鮮食玉米籽粒發育期間污染真菌分離鑒定及真菌毒素含量分析

張娜娜，陳利容，張守梅，郭玉秋，劉開昌，龔魁杰

（山東省農業科學院作物研究所，山東 濟南 250100）

鮮食玉米是指在乳熟期即玉米授粉后22～26 d采摘的玉米。相比于普通玉米，鮮食玉米淀粉含量低，蛋白質、膳食纖維、維生素以及磷、鐵、鈣等微量元素含量更為豐富，深受消費者喜愛[1-2]。鮮食玉米是一種優秀的全谷物食品，其營養健康價值和公眾可接受性都遠高于傳統粒用玉米[3]。我國鮮食玉米2018年種植面積已達1 700萬 畝，市場規模達到500億 元以上，已經發展成為獨具中國特色的優勢產業。與蓬勃發展的產業相比，隱藏在鮮食玉米背后的質量安全問題，卻還沒有引起廣泛關注，成為產業發展的一個隱患。

由于胚部較大、營養豐富，多數玉米在收獲前就已被霉菌侵染[4-5]。而在玉米生長期間，除了種子攜帶的病原菌，空氣、土壤、昆蟲等傳播途徑，都會使玉米籽粒發育期間極易受到致病真菌侵染，導致穗腐病、絲黑穗病、瘤黑粉病等果實病變[6]。有些產毒真菌如曲霉屬、鐮孢屬、青霉屬等附著在玉米籽粒表面進而入侵籽粒內部，在適宜的條件下就會產生如黃曲霉毒素、嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮等真菌毒素，積累到一定量即可危及人和牲畜的生命安全，因此，玉米的質量安全問題近年來一直受到廣泛關注，我國和歐盟均對真菌毒素在食品尤其是糧食作物中的限量作出規定[7-8]。鮮食玉米由于生長期短，且直接食用，因此，其質量安全狀況更應引起高度重視。

有研究發現，不同品種鮮食玉米干基淀粉、蛋白質、脂肪含量差異不大[2]，但不同色澤鮮食玉米的類胡蘿卜素、花色苷、酚類化合物含量存在顯著差異，由此導致抗氧化活性和抗菌性也存在顯著差異[9-10]。因此，本研究選用當前3 個代表性的鮮食糯玉米品種天紫23、京科糯2000和黑糯6號，籽粒色澤分別為紫色、白色和黑色。通過對比不同色澤品種在不同發育時期真菌污染和真菌毒素積累情況，掌握鮮食玉米適宜采收期的總體質量安全情況，并分析不同品種特征鮮食糯玉米的真菌污染和毒素積累差異，以期為鮮食糯玉米品種選育和實際生產提供基礎依據。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

鮮食玉米樣品采自山東省農業科學院試驗示范基地濟陽基地，3 個品種為天紫23、京科糯2000、黑糯6號，每個品種花期套袋后，進行人工授粉。本實驗從玉米授粉期當天開始，以授粉后天數（days after pollination，DAP）表示每次取樣時期，根據玉米籽粒發育程度從籽粒開始授粉、灌漿、乳熟、蠟熟、完熟時界定取樣時間為0 DAP、12 DAP、23 DAP、35 DAP、55 DAP為采樣期，隨機取樣，為保證所取果穗的一致性，采收時選擇生長發育一致的植株，無蟲害和霉變，每個品種每次帶苞葉取30～50 個果穗，裝入無菌密封袋中，取樣后放入箱中，帶回實驗室，當天取樣當天分離。在超凈工作臺中用無菌鑷子剝除苞葉，進一步選擇無蟲害、霉變果穗20 個，剝取玉米穗中間位置籽粒，共取籽粒鮮質量200 g，混勻后無菌粉碎至全部過20 目篩，一部分用來分離病原菌，一部分-80 ℃低溫貯存，用于測定毒素。

