ERCC1、BRCA1及BAG-1在晚期NSCLC鉑類化療敏感性、預后評估中的應用

劉祺 周政濤 馮正富 聶琬吁

晚期非小細胞肺癌（Nonsmall-cell lung cancer，NSCLC）約占所有肺癌的80%，約75%的患者發現時已處于中晚期，5年生存率很低［1］。既往研究報道，以順鉑為基礎輔助化療的NSCLC 患者5年生存率僅為5.4%［2］。切除修復交叉互補基因-1（excision repair cross complementation group 1，ERCC1）參與鉑類藥物引起的DNA 損傷修復過程，對DNA堿基切除修復和單鏈斷裂修復發揮關鍵作用［3］。乳腺癌基因-1（Breast cancer susceptibility gene 1，BRCA1）為抑癌基因，相關研究發現BRCA1可參與基因轉錄活化及抑制等，具有多種生物功能［4］。Bcl-2 結合抗凋亡基因1（Bcl-2 associated athanogene 1，BAG-1）是近年來新發現的抗凋亡基因，可通過與多種靶蛋白作用，抑制細胞凋亡。國外研究認為，ERCC1、BRCA1及BAG-1表達可能對腫瘤細胞對鉑類藥物的耐藥性造成一定影響，造成個體腫瘤易感性和生物學行為［5］。本研究分析三者在晚期NSCLC 肺癌患者鉑類化療敏感性、預后評估中的預測價值。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年3月至2019年5月本院收治的80例晚期（Ⅲ期和Ⅳ期）NSCLC 患者作為觀察組。納入標準：①年齡＞18 歲，經纖維支氣管鏡或經皮肺穿刺組織活檢病理或細針穿刺或痰細胞學確診為NSCLC 患者［6］；②既往未接受過化療或其他抗腫瘤藥物治療；③主要血液學指標無化療禁忌證；④除腫瘤原發疾病外，無其他明顯威脅生存的并存疾病，如嚴重肺功能不全、心功能不全、肝功能或腎功能不全、嚴重貧血等。排除標準：①一線化療周期在4 周以下；②因嚴重不良反應未能完成化療；③無可測量病灶或病灶不能評估；④合并妊娠或哺乳期婦女，未能控制的大量惡性胸腔積液，合并第二原發惡性腫瘤患者，預期生存期較短的患者。其中男62 例，女18 例，平均年齡（64.77±5.54）歲。本研究經醫院醫學倫理委員會批準通過，受試者或其家屬已簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 化療方案

觀察組采用多西他賽+順鉑方案化療，其中多西他賽75 mg/m2、第1 天，順鉑75 mg/m2、第1 天，靜脈滴注，每21 d 重復。 除非出現疾病進展、不能耐受的不良反應及患者或研究者決定停止的情況外，化療需至少進行4 個周期。

1.2.2ERCC1、BRCA1 及BAG-1檢測方法

采用聚合酶鏈式反應-限制性片段長度多態性（Polymerase Chain reaction-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP）法檢測各基因位點的多態性。采用QIAGEN 試劑盒提取患者外周靜脈血中基因組DNA。根據ERCC1、BRCA1及BAG-1基因SNP 位點在NCBI查找引物序列。ERCC1：上游引物5′-GCAGAG-CTCACCTGAGGAAC-3′，下游引物5′-GAGG-TGCAAGAAGAGGTGGA - 3′ ，BRCA1：上游引物5′ - CCCATT TTCCTCCCGCA-3′，下游引物5′-GGACCTTGGTGGTTTCT TCCA-3′。BAG-1：上游引物5′-CAGGTAGTGTAGGA-GCGTGGTG-3′，下游引物5′-CACCCAGAGG-TCCAAACAGC-3′。PCR 反應條件：94℃2 min；92℃60 S，56℃30 S，72℃30 s，35個循環；最后72℃延伸10 min，退火溫度為55℃。分別對ERCC1、BRCA1及BAG-1進行CC型、CT 型、TT 型檢測。ERCC1表達量在28.6 以上，視為異常升高［3］；BRCA1表達量在80.6 以下，視為異常降低［4］；BAG-1表達量在22.3 以上，視為異常升高［5］。

1.3 隨訪

化療結束后，即對觀察組患者開始隨訪，隨訪時間為2年，隨訪截止時間2021年5月。第1年每2 個月隨訪1 次，第2年每4～6 個月隨訪1 次。隨訪方法為：門診隨訪、電話隨訪或登門隨訪。

1.4 觀察指標

1.4.1 毒性反應評價標準

按NCI-CTC3.0（National Cancer Institute-Common Toxicity Cri teria）標準評價毒副反應［7］。毒副反應包括白細胞、血小板、血紅蛋白、骨髓抑制。

1.4.2 近期療效

近期療效：根據實體腫瘤療效評價標準（response evaluation criteria in solid tumors，RECIST）［8］將近期療效分為完全緩解（complete response，CR）、部分緩解（partial response，PR）、穩定（stable di sease，SD）和進展（progressive disease，PD）。有效=（CR+PR）/總例數×100%。無效=（SD+PD）/總例數×100%。

