ERCC1、PAK、HDAC1蛋白在NSCLC的表達及臨床意義

孔佑虔 宋愛英 王小玉 唐寅★

非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）為我國發病率和死亡率最高的惡性腫瘤，盡管近年來影像技術、外科手術、放療、化療等醫學手段快速發展，但大部分患者就診時仍處于肺癌晚期，故早期診斷NSCLC 病情進展、及時采取治療措施是提高該病診療率的關鍵［1］。核苷酸切除修復交叉互補組1（excision repair cross -complementation group l，ERCC I）基因在多種腫瘤細胞均呈高表達狀態，對腫瘤DNA 的合成、再生起到重要作用［2］。報道發現P21 活化激酶（p21-activated kinase，PAK）與腫瘤的發生、發展、轉移等有關［3］。組蛋白去乙酰化酶1（histone deacetylase1，HDAC1）可抑制腫瘤細胞的增殖，誘導腫瘤細胞凋亡、產生細胞毒性［4］。本研究將分析免疫組化檢測ERCC1、PAK 及HDAC1 蛋白的表達及臨床意義。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院2015年1月至2017年6月收治的62例NSCLC 患者。分型：鱗癌27 例，腺癌21 例，腺鱗癌14 例。男36 例，女26 例，平均年齡（51.31±6.65）歲。納入標準：①所有患者符合NSCLC 規范化的診斷［5］；②術前未接受輔助治療；③無其它惡性疾病；排除標準：①合并肝、腎、心臟臟器嚴重疾病者；②合并嚴重神經功能、認知功能障礙者；③依從性差者。本研究經醫院醫學倫理委員會批準通過，受試者均簽署知情同意書。

1.2 樣本采集及ERCC1、PAK 及HDAC1 蛋白表達水平檢測

將術中切取的癌組織作為癌組織組，將癌旁正常組織（距離腫瘤5 cm）作為癌旁正常組織組。檢測ERCC1、PAK 及HDAC1 蛋白［6］：SP 法，石蠟切片標本厚2 μm，烘烤60℃，二甲苯脫蠟，浸泡3次。3 次離子水中浸泡抗原修復切片，磷酸鹽緩沖液（PBST）洗3 次。內源性過氧化物酶阻斷劑滴加，室溫孵育15 min，沖洗。一抗（GPCR124 多克隆抗體濃度1∶100）滴加，室溫孵育1 h，沖洗。辣根酶標羊抗小鼠/兔IgG 聚合物滴加，室溫孵育30 min。 對照組采用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）代替一抗；滴加山羊抗兔二抗（eBioscience）室溫孵育30 min。二氨基聯苯胺顯色，蘇木精復染，梯度酒精脫水，樹膠封片。

1.3 臨床病理特征及隨訪

對所有患者性別、年齡、臨床分期、組織分化程度、ERCC1、PAK 及HDAC1 蛋白表達情況及其預后情況進行記錄。采用雙盲法［7］評定ERCC1、PAK 及HDAC1 蛋白：隨機選擇每張切片5 個視野，根據染色深淺和視野中陽性細胞比例評分：0分為無著色；1 分為淺黃色，＜25%；2 分為棕黃色，25%～50%；3 分為棕褐色，＞50%。免疫反應評分：陰性（-），弱陽性（+），中等陽性（++），強陽性（+++）。低表達狀態為陰性和弱陽性（-，+），高表達狀態為中等陽性和強陽性（++，+++）。所有患者均隨訪3年，隨訪截止日期為2020年6月30日。

1.4 統計學方法

以統計軟件SPSS 22.0 分析，計數資料以n（%）表示，采用χ2檢驗，采用ROC 曲線研究ERCC1、PAK 及HDAC1 蛋白對患者預后生存的影響，以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組ERCC1、PAK及HDAC1蛋白表達情況比較

癌組織組ERCC1、PAK 及HDAC1 蛋白陽性率表達顯著高于癌旁正常組織組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1、圖1。

表1 兩組ERCC1、PAK 及HDAC1 蛋白表達情況比較［n（%）］Table 1 Comparison of ERCC1，Pak and HDAC1 protein expression between 2 groups［n（%）］