馬鈴薯葡萄糖瓊脂（potato dextrose agar，PDA）培養基 青島高科園海博生物技術有限公司；青鏈霉素（青霉素10 000 U/mL，鏈霉素10 mg/mL） 以色列生物工業有限公司；丙三醇（甘油）、乙二胺四乙酸、無水磷酸二氫鈉（均為分析純） 國藥集團化學試劑有限公司；2×TaqDNA Master Mix、ITS通用引物 北京擎科生物技術有限公司；DNA Marker、6×DNA Loading Buffer、10 000×DNA Dye 北京康潤誠業生物科技有限公司；嘔吐毒素、黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮ELISA檢測試劑盒 北京華安麥科生物技術有限公司。

1.2 儀器與設備

SW-CJ-2FD凈化工作臺 蘇州凈化設備有限公司；IX51倒置顯微鏡 奧林巴斯（中國）有限公司；LDZX-50KBS立式高壓滅菌器 上海申安醫療器械廠；LXJ-IIB型臺式高速離心機 上海安亭科學儀器廠；PHS-3E酸度計 上海佑科儀器儀表有限公司；SHA_B型數顯恒溫振蕩水浴器 天津賽得利斯實驗分析儀器制造廠；DTC-100型恒溫金屬浴 杭州米歐儀器有限公司；Varioskan Flash全波長多功能酶標儀 賽默飛世爾科技（中國）公司；5425型號臺式高速離心機艾本德（中國）有限公司；T960型聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction，PCR）儀 上海力新儀器有限公司；Min-Sub Cell水平電泳儀 美國伯樂公司；NU Genius凝膠成像系統 香港基因有限公司；GL124-1SCN分析天平 德國賽得利斯（中國）公司；XW-80A旋渦混合儀 寧波新芝生物科技股份有限公司。

1.3 方法

1.3.1 真菌分離、純化

在超凈工作臺無菌條件下，取1 g樣品于含有10 mL滅菌蒸餾水的離心管中，渦旋振蕩10 s充分混勻。采用稀釋平板法[11]，取1 mL混合液于9 mL滅菌蒸餾水中依次稀釋成10-2、10-3、10-4濃度梯度的混合液。取100 μL稀釋液涂布于含有1%青霉素（10 000 U/mL）和硫酸鏈霉素（10 mg/mL）的無菌PDA平板培養基中，每個濃度梯度做3 個重復。將接種后的平皿28 ℃左右培養3 d后，進行菌落計數，實驗重復3 次。根據菌落形態對真菌進行純化并編號，并用無菌保種管4 ℃保存。

1.3.2 真菌形態學鑒定

菌落形態觀察：包括菌落大小、菌落顏色、高度、菌絲長短、氣生菌絲質地（絨毛狀、棉絮狀、粉粒狀、氈狀或毯狀等）、菌落表面紋飾（皺紋、輻射溝紋或同心紋）、菌落背面顏色及是否產生色素。

顯微鑒定：制作臨時裝片，在干凈的載玻片中央滴一滴無菌水，用無菌接種針挑取少量經過純化的菌絲和孢子于無菌水滴中，小心從邊緣位置蓋好蓋玻片，并排出氣泡，置于倒置攝像顯微鏡下，觀察菌絲表面形狀、是否有隔、分生孢子梗分支情況、輪生或單生、基部粗糙或光滑等，孢子形態、大小、著生位置（單生或互生）、表面形態等[12]。

1.3.3 真菌分子生物學鑒定

選取形態不同的代表性菌株，進行分子生物學鑒定。

真菌DNA基因組提?。翰捎脽崃呀夥╗13]，用無菌接種針挑取少量菌絲放到盛有100 μL超純水的1.5 mL離心管中，渦旋振蕩1 min，充分混勻。10 000 r/min離心30 s，用微量移液器小心棄去上清液。在離心管中加入100 μL裂解液，封口膜封口后放入85 ℃金屬浴20～30 min。粗提物中含有真菌的基因組DNA，放入20 ℃保存備用。裂解液成分為50 mmol/L的磷酸二氫鈉，1 mmol/L的乙二胺四乙酸和5%甘油，調節pH值到7.4，使用前121 ℃高壓蒸汽滅菌20 min，4 ℃貯藏備用。

