 and Bcl6 expression levels of the 2 groups［n（%），（±s）］

組別研究組對(duì)照組t/χ2值P 值n 102 102 PPAR-γ（pg/mL）38.52±21.43 10.01±3.04 13.303＜0.001 MMP-3（pg/mL）72.54±21.42 30.26±8.72 18.464＜0.001 Bcl6陽(yáng)性85（83.33）0（0.00）145.714＜0.001陰性17（16.67）102（100.00）

圖1 Bcl6 免疫組化染色（SP，×400）Figure 1 BCL6 immunohistochemical staining（SP，×400）

2.2 不同病情活動(dòng)程度RA 患者PPAR-γ、MMP-3及Bcl6 表達(dá)水平比較

PPAR-γ、MMP-3 水平及Bcl6 陽(yáng)性表達(dá)：重活動(dòng)度組＞中活動(dòng)度組＞低活動(dòng)度組，各組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表3 不同病情活動(dòng)程度RA 患者PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6表達(dá)水平比較［n（%），（±s）］Table 3 Comparison of expression levels of PPAR - γ，MMP-3 and Bcl6 in RA patients with different disease activity［n（%），（±s）］

表3 不同病情活動(dòng)程度RA 患者PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6表達(dá)水平比較［n（%），（±s）］Table 3 Comparison of expression levels of PPAR - γ，MMP-3 and Bcl6 in RA patients with different disease activity［n（%），（±s）］

注：a 與低活動(dòng)度組相比，P＜0.05；b 與中活動(dòng)度組相比，P＜0.05。

組別低活動(dòng)度組中活動(dòng)度組重活動(dòng)度組F 值P 值n 29 45 28 PPAR-γ（pg/mL）18.39±11.60 32.15±17.62a 41.34±24.55ab 11.25＜0.001 MMP-3（pg/mL）51.63±16.75 67.49±18.39a 83.58±25.27ab 18.01＜0.001 Bcl6 陽(yáng)性19（65.52）39（86.67）27（96.43）10.445 0.005

2.3 PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 與RA 患者病情活動(dòng)程度及滑膜炎病理評(píng)分的相關(guān)性

Spearman 相關(guān)分析顯示，PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 與RA 患者病情活動(dòng)程度及滑膜炎病理評(píng)分呈正相關(guān)（P＜0.05）。見表4。

表4 PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 與RA 患者病情活動(dòng)程度及滑膜炎病理評(píng)分的相關(guān)性Table 4 Correlation of PPAR-γ，MMP-3 and Bcl6 with disease activity and synovitis pathological score in RA patients

3 討論

RA 是一類在多種因素作用下發(fā)生的自身免疫性疾病，具有較高的致殘率。我國(guó)是RA 的高發(fā)地區(qū)，目前大約有400～500 萬人患有該疾病，發(fā)病率約占0.32%～0.36%［11］。RA 早期易出現(xiàn)關(guān)節(jié)功能受限、疼痛、腫脹癥狀，晚期則表現(xiàn)為關(guān)節(jié)畸形、關(guān)節(jié)僵硬及關(guān)節(jié)不同程度的畸形，嚴(yán)重者甚至?xí)霈F(xiàn)骨骼肌萎縮和骨頭損傷，且病程時(shí)間長(zhǎng)，若病情控制不佳則可能危及全身臟器系統(tǒng)［12］。現(xiàn)階段，臨床常采用血清學(xué)分子指標(biāo)、臨床癥狀、關(guān)節(jié)功能以及影像學(xué)資料等評(píng)估RA 病情活動(dòng)度，其中血清學(xué)指標(biāo)以簡(jiǎn)單快捷、準(zhǔn)確性高等優(yōu)勢(shì)成為指導(dǎo)臨床診治的重要手段。

PPARs 是一類配體依賴的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，具有N 端區(qū)、居中高度保守的DNA 結(jié)合區(qū)和C 端的激素結(jié)合區(qū)［13］。PPARs 配體通常為脂溶性分子，當(dāng)其與各自的配體結(jié)合后可引起機(jī)體的變化，促進(jìn)或抑制靶基因的表達(dá)［14］。PPAR-γ 作為PPARs主要的亞型之一，與多種炎性細(xì)胞的活性和表達(dá)關(guān)系密切。PPAR-γ 在原位支氣管氣道上皮細(xì)胞中有表達(dá)，可抑制此類細(xì)胞的活性，并激活內(nèi)源性PPAR-γ，拮抗炎性反應(yīng)。Zhu 等［15］認(rèn)為PPAR-γ 具有改變巨噬細(xì)胞的轉(zhuǎn)運(yùn)、增加巨噬細(xì)胞吞噬功能等作用，可促進(jìn)實(shí)用性免疫反應(yīng)的發(fā)生。Ahn 等［16］研究顯示，MMP-3 是一種鋅離子依賴酶，負(fù)責(zé)細(xì)胞外基質(zhì)成分降解為其主要功能，作用于多種基質(zhì)蛋白底物，MMP-3 過高的表達(dá)會(huì)導(dǎo)致軟骨框架結(jié)構(gòu)崩解，從而破壞患者關(guān)節(jié)功能。Lei 等［17］研究表明，RA 患者關(guān)節(jié)液中MMP-3 含量顯著升高，檢測(cè)MMP-3 可為評(píng)估RA 病情嚴(yán)重程度提供參考。Yang 等［18］研究發(fā)現(xiàn)，BCl6基因位于3q27 染色體，是一種具有鋅指結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)錄抑制因子，是B 細(xì)胞生發(fā)中心的起源。本研究結(jié)果與相關(guān)研究結(jié)果相符［19］。提示RA患者存在PPAR-γ、MMP-3 過表達(dá)及Bcl6 陽(yáng)性表達(dá)的情況。BCl6 是生發(fā)中心的抗原和調(diào)控因子，參與細(xì)胞增殖、分化、凋亡、DNA 損傷修復(fù)以及炎癥過程等。PPAR-γ、MMP-3 表達(dá)異常會(huì)促進(jìn)新生血管的生成、免疫逃逸等一些列病理過程，發(fā)揮促炎作用。本研究顯示，PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 的變化與患者病情活動(dòng)程度及滑膜炎病理評(píng)分呈正相關(guān)關(guān)系，PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 表達(dá)水平的上升提示患者病情處于活動(dòng)、滑膜炎癥加重狀態(tài)，表明PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6三者在評(píng)估RA 發(fā)生、發(fā)展中具有良好的輔助作用。

綜上所述，RA 患者PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 水平較健康者顯著升高，且與患者病情活動(dòng)性及滑膜炎病理評(píng)分具有一定的相關(guān)性，可作為臨床診斷RA 和評(píng)估病情的輔助檢查。