LAPTM4B在胰腺癌中的表達與其侵襲、轉移及預后的關系

張春鳳 烏云高娃 趙麗娟 張慧★

胰腺癌是一種惡性程度很高的腫瘤，居我國腫瘤死亡率前10 位［1］。盡管手術、放射、化學等治療方法可在一定程度上延長胰腺癌患者生存期，但患者預后仍不樂觀［2］。既往學者研究報道，胰腺癌患者5年生存率僅在5%左右［3］。目前臨床尚無敏感性高的檢查指標，因此積極尋找胰腺癌新的標志物對其早期診斷及治療具有重要的臨床價值。溶酶體相關4 次跨膜蛋白B（lysosome-associated transmembrane protein 4B，LAPTM4B）于2000年首次由熒光差異顯示技術篩選出［4］。近年來有較多學者發現，LAPTM4B在肝癌、乳腺癌、子宮內膜癌等惡性腫瘤中表達率較高，證實其為一個與癌癥患者預后相關的危險指標，可作為評估患者預后的重要指標［5］。但LAPTM4B在胰腺癌的表達及與胰腺癌細胞侵襲、轉移的機制研究較少。本研究旨在探討LAPTM4B 在胰腺癌組織中的表達水平，并分析LAPTM4B 表達水平對癌細胞侵襲及轉移的影響?，F研究報告如下。

面對當今軍民融合程度深化、科研院所改制勢在必行的社會變化，為適應市場化的要求，科院院所需轉變管理體制和運行機制，實現從 “行政化”管理向“市場化”管理的轉變，提高科研院所整體的創新能力和效率，增強其參與市場競爭的活力和能力?？蒲性核鶛n案管理作為其重要組成部分，也需順應時代發展潮流，改變傳統的工作模式和管理理念，樹立創新意識，更好地為企業發展提供檔案服務。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月至2019年1月本院收治的96例胰腺癌患者，其中男58 例，女38 例；平均年齡（54.23±4.52）歲；腫瘤直徑最大為8.3 cm，最小1.7 cm；腫瘤位于胰腺頭頸部58 例，位于體尾部38例。共取得96 份胰腺癌組織標本，設為觀察組。并選取上述患者遠離胰腺腫瘤3 cm 的癌旁正常組織設為對照組。

納入標準：①均經影像學（MRI 或CT）檢查、術后病理檢查確診為胰腺癌［6］；②均在入院后2 周內完成根治性手術治療；③納入研究前未接受過放、化療等輔助治療；④獲得本院倫理委員會批準，且受試者均簽署知情同意書。排除標準：①臨床資料、影像資料、病理資料有缺失者，隨訪過程中失訪者；②合并惡性腫瘤、阿爾茲海默癥者、因精神障礙無法配合治療者；③病理檢查結果為胰腺囊性腫瘤者；④因非胰腺癌死亡者及隨訪期間失訪者；⑤納入研究前2 個月內服用過影響LAPTM4B 水平的藥物者。

1.2 方法

1.2.1 試劑及儀器

純化兔抗人LAPTM4B-N1-99 多克隆抗體由北京大學醫學部基礎醫學院細胞生物學系周柔麗教授實驗室制備、純化并提供。DAB 顯色劑及PV-9000 二步法免疫組化試劑盒采購自北京中杉金橋生物技術有限公司。光學顯微鏡、顯微攝影顯微鏡均為日本olympus 公司生產。L.3 回旋式切片機由北京手術器械廠提供。

1.2.3 判定標準

1.2.2 LAPTM4B 檢測方法

蠟塊通過切片機連續切片，組織厚度4 μm，通過免疫組化染色檢測LAPTM4B 表達情況。均經甲醛溶液固定，石蠟包埋、載玻片泡酸、高溫滅菌PBS 緩沖液洗滌、及多聚賴氨酸涂片等處理，DAB顯色。室溫下染色時間為3～5 min，自來水沖洗，終止顯色。后將經DAB 顯色劑顯色的LAPTM4B 組織標本使用蘇木精復染10 s，乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。最后在顯微鏡下觀察LAPTM4B 表達情況，并拍片。實驗步驟按照試劑盒說明書進行。