核糖體DNA中ITS序列擴增[14]：基于18S核糖體DNA的內轉錄間隔區（internal transcribed spacer，ITS）的通用引物，ITS1：5’-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3’和ITS4：5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’，進行PCR擴增，反應體系見表1。

表1 PCR體系Table 1 Composition of PCR system

反應條件：95 ℃預變性3 min；94 ℃變性1 min、55 ℃退火1 min、72 ℃延伸1 min共計35 個循環；72 ℃延伸10 min。擴增結束4 ℃保存備用。

PCR產物檢測：將擴增產物用1%瓊脂糖凝膠電泳，觀察是否有目的條帶，將產物送往青島擎科生物科技有限公司進行測序。

系統發育分析：對返回的測序結果用Geneious 8.0.3軟件進行序列分析和校正，得到的高質量DNA序列上傳到美國國家生物技術信息中心（National Center for Biotechnology Information，NCBI）數據庫GenBank中進行同源序列BLAST比對，尋找具有較高同源性的核苷酸序列，初步確定其發育地位，并下載相似度高的菌種序列及序列號。將各類菌株序列和比對結果導入MEGA 7.0軟件進行多序列比對分析，采用最大似然法構建系統發育樹。

1.3.4 真菌毒素檢測

黃曲霉毒素B1、嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮用酶聯免疫試劑盒進行檢測。

1.3.4.1 樣品處理

黃曲霉毒素B1：粉碎并稱取鮮食玉米樣品5.0 g（鮮質量），置入100 mL具塞三角瓶中，加入60%甲醇溶液25 mL于振蕩器轉速200 r/min，振蕩10 min；取液體于4 000 r/min離心5 min，取上清液1 mL，再加入4 mL去離子水，渦旋混合5 s，最后調節pH值至7～8之間。

嘔吐毒素：粉碎并稱取鮮食玉米樣品5.0 g（鮮質量），置入100 mL具塞三角瓶中，加入25 mL去離子水，在150 r/min振蕩器上振蕩10 min充分混勻；取液體于4 000 r/min離心5 min，取上清液1 mL，再加入4 mL去離子水，渦旋混合5 s充分混勻。

玉米赤霉烯酮：粉碎并稱取鮮食玉米樣品5.0 g（鮮質量），置入100 mL具塞三角瓶中，加入60%甲醇溶液50 mL于振蕩器轉速150 r/min，振蕩10 min充分混勻；取液體于4 000 r/min離心5 min，取上清液0.5mL，加入4.5 mL去離子水渦旋振蕩5 s充分混勻。

1.3.4.2 檢測步驟

將樣品和標準品對應微孔板編號，加入樣品和標準品50 μL/孔，再分別加入對應的酶標物50 μL/孔，抗試劑50 μL/孔，輕輕振蕩混勻，蓋板膜蓋板置25 ℃避光反應30 min。揭開蓋板膜，甩干液體，用對應的毒素洗滌液250 μL/孔，洗滌4～5 次，每次間隔10 s，用吸水紙拍干。依次加入底物顯色A液50 μL/孔和底物顯色B液50 μL/孔，輕輕振蕩混勻，蓋板膜蓋板25 ℃避光反應15 min。加入終止液50 μL/孔，振蕩混勻，設定酶標儀分別于450 nm和630 nm波長處進行雙波長檢測，測定每孔OD值。

1.3.4.3 結果判定

按下式計算吸光率：

式中：B為標準品或樣品的OD值；B0為0 μg/kg標準品的OD值。

以標準品吸光率為縱坐標，以對應毒素標準品含量（μg/kg）的對數為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣品的吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣品對應的濃度，乘以稀釋倍數即為樣本中真菌毒素實際含量。

