電化學發光免疫分析與酶聯免疫吸附試驗檢測甲型肝炎病毒IgM抗體的對比評價

蔡賢惠

（廈門市仙岳醫院醫學檢驗科，福建 廈門 361012）

甲肝的全稱是甲型病毒性肝炎，屬于一類急性傳染疾病，由甲型肝炎病毒引發，傳播是通過糞-口道開展，甲肝IgM（HAV-IgM）抗體的測定可對甲肝進行診斷[1]。我院研究用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢驗HAV-IgM抗體，由具體需求和日常標本中迅速獲取科學的數據，目前我院已行電化學發光免疫分析法（ECLIA），用于對HAV-IgM抗體的測定。依據我院管理的標準化準則與實驗室質量標準，檢驗項目時，評估檢驗系統的基本性能，分析其是否與要求符合。所以，臨床應用此方式時，能夠用這兩類方式對HAV-IgM抗體檢測做好評估和對比。

1 資料與方法

1.1 一般資料 時間：2018年6月至2020年12月；參與患者：90例我院住院門診患者，其中，肝功能谷丙轉氨酶異常就診的普通內科門診患者34例，有消化道癥狀的患者39例，健康體檢者17名。90例患者中，男女均為45例，年齡6～85歲，平均（43.68±16.05）歲；兩組患者信息資料均衡（P＞0.05），可對比。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 ECLIA 全自動電化學發光免疫分析儀（Roche公司，E601），配套HAV-IgM抗體試劑，定標液、質控品。

1.2.2 ELISA HAV-IgM抗體酶免試劑（北京），檢驗儀器：全自動酶免分析儀（愛康）。

1.3 方法 取所有患者未進食時的靜脈血3 mL，分離血清，用ECLIA、ELISA對患者的血清標本HAV-IgM抗體進行測定。評估兩類方式HAV-IgM抗體檢測樣本一致。需仔細對患者完整的病歷進行查詢，依據疾病的流行特征與檢查數據，聯合患者的具體狀況對患者綜合干預，做好判斷，依據肝炎病毒學測定數據，診斷病原學，最終診斷患者是否是甲肝。

IgG膠乳顆粒實際吸附RF：取純化的IgG膠乳顆粒試劑吸附RF，將上述方式分別取血清和吸附與純化的人IgG膠乳顆粒試劑作為系列梯度混合，如血清和試劑混合比例1∶2、1∶3、1 ∶4，均于37 ℃水浴反應0.50 h，10 000 r/min，離心半徑 8 cm，離心后10 min取上清液。

1.3 觀察指標 ①觀察HAV-IgM抗體數據。②觀察不同方法對HAV-IgM抗體結果和臨床診斷。③觀察RF吸附前后ELISA測定的OD值。

2 結果

2.1 HAV-IgM抗體數據 用ECLIA、ELISA方法同時對血清標本HAV-IgM抗體進行檢驗，不同方法陽性符合率：（4/30）×100.00%=13.33%，陰性符合率：（60/60）×100.00%=100.00%，總符合率：[（4+60）/90]×100.00%=71.11%。見表1。

表1 HAV-IgM抗體數據（n）

2.2 不同方法對HAV-IgM抗體結果和臨床診斷 兩種方式檢測數據不符的標本有26例，26例患者最后診斷的HAV感染有 2例，除了HAV，其他病毒性肝炎（n=5）、無病毒性肝炎病史（n=19）。按照診斷劃分小組為甲肝、非甲肝組。按疾病診斷為依據，計算兩種方法測定HAV-IgM抗體對疾病診斷的敏感度、特異性、陽性檢出率，其中，ECLIA敏感度=66.67%，特異度=100.00%，陽性檢出率=4.43%。ELISA敏感度=100.00%，特異度=71.43%，陽性檢出率=33.33%。見表2。

表2 不同方法診斷HAV-IgM抗體結果（n）

2.3 RF吸附前后ELISA測定的OD值 OD為0.182的血清吸附RF前后ECLIA測定均為陰性，OD數值是0.255的血清吸附 RF前后ECLIA測定均呈陽性。所以，ELISA測定高RF水平血清，假陽性率要比ECLIA法高。對IgG膠乳顆粒實際吸附RF前后ELISA法測定OD值，吸附后OD數值明顯要比吸附前低（P＜0.05）。見表3。

表3 RF吸附前后ELISA測定的OD值

3 討論

甲型病毒肝炎是因HAV誘發的急性傳染疾病，世界范圍內均勻分布，人體在感染HAV后多呈亞臨床癥狀，需結合實驗室測定輔助診斷近期感染甲型肝炎病毒十分必要。實驗室經對HAV-IgM抗體的測定，患者一旦感染病毒，7 d內HAV-IgM抗體陽性占比較高，近1/3的患者在發病14 d內呈陽性，10%的患者在1個月內呈陽性，4周后幾乎全部病例均有陽性表現[2-4]。HAV-IgM抗體可在人體血液中維持半年，后期會消失，HAVIgM陽性則代表患者曾有感染HAV，可對抗體發揮保護作用。因此，HAV-IgM抗體是早期甲型肝炎診斷的特異性血清標志物，在對HAV-IgM抗體測定呈陽性時，表示患者有感染甲型肝炎病毒的可能。

現主要用ECLIA、ELISA兩類方法檢測HAV-IgM抗體展開比較，結果發現，兩種方法的總符合率為71.11%，一致性差異非常顯著，特別是陽性符合率過低。兩種方法對結果測定不符的患者進一步追蹤隨訪，發現最終診斷成HAV的患者僅有 2例，這表示ELISA對HAV-IgM抗體測定雖然較之電化學發光敏感度高，但容易引起假陽性，這主要是檢驗方式不同引起，可能和標本自身關聯較深，主要是測定ELISA時，測定血清標本含類風濕因子（RF），可充當橋聯物聯合不同的特異性抗體IgMFc段，容易引起假陽性問題[5-6]。所以，慢性乙型肝炎、自身免疫性肝病在測定HAV-IgM呈陽性時，經對HAV重疊感染的觀察，消除RF與另外因素造成的假陽性[7]。

Roche檢測法ECLIA對HAV-IgM的測定中所獲取的測定理念，以抗Fdλ試劑充當樣本加強干預，對復合物做好標記，在與疾病病原抗衡的作用下將異性IgG阻斷，添加生物素化特異性人IgM單克隆抗體等，最后經光電倍增管對HAV-IgM抗體進行檢驗[8]。ECLIA對HAV-IgM的測定中，類風濕因子不會造成感染，與ELISA相較，其臨床對疾病的診斷低下，接近于臨床流行病學，因為甲型肝炎是自限性疾病，長時間會以亞癥狀展現，尤其是兒童感染多以隱匿性呈現，臨床癥狀不明顯[9]。衛生部門于計劃免疫管理中就加入乙肝疫苗，可充分降低嬰幼兒乙肝病毒感染的發生。目前，在越來越多的人接種甲肝疫苗的局勢下，我國甲肝疾病發生率逐漸降低，發病率在逐漸下降。接種甲型肝炎疫苗3周后，20%的接種者能產生HAV-IgM抗體，應做好判斷[10]。

研究用兩類不同方法為全部患者隨訪、追蹤，發現ECLIA的HAV-IgM抗體數據臨床具有較高符合率，特異性高，假陽性較低，可避免患者因HAV-IgM抗體陽性影響檢驗結果，給患者造成較大的經濟損失，避免患者承受過大的心理負擔。ECLIA法檢驗時間較短，標本測定效率高，能夠加入到臨床中作為疾病的診斷參考。