二是《條例》在防汛抗旱、飲用水安全保障、水資源調度、取水總量控制、水功能區監督管理、水污染防治、水域岸線管理等方面進一步強化了水利、環保等相關部門以及太湖局的職責，并在優化產業布局、保障飲用水供水安全及應急事故預防處置、綜合治理政策制定及資金保障、執行防洪和水資源調度指令、開展水污染物總量控制和削減、逐級開展水資源保護和水污染防治目標考核等方面，強化了地方人民政府的綜合管理職責。通過制度促進多地區、多部門的合作、協調，實現跨部門跨地區的綜合管理，并對水資源保護和水污染防治工作實施綜合考核。

以電話隨訪或門診復查的隨訪方式對本研究納入的96 例胰腺癌患者進行為期1年的隨訪，隨訪截止時間2020年1月。將患者治療后無進展生存期（Progression-Free-Survival，PFS）即患者開始接受治療，到觀察疾病發展或因腫瘤增大、轉移死亡時間，總生存時間（Overall Survival，OS）即患者開始治療到最后一次隨訪或患者死亡的時間詳細記錄在病歷報告本中，分析不同LAPTM4B 表達的患者生存情況。

觀察組 LAPTM4B 陽性表達率為 73（76.04%），顯著高于對照組的52（54.17%），差異具有統計學意義（χ2=9.803，P＜0.05）。見圖1。

1.3 隨訪

LAPTM4B 陽性表達的細胞為細胞漿和細胞膜著色，評分由兩位病理醫師獨立打分，評分標準由染色強度和染色細胞百分比綜合評定。陽性細胞比例評分［7］：0、1、2、3、4 分；染色強度評分：未染色為0分，淡黃色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3 分。染色指數=陽性細胞比例評分+染色強度評分。染色指數＞3 分為陽性表達；染色指數≤3 分為陰性表達。

1.4 統計學方法

NM 分期為Ⅲ～Ⅵ期、有淋巴結轉移、分化程度為中-低分化的胰腺癌患者LAPTM4B 陽性表達率更高（P＜0.05）。見表1。

體育課程是學校體育的中心環節。通過體育課程的教學，筆者希望達到增強學生體質、增進健康和提高他們體育素養的目的，設計能激發學生興趣、符合學生身心發展特點和技術技能學習規律的課程，使學生喜歡上體育課，并通過體育課達到體育課程學習目標，對于實現學校體育教育教學目標具有重要意義。

2 結果

2.1 LAPTM4B 在不同組織中的表達情況

目前，我國還沒有標準公共危機教育的專用教材，公共危機教育大多流于形式，主要針對在校大中小學生，忽視全民的公共危機的教育引導。危機管理知識在西方發達國家是公務員培訓的必修課程，國外一些國家十分注重系統、全面的學校公共危機教育。日本的幼兒園會教孩子地震、火災發生時該怎么辦，進入小學，學生就開始接受正規的急救訓練。每個學校設有急救的課程，如果考試不達標，就拿不到畢業文憑。美國的許多學校也常置設一些應急教育課程，教給學生地震、洪水發生等的應急措施。在我國，無論是學校還是各種培訓機構，都缺少公共危機事件應對和管理的教育內容。公共危機教育要面向公眾，要使全社會都認識到公共危機管理和緊急應對的重要性。

圖1 LAPTM4B 在胰腺癌組織中表達（SP，×500）Figure 1 LAPTM4B in pancreatic cancer（SP，×500）

2.2 LAPTM4B 與胰腺癌病理特征的關系

采用SPSS 22.0 軟件進行統計分析，計數資料以n（%）表示，采用χ2檢驗；Kaplan-Meier 生存分析LAPTM4B 表達對胰腺癌患者預后生存的影響，使用tarone 法進行檢驗；影響患者預后的相關因素采用非條件單因素和多因素Logistic回歸分析；以P＜0.05 為差異具有統計學意義。

表1 LAPTM4B 與胰腺癌病理特征的關系［n（%）］Table 1 Relationship between LAPTM4B and pathological features of pancreatic cancer［n（%）］

2.3 隨訪結果

96 例胰腺癌患者1年生存率為20.83%（20/96），LAPTM4B 陽性表達的胰腺癌患者死亡率更高（P＜0.05）。見表2。

TNM 分期為Ⅲ～Ⅵ期、有淋巴結轉移、分化程度為中-低分化、LAPTM4B 表達陽性為影響胰腺癌患者預后生存的獨立危險因素（P＜0.05）。見表4。

表2 LAPTM4B 不同表達的胰腺癌患者1年預后情況［n（%）］Table 2 1-year prognosis of pancreatic cancer patients with different LAPTM4B expression［n（%）］