1.3.4.4 試劑盒參數

試劑盒參數如表2所示。

表2 試劑盒參數Table 2 Parameters of ELISA kits

1.4 數據分析

每個處理均測定3 次，取3 次平均值作為測定結果。采用Origin 9.0和Excel進行統計分析和作圖，取其平均值，運用Duncan檢驗進行差異顯著性分析（P＜0.05）；產毒真菌與毒素積累相關性采用SPSS 17.0軟件進行Pearson相關分析。

2 結果與分析

2.1 分離真菌鑒定

2.1.1 形態鑒定

按照稀釋平板的梯度篩選法，本實驗于鮮食玉米授粉后不同時期，從天紫23、京科糯2000和黑糯6號3 個品種中分離出1 606 株真菌，根據魏景超[15]的方法對真菌菌絲形態、菌落顏色和質地及分生孢子顯微形態、大小等形態特征進行初步鑒定，如圖1所示。

圖1 真菌在PDA平板的菌落及顯微（40×10）形態Fig. 1 Colonies and micromorphology (40 × 10) of fungi cultivated in PDA medium

2.1.2 分離真菌分子生物學鑒定

根據形態學鑒定結果，選取具有不同形態的代表性菌株，進行基于18S rDNA的內轉錄間隔區（ITS）鑒定，經過基因組提取、通用引物ITS1和ITS4序列擴增、1%瓊脂糖凝膠電泳，檢測結果如圖2所示，目的基因片段大小在500 bp左右，可以認為，擴增的目的片段為所需片段。

圖2 代表性真菌PCR擴增產物電泳圖Fig. 2 Electrophoresis profile of PCR amplification products from representative fungi

將測序返回結果上傳到GenBank中進行BLAST搜索，從中選擇已公開發表且相似度最高的模式菌株，將序列和模式菌株序列導入MEGA 7.0軟件，采用最大似然法，迭代1 000 次構建系統發育樹（圖3），確定各類菌株的系統發育地位，最終確定所分離真菌分屬鐮孢屬、曲霉屬、青霉屬、毛霉屬、根霉屬、交鏈孢屬、籃狀菌屬、帚枝霉屬、枝孢屬、笄霉屬、橫梗霉屬、黑孢霉屬、莖點霉屬共計13 個屬20 個種（表3），編號為CN001～CN020。

表3 玉米分離純化代表真菌類群Table 3 Representative fungal species separated and purified from corn

2.2 鮮食玉米籽粒生長期間真菌污染變化

3 個鮮食玉米品種授粉后不同時期鮮質量鮮食玉米樣品中真菌污染情況見圖4。鮮食玉米在授粉后籽粒發育期間，以青霉（Penicillium）、曲霉（Aspergillus）、毛霉（Mucor）、鐮刀菌（Fusarium）、籃狀菌（Talaromyces）為主要污染真菌，其次是交鏈孢（Alternaria）、帚枝霉（Sarocladium）、根霉（Rhizopus）和笄霉（Choanephora），也有少量的橫梗霉（Lichtheimia）、枝孢霉（Cladosporium）、黑孢霉（Nigrospora）和莖點霉（Phoma）的污染。其中0 DAP處于授粉期，均以青霉為主要污染菌；12 DAP和23 DAP污染優勢菌均為青霉、曲霉和毛霉，并出現新類型的污染真菌：帚枝霉、枝孢霉和笄霉，污染真菌總量分別是0 DAP的2.5 倍和4 倍；35 DAP和55 DAP污染真菌總量分別是0 DAP的5.7 倍和9.5 倍，優勢菌是青霉、曲霉和鐮刀菌，其次是毛霉、籃狀菌和交鏈孢，并分離出橫梗霉、黑孢霉和莖點霉3 種新類型的真菌?？梢?，鮮食玉米授粉后籽粒污染真菌在數量上和種類上逐漸增加。

