XO/XOR、GSH-Px、miR-133b在急性腎小球腎炎腎功能損害中診斷價值及意義

李莎 胡明亮 王麗

急性腎小球腎炎（Acute glomerulonephritis，AGN）是以毛細血管內增生性腎小球腎炎為主要病理表現的腎內科疾病，多見于細菌、A 組β 溶血性鏈球菌感染后等，大多具有自限性，但部分患者可出現急性腎衰竭，威脅患者生命健康，因此對AGN腎功能損害進行明確診斷意義重大［1］。黃嘌呤氧化還原酶（Xanthine oxidoreductase，XOR）主要催化嘌呤降解的末端反應，以黃嘌呤氧化酶（Xanthine oxidase，XO）、黃嘌呤氧化脫氫酶（Xanthine dehydrogenase，XDH）兩種形式存在，其中XDH 可將電子轉移、轉變為還原態，XO 利用氧氣生成活性氧，因此XO/XOR 可反映活性氧的生成情況［2］。研究發現，慢性腎臟病腎損害患者XO/XOR 水平升高，與腎損害有關［3］。谷胱甘肽過氧化物酶（Glutathione peroxidase，GSH-Px）是含硒清除自由基和抑制自由基生成的抗氧化酶之一，與原發性腎小球疾病患者腎間質纖維化有關［4］。微小RNA-133b（microRNA-133b，miR-133b）在糖尿病腎病患者表達高于健康人群，與腎小球濾過率有關［5］。目前關于XO/XOR、GSH-Px、miR-133b 在AGN 領域的研究較少，本研究對此進行探討，旨在為臨床診治AGN 腎功能損害，最大程度改善患者預后提供參考，報告如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取2018年12月至2020年12月本院收治的120 例AGN 患者（AGN 組）及35 例健康人群（對照組）作為研究對象進行前瞻性研究，本研究經醫院倫理委員會審核通過，納入患者均充分知曉本研究，自愿簽署知情同意書。其中觀察組女49 例，男71 例，年齡平均（47.50±9.16）歲；對照組女10 例，男25 例，年齡平均（45.96±7.89）歲。兩組基線資料比較差異無統計學意義（P＞0.05）。

納入標準：①觀察組符合AGN 診斷標準［6］；②發病前無慢性腎臟病史；③入組者均自愿簽署知情同意書。排除標準：①急性心腦血管疾病者；②遺傳性腎病者；③凝血功能異常者；④有藥物濫用史者；⑤自身免疫疾病者；⑥入組前接受過相關治療者；⑦合并惡性腫瘤患者。

1.2 方法

1.2.1 腎功能損害的診斷［6］

伴有不同程度的血尿、患側腰痛、腹部疼痛、少尿等臨床癥狀體征，腎小球濾過率降低，血肌酐、血尿素氮、尿蛋白升高。

1.2.2 資料收集

收集兩組人員的年齡、性別、體質量指數、病程、飲酒史、吸煙史、高脂血癥、糖尿病、冠心病、高血壓分布情況。

1.2.3 各指標檢測及實驗方法

觀察組于確診時，對照組于入院清晨，采集空腹靜脈血5 mL，采用高靈敏度熒光法檢驗XO 活性，采用黃嘌呤氧化還原酶法檢測XOR 活性，試劑盒購于上海仁捷生物科技有限公司，計算XO/XOR；采用比色法檢測GSH-Px，試劑盒購于上海信帆生物科技有限公司；采用實時熒光定量聚合酶鏈反應法及TaqMan 探針法檢測miR-133b，試劑盒購于杭州博日科技有限公司，miR-133b 上游引物為5′-TTTGGTCCCCTTCAACCAGCTA-3′，下游引物為5′-GTGCAGGTCCGAGGT-3′，內參U6 上游引物為5′-CGCAAGGATGACACGCAAATTC-3′，下游引物為5′-GTGCAGGGTCCGA-3′，檢測基因相對表達量=2-△△Ct；采用酶法檢測血肌酐水平，試劑盒購于浙江伊利康生物技術有限公司，計算公式：男性腎小球濾過率（eGFR）=186×血肌酐-1.154×年齡-0.203，女性腎小球濾過率（eGFR）=186×血肌酐-1.154×年齡-0.203×0.742。

1.3 統計學方法

數據處理采用統計軟件SPSS 22.0，計量資料以（）表示，兩組間比較行獨立樣本t檢驗；計數資料用n（%）表示、χ2檢驗，采用Pearson 分析各指標與腎功能指標相關性，采用Logistic 回歸方程分析腎功能損害的相關影響因素，采用受試者工作特征曲線（ROC）及ROC 下面積（AUC）分析各指標的診斷價值。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組各指標比較

AGN 組XO/XOR、miR-133b 高于對照組，GSHPx低于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組各指標比較（±s）Table 1 Comparison of indicators between 2 groups（±s）

表1 兩組各指標比較（±s）Table 1 Comparison of indicators between 2 groups（±s）

組別AGN 組對照組t 值P 值n 120 35 XO/XOR 0.85±0.30 0.57±0.18 5.246＜0.001 GSH-Px（U/L）89.65±25.80 125.66±20.64 7.575＜0.001 miR-133b 5.35±1.65 1.24±0.39 14.567＜0.001

2.2 有無腎功能損害患者基線資料、各指標比較

有損害組與無損害組患者年齡、性別、體質量指數、病程、飲酒史、吸煙史、高脂血癥、糖尿病、冠心病、高血壓分布比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；有損害組血肌酐、eGFR、XO/XOR、miR-133b 高于無損害組，GSH-Px 低于無損害組（P＜0.05）。見表2。

表2 有無腎功能損害患者基線資料、各指標比較［（±s），n（%）］Table 2 Comparison of baseline data and indicators of patients with or without renal impairment［（±s），n（%）］