2.4 LAPTM4B 表達與胰腺癌患者預后的關系

LAPTM4B 表達陰性及表達陽性半數生存時間分別為（8.30±0.73）個月、（6.82±0.51）個月。生存分析顯示LAPTM4B 表達陽性的患者生存期明顯短于LAPTM4B 表達陰性的患者，Keplanmeier 生存曲線比較差異有統計學意義（P＜0.05），見圖2。

圖2 ROC 曲線Figure 2 ROC curve

2.5 影響胰腺癌患者預后生存的單因素和多因素分析

脫鈣抽搐：長期應用醋酸可的松等，可發生鈣、鐵缺乏，發生抽搐。若與維生素D和鈣劑合用，則可預防脫鈣和抽搐。

表4 影響胰腺癌患者預后生存的單因素和多因素分析Table 4 univariate and multivariate analysis of prognostic factors in patients with pancreatic cancer

3 討論

由于胰腺位置隱蔽，在患者表現出臨床癥狀時，腫瘤多已發展至中晚期，手術根治難度大，患者仍面臨術后腫瘤復發、轉移的風險，且預后情況不理想。癌細胞浸潤、侵襲及轉移是胰腺癌患者死亡的主要原因［8］。

LAPTM4B是一種新型癌基因，廣泛表達于心臟、骨骼肌等組織中［9］。該基因定位于8q22.1 染色體上，有典型的溶酶體定位信號集，因此被命名為溶酶體相關4 次跨膜蛋白B［10］。研究發現，LAPTM4B 過表達后，會抑制細胞凋亡，促進細胞增殖、遷移、侵襲，其與肝癌、肺癌、乳腺癌等疾病發病風險具有顯著相關性［11-12］。本研究采用免疫組化染色法，比較胰腺癌組織及癌旁正常組織中的LAPTM4B 水平，發現胰腺癌組織中的LAPTM4B陽性表達率明顯高于癌旁組織，這與既往學者報道結果一致［13］。

Roth 等學者［14］通過蛋白印跡實驗發現，LAPTM4B 的表達強度與肝癌細胞的病理學分級有關，高分化肝癌組織中LAPTM4B 表達較低，中-低分化肝癌組織中LAPTM4B 表達量較高。Sun Y 等學者［15］報道，乳腺癌細胞的細胞漿及細胞膜上存在LAPTM4B 過表達，且LAPTM4B 表達與乳腺癌患者淋巴結轉移、TNM 分期密切相關，因此認為LAPTM4B 參與乳腺癌細胞體外增殖、遷移及侵襲的生物學行為，并具有抗凋亡作用。國外學者經細胞周期分析、細胞增殖相關蛋白表達的檢測，發現LAPTM4B 的過表達明顯促進了人膽囊癌細胞的體外增殖能力［16］。本研究納入的96 例胰腺癌患者1年生存率為20.83%（20/96），LAPTM4B 陽性表達的胰腺癌患者死亡率更高，提示LAPTM4B 陽性表達的患者預后更差。在腫瘤侵襲及轉移的過程中，LAPTM4B 過表達會刺激腫瘤細胞分泌蛋白酶降解基底膜和基質，部分腫瘤細胞穿越受損的基底膜后侵入淋巴或血液，繼而隨著淋巴或血液循環，以同樣的方式侵出淋巴管或血血管，加速病灶轉移［17］。

在尋常百姓的理解中，刑事案件通常是與“人命”掛鉤的，也就是我們常說的“命案”。所以法院的法官在面對“命案”時，往往都是慎之又慎，而且對當事雙方的調解工作也十分重視。但是俗話說得好：“人命大于天。”“命案”的調解工作卻不是那么好做的。

本研究還發現，APTM4B 陽性表達患者生存期要顯著短于陰性表達的患者，這與Petti 等學者［18］研究結果相一致。本研究經非條件多因素Logistic 回歸模型進一步分析，得出：TNM 分期為Ⅲ～Ⅵ期、有淋巴結轉移、分化程度為中-低分化、LAPTM4B 表達陽性為影響胰腺癌患者預后生存的獨立危險因素，可見LAPTM4B 表達升高均與與腫瘤發生相關，可作為預測胰腺癌患者預后的指標。

綜上所述，胰腺癌組織中LAPTM4B 陽性表達率高，與TNM 分期、淋巴結轉移、分化程度密切相關。LAPTM4B 可能參與了胰腺癌細胞侵襲、轉移的過程，LAPTM4B 能否作為治療胰腺癌的新靶點，有待深入研究。