1.5 統計學結果

采用SPSS 22.0 軟件進行統計分析。計數資料以n（%）表示，采用χ2檢驗；計量資料以（）表示，采用t檢驗；采用多元Logistic 回歸分析影響晚期NSCLC 患者SNP 位點多態性與鉑類藥物敏感性的關聯性；采用ROC 曲線分析聯合ERCC1、BRCA1及BAG-1檢測對晚期NSCLC 患者2年預后的預測價值；以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 化療結果

80 例NSCLC患者治療4周后，CR 1例（1.25%），PR 27 例（33.75%），SD 33 例（41.25%），PD 19 例（23.75%），總有效率為35.00%（28/80）。

2.2 ERCC1、BRCA1 及BAG-1 基因多態性與鉑類藥物過敏性的關聯性

ERCC1、BRCA1及BAG-1位點CC、CT、TT 基因型化療療效比較差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 ERCC1、BRCA1 及BAG-1 基因多態性與鉑類藥物過敏性的關聯性［n（%）］Table 1 Association of ERCC1，BRCA1 and BAG-1 gene polymorphisms with platinum allergy［n（%）］

2.3 預后

對80 例晚期NSCLC 患者隨訪2年，回訪率100%，平均隨訪時間（1.32±0.17）年。隨訪結果顯示：80 例晚期NSCLC 患者2年生存率為22.50%（18/80），ERCC1及BAG-1異常升高、BRCA1異常降低的晚期NSCLC 患者死亡率更高（P＜0.05）。見表2。

表2 晚期NSCLC 患者不同ERCC1、BRCA1 及BAG-1 表達的預后情況［n（%）］Table 2 prognosis of different ERCC1，BRCA1 and BAG-1 expression in NSCLC patients［n（%）］

2.4 聯合ERCC1、BRCA1 及BAG-1 檢測 對 晚期NSCLC 患者預后預測價值

聯合（ERCC1、BRCA1及BAG-1）檢測靈敏度、特異度、AUC 分別為90.70%、92.50%、0.994，顯著高于各指標單一檢測（P＜0.05）。見表3 及圖1。

表3 聯合ERCC1、BRCA1 及BAG-1 檢測對晚期NSCLC 患者預后預測價值Table 3 prognostic value of combined detection of ERCC1，BRCA1 and BAG-1 in patients with advanced NSCLC

圖1 ROC 曲線Figure 1 ROC curve

3 討論

NSCLC 的發生、轉移具有遺傳學基礎，是癌基因激活、抑癌基因失活及微衛星不穩定性等多因素、多步驟參與的過程［9］。分子靶向藥物在NSCLC 的治療中凸顯了極大的應用前景。NSCLC基礎及臨床轉化研究發現，ERCC1、BRCA1、BAG-1均與鉑類及紫杉類藥物敏感度相關［10］。基于以上研究結果，本文對ERCC1、BRCA1、BAG-1表達量進行研究，為指導NSCLC 患者個體化治療提供參考。

本研究中，80 例NSCLC 患者治療4 周后，總有效率為35.00%（28/80）。通過采用PCR-RFLP 檢測ERCC1、BRCA1及BAG-1檢測各基因位點的多態性，發現三者CC、CT、TT 基因型之間差異有統計學意義，攜帶CC 型基因治療療效最佳。可見ERCC1、BRCA1及BAG-1可能為影響鉑類藥物敏感性差異的原因，也可以推測ERCC1、BRCA1及BAG-1位點的多態性可作為預測晚期NSCLC 患者鉑類化療療效及生存期的一項重要指標，與Hurtado等學者［11］研究結果一致。

本研究發現，ERCC1及BAG-1異常升高、BRCA1異常降低的晚期NSCLC 患者死亡率更高，可見ERCC1、BRCA1及BAG-1表達量與晚期NSCLC 患者預后密切相關。ERCC1定位于1 號染色體，ERCC1編碼的蛋白質在DNA 堿基切除修復和單鏈斷裂修復過程中都發揮重要作用，有文獻指出ERCC1表達量升高會加劇鉑類劑耐性［12-13］。BRCA1是抑癌基因，在基因修復方面同樣演者重要角色，BRCA1參與了核苷酸剪切修復和同源重組的修復，研究發現BRCA1表達量上調會增高鉑類藥物、微管干擾劑的藥性［14-15］。BAG-1可與抗凋亡蛋白化糖皮質激素受體相互作用，于1995年被首次發現并命名［16］。Wiggins 等人［17］研究發現，BAG-1可與bcl-2形成復合物，并促進抗細胞凋亡的能力，在肺癌、乳腺癌、大腸癌等惡性腫瘤中均陽性表達率較高，且與患者預后相關。ERCC1、BRCA1及BAG-1表達異常，均會影響NSCLC 患者化療藥物耐藥，提高NSCLC 對鉑類藥物化療敏感性，導致化療失敗，影響預后。

繪制ROC 曲線進一步分析發現ERCC1+BRCA1+BAG-1檢測靈敏度、特異度均在90%以上，顯著高于各指標單一檢測。由此可見，三項指標聯合檢測能提高臨床對晚期NSCLC患者預后評估的效能。

綜 上 所 述，RCC1、BRCA1及BAG-1與 晚 期NSCLC 患者化療敏感性、預后具有相關性，聯合三者檢測，有助于臨床為患者制定個體化治療方案，改善患者預后。