圖4 鮮食玉米授粉后不同時期真菌污染情況對比Fig. 4 Comparison of fungal contamination in fresh corn after pollination

根據不同鮮食玉米品種之間比較，天紫23污染優勢真菌為青霉和曲霉，其次是鐮刀菌和毛霉，共分離出11 個屬共計487 株真菌；京科糯2000以青霉和曲霉為主要污染真菌，其次是鐮刀菌和毛霉，共分離出13 個屬共計564 株真菌；黑糯6號污染優勢菌與其他2 個品種稍有差異，以青霉和毛霉為主，鐮刀菌和曲霉次之，共分離出12 個屬共計555 株真菌。經對比，天紫23污染真菌總量和種類最少，黑糯6號次之，京科糯2000污染最重。

2.3 鮮食玉米籽粒生長期間真菌毒素含量變化

2.3.1 黃曲霉毒素B1含量變化

采用單因素方差分析，對授粉后不同時期籽粒中黃曲霉毒素B1含量進行比較（表4），發現3 個鮮食玉米品種均在12 DAP黃曲霉毒素B1含量最高，與其他各時期均差異顯著（P＜0.05），而23 DAP含量最低，其次是0 DAP和35 DAP，三者之間無顯著差異（P＞0.05），55 DAP 3 個品種的黃曲霉毒素B1含量均顯著（P＜0.05）高于0 DAP、23 DAP、35 DAP，但仍顯著（P＜0.05）低于12 DAP。對品種之間黃曲霉毒素B1含量進行比較，京科糯2000從授粉期0 DAP～55 DAP含量最高，到55 DAP黃曲霉毒素B1含量為（0.244±0.047 3）μg/kg，分別是天紫23和黑糯6號的1.24 倍和1.23 倍，且差異顯著（P＜0.05），天紫23含量最低為（0.197±0.007 1） μg/kg，但與黑糯6號（0.198±0.003 7） μg/kg）差異不顯著（P＞0.05）。

表4 鮮食玉米授粉后不同時期黃曲霉毒素B1含量（以鮮質量計）Table 4 Aflatoxin B1 contents in fresh corn at different days after pollination μg/kg

2.3.2 嘔吐毒素含量變化

如表5所示，比較各時期之間嘔吐毒素含量變化，發現授粉后到第12天嘔吐毒素含量最高，之后逐漸下降，23 DAP含量最低，經單因素方差分析與35 DAP差異不顯著（P＞0.05），到55 DAP嘔吐毒素含量升高，與23 DAP和35 DAP差異顯著（P＜0.05）。品種之間比較，京科糯2000授粉后前期積累較其他2 個品種慢，23 DAP開始嘔吐毒素高于其他2 個品種，到55 DAP達到（80.74±5.89）μg/kg，與天紫23（70.31±4.50）μg/kg和黑糯6號（61.84±6.58）μg/kg差異顯著（P＜0.05）。

表5 鮮食玉米授粉后不同時期嘔吐毒素含量Table 5 Deoxynivalenol contents in fresh corn at different days after pollination μg/kg

2.3.3 玉米赤霉烯酮含量變化

對鮮食玉米授粉后各時期玉米赤霉烯酮含量進行比較（表6），從授粉期到55 DAP呈先上升、后下降、再上升的趨勢，玉米赤霉烯酮含量在12 DAP達到最高峰，與其他各時期均有顯著差異（P＜0.05）；23 DAP和35 DAP含量最低，2 個時期沒有顯著差異（P＞0.05）；55 DAP玉米赤霉烯酮含量再次達到高峰，且與其他各時期均差異顯著（P＜0.05）。根據品種之間看，23 DAP京科糯2000含量高于黑糯6號，且兩者之間差異顯著（P＜0.05），除此之外從0 DAP～35 DAP 3 個品種間均無顯著差異（P＞0.05）。55 DAP京科糯2000玉米赤霉烯酮含量最高為（4.388±0.075）μg/kg，其次是天紫23為（3.954±0.093）μg/kg，黑糯6號含量最低為（3.131±0.058）μg/kg，3 個品種之間差異顯著（P＜0.05）。