圖1 NSCLC 癌組織免疫組化染色圖（SP，×500）Figure 1 immunohistochemical staining of cancer tissue of NSCLC（SP，×500）

2.2 不同臨床病理特征NSCLC 患者其ERCC1、PAK 及HDAC1 蛋白表達情況比較

ERCC1、PAK 及HDAC1 蛋白高表達者臨床分期、組織分化程度及淋巴結轉移明顯高于低表達者，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 不同臨床病理特征NSCLC 患者其ERCC1、PAK 及HDAC1 蛋白表達情況比較［n（%）Table 2 Comparison of ERCC1，Pak and HDAC1 protein expression in NSCLC patients with different clinicopathological characteristics［n（%）］

2.3 NSCLC 患者ERCC1、PAK 及HDAC1 蛋白表達的預后情況

62 例NSCLC 患者3年生存率為19.35%（12/62），ERCC1、PAK 及HDAC1 高表達者死亡率高于低表達者，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

表3 NSCLC 患者ERCC1、PAK 及HDAC1 蛋白表達的預后情況［n（%）］Table 3 prognosis of ERCC1，Pak and HDAC1 protein expression in NSCLC patients［n（%）］

2.4 ERCC1、PAK 及HDAC1 蛋白對NSCLC 患者預后死亡的預測價值

ERCC1、PAK 及HDAC1 蛋白及三者聯合曲線下面積分別為0.786、0.770、0.748、0.973，各指標曲線下面積以聯合檢測最大（P＜0.05）。見表4、圖1。

表4 ERCC1、PAK 及HDAC1 蛋白對NSCLC 患者預后死亡的預測價值Table 4 the predictive value of ERCC1，Pak and HDAC1 protein in the prognosis of NSCLC patients

圖1 ROC 曲線Figure 1 ROC curve

3 討論

NSCLC 具有極高的惡性程度，早期即可發生淋巴結轉移，雖手術治療療效顯著，但預后較差，腫瘤復發和轉移使患者的5年生存率僅為30%左右［8］。

ERCC1 是核苷酸切除修復中最為關鍵的酶，通過對染色體19q13.2 - 13.3 定位，使基因突變引起單核苷酸多態性遺傳物質DNA 突變，而單核苷酸多態性通過轉錄mRNA 及由其翻譯成的蛋白或酶發揮功能作用［9］。研究發現，ERCC1 參與多種腫瘤的進展［9］。Lu 等［10］研究發現ERCC1 蛋白陽性對肺癌患者的用藥選擇具有指導意義。HDAC1蛋白是臨床新發現的生物學蛋白，相關學者研究發現，HDAC1 蛋白在惡性腫瘤中呈過度表達狀態［11］。相關國外研究發現，HDAC1 抑制劑可抑制肺腺癌細胞株A549 的增殖并促進其凋亡，預示HDAC1 抑制劑在肺癌治療中具有重要作用［12］。PAK 作為小G 蛋白Rho 家族的下游靶蛋白，被生長因子及其他胞外信號活化，參與調節細胞骨架、細胞生存、有絲分裂和血管生成等生物學功能，在腫瘤的發生、侵襲和轉移過程中起著重要作用［13］。既往文獻發現PAK 在不同腫瘤中可通過不同的信號通路影響腫瘤增殖及轉移，促進癌細胞生長，從而導致癌細胞轉移，促進癌癥進展［14］。目前，有關PAK 在腫瘤方面的報道主要集中在乳腺癌、肝癌、胃癌等惡性腫瘤疾病中，而在NSCLC 方面的研究報道甚少［15］。由此可知NSCLC 患者疾病的發生和進展與ERCC1、PAK、HDAC1 蛋白有著密切聯系，三者可作為評估其預后的有效指標。

此外，為深入了解ERCC1、PAK、HDAC1 蛋白對NSCLC 患者預后死亡的預測價值，本研究采用ROC 曲線分析，發現聯合檢測三指標可作為預測患者預后死亡的有效手段。

綜上所述，ERCC1、PAK 及HDAC1 蛋白在NSCLC 癌組織中呈異常表達狀態，臨床工作者可通過監測上述指標判斷NSCLC 患者疾病進展情況，為評估患者預后發展提供參考。