HPLC測定小兒清熱止咳口服液中苯甲酸的含量

尕藏卓瑪 楊麗瓊 達娃卓瑪

【摘 要】 目的：用HPLC法測定全國范圍30家生產(chǎn)企業(yè)57批次小兒清熱止咳口服液中苯甲酸的含量。方法：Inertsustain C18（5 μm， 250 mm×4.6 mm） 柱，柱溫35 ℃;流動相：乙腈-0.02 mol/mL乙酸銨溶液（5∶95）;流速：1.0mL/min;檢測波長：240 nm。結(jié)果：苯甲酸在6.1350～184.0488 μg/mL線性關(guān)系良好（r>0.9998）;平均回收率102.94%。結(jié)論：30家企業(yè)57批次樣品均檢出苯甲酸，且各企業(yè)樣品中苯甲酸含量差異很大。

【關(guān)鍵詞】 小兒清熱止咳口服液;苯甲酸;測定

【中圖分類號】R284.1 【文獻標(biāo)志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2021）13-0050-04

Abstract：Objective Using the HPLC to check the benzoic content in the children's oral liquid clearing heat and relieving cough in 30 enterprises. The specific method is， Inertsustain C18 （5 μm， 250 mm × 4.6 mm） column， column temperature is 35 ℃; mobile phase： acetonitrile -0.02 mol/ammonium acetate solution （5∶95）; current velocity： 1.0 mL/min; detection wavelength： 230 nm.Result Benzoic acid shows great in the linear relation of 6.1350～184.0488 μg/mL （r>0.9998）; average recovery rate should be 102.94%. Conclusion we have checked the benzoic acid in 60 times of samples in 30 enterprises， and the benzoic acid content is different from different enterprises.

Keywords：Children's Oral Liquid for Clearing Heat and Relieving Cough; Benzoic Acid; Checking

小兒清熱止咳口服液原方來自我國漢代名醫(yī)張仲景的《傷寒雜病論》的麻杏石甘湯。麻杏石甘為麻黃、苦杏仁、石膏、甘草。本品現(xiàn)收載于《中國藥典》（2015年版）一部，具有清熱宣肺、平喘、利咽的功效，用于小兒外感風(fēng)熱所致的感冒，癥見發(fā)熱惡寒、咳嗽痰黃、氣促喘息、口干音啞、咽喉腫痛。該方由麻黃、炒苦杏仁、石膏、甘草、黃芩、板藍根、北豆根七味藥組成，輔料為蜂蜜、蔗糖、苯甲酸鈉[1]。已發(fā)表的文獻主要報道了該制劑中鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、黃芩苷及總黃酮的含量[2-5]。關(guān)于小兒清熱止咳顆粒中輔料苯甲酸的質(zhì)量控制未見文獻報道。苯甲酸又稱安息香酸，適量的苯甲酸防腐劑能抑制微生物的生長和繁殖，延長藥品的保存期[6-7]。但過量的苯甲酸會對人體產(chǎn)生極大危害，對胃、皮膚和粘膜有一定的刺激性，對于敏感人群， 較多地攝入苯甲酸及其鹽會引起過敏反應(yīng)， 例如哮喘、蕁麻疹、代謝性酸中毒和抽搐等癥狀[8-9]，過少起不到防腐效果。因而對小兒清熱止咳顆粒中的防腐劑苯甲酸的用量應(yīng)該嚴(yán)格控制。為保證用藥安全，本實驗對該制劑中苯甲酸的HPLC含量測定進行方法學(xué)研究，并對30家企業(yè)各2批次的苯甲酸含量進行測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津LC-2030高效液相色譜儀（Labsolution工作站），自帶檢測器，瑞士Mettler XP205型（精密度為十萬分之一）和Mettler XP504（精密度為萬分之一）電子天平。

1.2 試藥 苯甲酸，購于中國食品藥品檢定研究院，批號為（100419-201302），純度大于99%。乙腈（色譜純，美國Fisher Scientific公司）;水（娃哈哈純凈水）。