表6 鮮食玉米授粉后不同時期玉米赤霉烯酮含量Table 6 Zearalenone contents in fresh corn at different days after pollination μg/kg

2.4 鮮食玉米主要產毒真菌與毒素積累相關性分析

對鮮食玉米主要產毒真菌分別與黃曲霉毒素B1、嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮含量進行相關性分析，結果如表7所示。Pearson相關系數反映了2 個變量之間的親密度和方向，絕對值在0～0.1之間表示沒有相關性，0.1～0.3之間表示弱相關，0.3～0.5之間表示中等相關，大于0.5表示強相關[16]。由表7可知，產毒真菌數與相關真菌毒素含量的相關系數絕對值均在0.5以內，代表它們是弱相關或中等相關，且基本不具備顯著性。由此可以看出鮮食玉米產毒真菌污染數量與相關真菌毒素含量不相關。

表7 主要產毒真菌與真菌毒素含量的相關性分析Table 7 Correlation analysis between major toxic fungi and mycotoxin content

3 討 論

3.1 鮮食玉米生長發育期間優勢污染真菌主要為穗腐病相關菌

3 個鮮食玉米品種在各時期污染優勢菌均為青霉屬、毛霉屬、曲霉屬、鐮孢霉屬和籃狀菌屬真菌，占污染真菌總量的71.5%，次要污染真菌為交鏈孢屬、根霉屬、帚枝霉屬、笄霉屬占22.5%，此外還有少量的稀有菌種如莖點霉、黑孢霉、橫梗霉和枝孢霉占6.0%。本實驗分離結果與張守梅等[17]調查的山東省部分地區玉米污染優勢真菌和陳曉琳等[18]從8 個品種玉米中分離出的污染優勢菌種基本一致，孫華等[19]對黃淮海夏玉米主產區山東、河南和河北三省玉米穗腐病致病真菌分離也獲得了相似的結果，并表明鮮食玉米生長期間的這些優勢菌種更容易導致玉米穗腐病[20]，鮮食用途并不會導致與普通玉米不同的真菌侵染風險。就鮮食應用來講，3 個品種最佳采收期的污染菌種基本一致，其中天紫23的污染菌株數量略低于京科糯2000和黑糯6號（圖4）。

3.2 鮮食玉米乳熟期真菌毒素含量最低，具有比完熟期更好的食品安全保障

本研究以不同鮮食玉米品種的授粉期、灌漿期、乳熟期、蠟熟期和完熟期為調查節點，考慮到鮮食玉米和完熟玉米均以其實際狀態進行食用和應用，因此以鮮質量為基礎分析污染真菌和毒素積累情況更具有實際應用價值。研究發現鮮食玉米籽粒發育過程中，污染真菌數量逐漸增加。除了容易引起穗腐病的青霉和毛霉，黃曲霉和鐮刀菌是僅次于青霉和毛霉的主要污染真菌。黃曲霉是黃曲霉毒素B1的產毒菌[21-22]，鐮刀菌是嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮的主要產毒菌[23]。在鮮食玉米籽粒整個發育期，隨著籽粒發育，黃曲霉和鐮刀菌的污染真菌數量逐漸增多，但它們所產生的真菌毒素含量變化有所差異，乳熟期（23 DAP）真菌毒素含量最低，低于蠟熟期（35 DAP）但差異不顯著（P＞0.05），低于灌漿期（12 DAP）和完熟期（55 DAP）且差異顯著（P＜0.05），經過Pearson相關性分析以鮮質量計的真菌毒素積累與真菌污染無明顯相關性（表7）。

