雞新城疫抗體檢測技術在診斷中的應用

文│李媛（廣西壯族自治區北海市動物疫病預防控制中心）

雞新城疫（Newcastle Disease，以下簡稱ND）是副黏病毒引起的一種傳染性疾病，病雞以消化道和呼吸道癥狀為主，可導致病雞死亡。此病無明顯季節性特征，也沒有年齡特征，四季均可發病，尤其是氣候寒冷或者季節交替時節，任何階段的雞都可能發病，且死亡率較高。由于此病的感染性較強，一旦發病往往難以有效控制，從而導致雞大面積死亡，因此日常的防疫和監測是關鍵。采用雞新城疫抗體檢測技術可以準確評估免疫抗體水平，從而判斷雞群對雞新城疫的抵抗能力，及早預防（Newcastle Disease Virus，以下簡稱NDV）。

一、病例情況

2019年3月，某雞場的雞突然發病，病雞主要癥狀為呼吸困難，發熱，嗉囊積液，下痢，糞便為黃白色、綠色或者黃綠色，口角分泌酸臭液體，雙腿麻痹，無法正常站立。該雞場為50日齡肉雞，存欄量2100只，常規免疫。發病后，該養雞場采取了無害化處理措施，但仍有大量雞只死亡，發病率超過85%，死亡1400余只，死亡率70%以上，經濟損失嚴重。

二、剖檢變化

病雞喉頭、氣管出血，氣管中有少量黏液；小腸前端、十二指腸以及盲腸扁桃體有點狀或斑狀出血，部分病雞腸道潰瘍，脾腫大有白色壞死點，肺、肝和腎無明顯病變；病雞體內多部位黏膜與漿膜出血，盲腸以及盲腸扁桃體腫脹出血，心冠脂肪以及心外膜點狀出血。

三、雞新城疫實驗室診斷

1.細菌學檢驗。隨機取病死雞解剖，取心臟、肝和脾制作組織觸片，分別做革蘭氏染色和美藍染色鏡檢，未見病原菌。采用上述病料分別接種血瓊脂平板、普通瓊脂平板和SS瓊脂平板，置恒溫箱37℃，培養24小時，無菌落，重復試驗，發現仍無菌落，提示病原與細菌無關，考慮進行病毒分離試驗。

2.病毒分離試驗。無菌操作取病死雞脾以及腦組織，碾碎研磨后經2次凍融，配置青霉素與鏈霉素含量為1000毫升的無菌生理鹽水，按照1∶5的比例進行稀釋，然后以4000轉/分的速率離心處理15分鐘，靜置后取上清液，放置在冰箱中4～12小時，冰箱溫度控制在4℃。

（1）雞胚接種。選取11日齡SPE雞胚30枚，將處理后的上清液經尿囊腔接種，每個雞胚接種0.2毫升，然后采用石蠟進行封存并繼續孵化，24小時內若雞胚死亡則予以剔除，此后每間隔2～4小時照蛋1次，死亡的雞胚放置在冰箱中備用，冰箱溫度控制在4℃。

（2）病毒鑒定。病毒血凝試驗：收獲新鮮感染雞胚尿囊液進行血凝試驗，以微量法在血凝板上進行2倍比稀釋，同時設置生理鹽水作為對照孔，每孔加入1%雞紅細胞并振蕩均勻，靜置20℃環境下40分鐘，觀察試驗結果。對照孔雞紅細胞呈紐扣狀沉底，病毒有凝集性，表明該病毒有血凝性特征?？筃DV陽性血清血凝抑制試驗，操作如上，試驗結果如表1所示。前4孔有凝集現象，因ND陽性血清的效價較低、病毒濃度偏高所致；第3孔往后病毒對雞紅細胞的凝集作用完全被ND陽性血清抑制。試驗表明，從病死雞身上提取的脾以及腦組織分離出的病毒，對雞紅細胞具有凝集作用，而凝集作用可以完全被ND陽性血清抑制，表明該病毒與NDV存在相關性。

表1 抗NDV陽性血清血凝抑制試驗結果

（3）抗體檢測。對雞進行ND抗體檢測，運用血凝和血凝抑制試驗（GB/T16550-2020），檢測抗體是否異常升高，結合臨床癥狀、剖檢變化和病毒分離鑒定，綜合診斷為ND感染。對該雞場按不少于10%的比例隨機抽取30只雞做ND抗體檢測，結果為其中26只雞ND抗體高于11log2，抗體水平異常升高，結合臨床癥狀、剖檢變化和病毒分離鑒定，提示該雞場的雞可能感染新城疫強毒。

四、雞新城疫抗體檢測技術應用

1.雛雞首免。雛雞體內母源抗體在接近消失或者剛消失時進行首次免疫，可以取得良好的效果。一般情況下，雛雞出殼1天后即采集雛雞血液，測試雛雞HI效價，在中、大型雞場，采用抽樣測試的方式，抽樣率不得小于0.1%；否則，不具備參考價值。若是小型雞場，則抽樣率不低于2%；否則，不具備參考價值。抽樣測試后計算雞群的平均HI效價，然后根據計算公式得出雛雞首免日齡，計算公式如下：首免日齡＝4.5×（1日齡雞群平均HI效價－4）＋5。該養殖場經抽樣測試后得出的雞群HI平均效價是7.5log2，則雛雞首免日齡即為4.5×（6.5－4）＋5＝11.75日齡，即在雛雞12日齡進行首次免疫接種可以獲得最好的免疫效果。

2.定期抽檢。雛雞進行首次免疫接種后，需要定期對其進行抽檢，評估免疫效果，若免疫抗體滴度70%以上達到5log2及以上，說明免疫效果良好，正常飼養即可；若免疫抗體滴度下降或者無效，要及時進行二次免疫接種。一般在首次免疫接種后15～20天采血抽檢。對于大中型雞場，抽樣率不得小于0.1%；否則不具備參考價值。小型雞養殖場則需要增加抽樣率，建議不低于2%；否則，不具備參考價值。抽檢后，按照上述公式計算雞群HI抗體平均效價，如果平均值低于4log2，則需要對雞群進行二次免疫接種；若平均值在4log2以上，則正常飼養。首次免疫接種后第15～20天再次進行采血抽檢，并計算雞群HI抗體平均效價，如果平均值低于5log2，則需要對雞群進行二次免疫接種，若平均值在5log2以上，則正常飼養。此后可延長抽檢間隔時間，需要注意的是同日齡種雞的HI抗體效價要高于其他雞至少1log2，若低于1log2，則認為免疫失敗，需要再次進行免疫接種。

3.其他情況。若雞場不具備進行ND抗體檢測的條件，則可以嘗試提高免疫接種質量與密度，使雞群保持持續、穩定的抗體，一般7～10日齡的雛雞可以選擇IV系或者NDII系疫苗進行首次免疫接種；20～25日齡雞群可以選擇II系疫苗進行免疫接種，同時肌內注射或者皮下注射規格為0.3毫升/只的ND油乳劑滅活苗；60日齡雞群建議選擇聯苗或者弱毒苗接種；120日齡雞群建議選擇聯苗或者油苗接種；10月齡以上的種雞群除首次免疫接種外，還需要進行1次油苗接種。通過上述方式能取得良好的免疫效果，降低雞群發病風險。

綜上所述，在新城疫抗體技術檢測過程中，需要嚴格按照規定進行操作，雞新城疫會嚴重影響養殖業發展，需要做好實驗室診斷，并且在診斷過程中應用好抗體檢測技術，有效降低發病率，促進養殖業發展。