表2 有無腎功能損害患者基線資料、各指標比較［（±s），n（%）］Table 2 Comparison of baseline data and indicators of patients with or without renal impairment［（±s），n（%）］

資料年齡(歲)性別（男/女）體質量指數（kg/m2）偏瘦正常超重肥胖病程（d）飲酒史吸煙史合并疾病高脂血癥糖尿病冠心病高血壓血肌酐（μmol/L）eGFR（mL/min）XO/XOR GSH-Px（U/L）miR-133b有損害組（n=72）48.52±12.54 41/31 6（8.33）49（68.06）10（13.89）7（9.72）8.52±2.63 68（94.44）35（48.61）6（8.33）11（15.28）3（4.17）7（9.72）286.88±92.57 64.88±12.05 0.96±0.29 71.14±21.95 6.39±2.11無損害組（n=48）45.97±10.65 30/18 4（8.33）30（62.50）9（18.75）5（10.42）9.21±2.84 42（87.50）22（45.83）7（14.58）4（8.33）1（2.08）2（4.17）102.26±20.26 92.25±18.97 0.69±0.22 117.42±32.26 3.79±1.05 t/χ2值1.157 0.368 0.579 1.364 1.023 0.089 0.608 1.270 0.011 0.606 13.584 9.670 5.481 9.358 7.902 P 值0.249 0.544 0.901 0.175 0.312 0.765 0.436 0.260 0.917 0.436＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001

2.3 各指標與腎功能指標相關性

采用Pearson 進行相關性分析結果顯示，XO/XOR、miR-133b 與血肌酐呈正相關，與eGFR 呈負相關（P＜0.05）；GSH-Px 與血肌酐呈負相關，與eGFR 呈正相關（P＜0.05）。見表3。

表3 各指標與腎功能指標相關性Table 3 Correlation between each index and renal function index

2.4 腎功能損害影響因素的Logistic 回歸方程分析

以AGN 腎功能損害情況為因變量（0=無，1=有），納入XO/XOR、GSH-Px、miR-133b 作為自變量（低于均值賦值為1，高于均值賦值為2），結果顯示，XO/XOR、GSH-Px、miR-133b 均與腎功能損害相關（P＜0.05）。見表4。

表4 腎功能損害影響因素的Logistic 回歸方程分析Table 4 Logistic regression equation analysis of factors affecting renal function damage

2.5 各指標的診斷價值

ROC 分析結果顯示，XO/XOR+GSH-Px+miR-133b 診斷AGN 腎功能損害 的AUC 為0.972（P＜0.05）。見表5、圖1。

表5 ROC 分析結果Table 5 ROC analysis results

圖1 ROC 曲線Figure 1 ROC curve

3 討論

XOR 是一種含鉬蛋白質聚合物，參與機體的嘌呤代謝，終產物包括氧自由基、羥基自由基等［7］。XO 形式是XOR 產生活性氧的主要來源，可增加活性氧的生成速率，故XO/XOR 越高，表明機體活性氧產生越多［8］。以往關于XO/XOR 在AGN領域的報道鮮見，本研究結果提示XO/XOR 與AGN 及其腎功能損害有關。本研究進行了相關性分析，結果顯示，XO/XOR 與血肌酐呈正相關，與eGFR 呈負相關，對腎功能損害起到促進作用。

GSH-Px 是機體抗氧化應激系統的重要成員之一，其水平增高可清除氧自由基、羥基自由基等過氧化反應產物，抑制氧化應激反應，保護腎臟［9-10］。腎損傷時，GSH-Px顯著降低，采用相關措施增加GSH-Px，則可通過抑制氧化應激，減輕腎損傷程度［11］。與正常人群比較，AGN 患者GSH-Px 較低，且有腎功能損害患者GSH-Px 進一步降低，佐證了GSH-Px 對腎功能具有保護作用。AGN 腎功能損害時，介導了機體氧化應激反應，氧自由基、羥基自由基大量產生，GSH-Px 被大量消耗而表現出較低水平，且GSH-Px與血肌酐呈負相關，與eGFR 呈正相關，故檢測AGN患者GSH-Px，不僅能直接反映患者腎功能狀況，并能為AGN 腎功能損害的診斷提供依據。同時從本研究結果推測，GSH-Px 降低與AGN 及腎功能損害密切相關，給予抗氧化應激藥物，提高GSH-Px，可能為AGN 及腎功能損害的防治提供了一個新的靶點。

miR-133b 系非編碼RNA 分子，能通過轉錄活動調控靶基因表達，參與感染、免疫、細胞凋亡等重要的生物學過程［12-13］。Zhang XL 等［14］報道，應用LncRNA 癌易感性候選基因2 靶向miR-133b，能抑制腎小球系膜細胞氧化應激損傷，保護腎小球系膜，提示miR-133b 與腎小球損傷有關。本研究結果提示miR-133b 是AGN 及腎功能損害的一個分子標志物。關于miR-133b 在AGN 中機制尚不明確，結合文獻推測，miR-133b 通過轉錄，參與系膜細胞肥大、腎小管間質的纖維化、細胞外基質沉積等，介導腎小球硬化，從而影響腎功能［15-16］。miR-133b與血肌酐呈正相關，與eGFR 呈負相關，檢測miR-133b 水平，可為AGN 腎功能損害的診斷提供參考。

綜上所述，AGN 及腎功能損害患者XO/XOR、miR-133b 升高，GSH-Px 降低，不僅可作為診斷AGN 腎功能損害的生物標志物，還為AGN 及腎功能損害的機制和防治提供了新的思路。但受研究經費、研究時間等限制，本研究對照組人群較小，可能造成數據的偏倚，后續仍需增加樣本量，進一步進行深入的觀察分析。