出現上述情況的原因，分析可能是真菌毒素的產生受環境條件的影響，玉米籽粒灌漿初期對水分需求大，正值夏末秋初氣溫較高，水活度高，適合真菌產毒[24]，加之干物質增長緩慢，真菌毒素的合成加快[25]，導致每千克鮮質量籽粒中真菌毒素含量快速升高；而玉米籽粒處于乳熟期時，干物質增長快速，水分比例降低，毒素積累速率低于干物質形成速率，導致每千克鮮質量中毒素含量顯著低于灌漿初期（P＜0.05）；玉米籽粒在授粉后第30～36天干物質積累達到最高峰，之后積累速率逐漸降低[26]，到55 DAP，玉米已經進入完熟期，籽粒干物質基本上不再增加[25]，導致每千克鮮質量真菌毒素含量升高，且顯著（P＜0.05）高于乳熟期和蠟熟期。GB 2716—2017《食品中真菌毒素限量》規定食品中黃曲霉毒素B1≤20 μg/kg，嘔吐毒素≤1 000 μg/kg，玉米赤霉烯酮≤60 μg/kg。因此，鮮食玉米授粉后籽粒發育期間所檢測真菌毒素均低于國家限量標準。乳熟期采收的鮮食玉米口感優良，本研究進一步證實了乳熟期真菌毒素含量最低，因此，對比我國傳統的利用完熟玉米籽粒制作食品，發展鮮食玉米產業具有更好的食用品質和質量安全優勢。

3.3 鮮食玉米真菌污染和毒素積累與品種可能有相關性

本實驗以天紫23、京科糯2000和黑糯6號3 個鮮食玉米品種為研究對象，就鮮食應用來講，3 個品種最佳采收期的污染菌種基本一致，其中天紫23的污染菌株數量略低于京科糯2000和黑糯6號（圖4）。黃曲霉毒素B1、嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮3 種真菌毒素含量在品種間有所差異，京科糯2000表現了顯著（P＜0.05）高于其他2 個品種的黃曲霉毒素B1、嘔吐毒素和赤霉烯酮含量。分析原因可能是：1）黑糯6號和天紫232 個鮮食玉米品種均為彩色，含有豐富的花青素，具有較強的抗氧化活性作用，可以提高玉米籽粒對致病真菌的抵抗能力[10,27]；有研究也發現，在玉米生長發育初期產生較多的花青素能夠抑制霉菌生長[28]；2）黑曲霉對黃曲霉毒素B1具有生物降解作用[29]；李冰等[30]發現黑曲霉對黃曲霉毒素B1降解率可達93.28%，同時菌體細胞對黃曲霉毒素B1也具有一定的吸附作用；孫秀蘭[31]發現黑曲霉對黃曲霉毒素B1的降解率達69.16%，對玉米赤霉烯酮的降解率達86.92%，對嘔吐毒素的降解率達48.04%。鮮食玉米23 DAP和35 DAP均有較高的黑曲霉菌株分離出，因此，產毒真菌在產生毒素的同時，黑曲霉等相關的毒素降解菌也可能對毒素起到降解作用。但總體而言，3 個鮮食玉米品種的黃曲霉毒素B1、嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮含量均遠低于食品安全國家標準規定的最高殘留限量。

4 結 論

研究發現，實驗所測3 個鮮食玉米品種天紫23、京科糯2000和黑糯6號籽粒發育期間的污染優勢真菌主要為青霉屬、曲霉屬、毛霉屬、鐮孢屬、籃狀菌屬真菌，其次是交鏈孢屬、根霉屬、帚枝霉屬、笄霉屬真菌，還有少量的莖點霉、黑孢霉、橫梗霉和枝孢霉污染。鮮食玉米授粉后第23天乳熟采收期時黃曲霉毒素B1、嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮的含量最低，屬于玉米食用的最佳時期。鮮食玉米籽粒發育期間毒素積累和真菌污染數量不具相關性，但可能與品種有關，測試品種中黑糯6號毒素含量最低，其次是天紫23、京科糯2000，3 個品種鮮食期黃曲霉毒素B1、嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮含量處于安全范圍之內，均遠低于國家限量標準。