2 色譜條件

色譜柱Inertsustain C18（5 μm， 250 mm × 4.6 mm） 柱，柱溫35℃;流動相：乙腈-0.02 mol/mL乙酸銨溶液（5∶95）;流速：1.0 mL/min;檢測波長：240 nm;進樣量：20 μL。

3 結(jié)果與討論

3.1 檢測波長的確定 用二極管陣列檢測器對標(biāo)準(zhǔn)溶液在190 ～ 700 nm 范圍內(nèi)進行波長掃描，發(fā)現(xiàn)苯甲酸在223 nm處有最大吸收，如圖1所示。根據(jù)樣品特征及前處理過程中試劑的干擾情況，選擇檢測波長為240 nm。

3.2 對照品溶液的制備 取苯甲酸對照品適量，精密稱定，置于50 mL的容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，制成濃度為1.8044 mg/mL的對照品溶液。對照圖譜如圖2所示。

3.3 供試品溶液的制備 對30家企業(yè)57批次樣品進行檢驗。精密吸取0.2 mL于10 mL的容量瓶中，以流動相稀釋至刻度，搖勻。供試品圖譜如圖3所示。

3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 精密量取苯甲酸對照品母液6.8 mL于50 mL的容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，制成245.3984 μg/mL的目標(biāo)溶液。再分別精密量取0.25、0.5、1.0、2.5、5.0、7.5 mL分別置于10 mL的容量瓶中，以流動相稀釋至刻度，搖勻。在上述色譜條件下分析，以對照品溶液的濃度為橫坐標(biāo)，其對應(yīng)的縱坐標(biāo)為峰面積進行線性回歸，苯甲酸對照品在一定范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，結(jié)果見表1和圖4。

3.5 檢出限 取對照品溶液，稀釋至對照品色譜峰高達到3倍信噪比，得到苯甲酸的檢出限為9.816 ng/mL。

3.6 精密度 精密量取濃度為245.3984 μg/mL的苯甲酸對照品2.5 mL置于10 mL的容量瓶中，以流動相稀釋至刻度，連續(xù)進樣6次，測得苯甲酸峰面積RSD為0.053%，表明儀器精密度很好。

3.7 重復(fù)性 精密量取供試品溶液0.2 mL共6份，分別置于10 mL量瓶中，以流動相稀釋至刻度，以0.45μm微孔濾膜過濾后進樣分析，RSD 為1.81%。

3.8 穩(wěn)定性 取同一供試品溶液，按上述方法提取后在室溫下放置0、2、4、8、12、24 h在上述色譜條件下分析，測得苯甲酸峰面積RSD為0.412%，表明樣品在室溫下24 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.9 加樣回收試驗 精密量取供試品溶液0.1 mL共6份，分別置于10 mL的容量瓶中，精密加入溶液濃度為245.3984 μg/mL的苯甲酸對照品1.0 mL，以流動相稀釋至刻度。在上述色譜條件下進行分析，結(jié)果見表2。

3.10 耐用性 精密量取供試品溶液0.2 mL共兩份分別置于10 mL的容量瓶中，以流動相稀釋至刻度，搖勻。采用不同色譜柱對同一樣品在上述色譜條件下進行分析，色譜柱①島津柱子InertSustain C18（5 μm， 250 mm × 4.6 mm）、②waters柱子XSELECT CSH C18（5 μm， 250 mm × 4.6 mm）③Agilent柱子 EcLipse XDB-C18（5 μm， 250 mm × 4.6 mm） 。不同柱子測得的結(jié)果RSD為1.48%，表明樣品耐用性良好。見表3。

3.11 樣品的測定 對于口服液體制劑，《中國藥典》2015年版一部明確規(guī)定，苯甲酸含量不得超過0.3%[10]，對以上30家企業(yè)57批次樣品的苯甲酸含量進行測定，結(jié)果顯示，大部分廠家苯甲酸含量均勻，都在合格范圍之內(nèi)，個別企業(yè)苯甲酸含量很低，幾乎為零，也有個別廠家的苯甲酸含量已超出合格范圍。見表4。

4 結(jié)論

苯甲酸本身毒性較大，故針對兒童藥，世界上有許多國家已經(jīng)禁止使用。但本次抽樣的30家企業(yè)57批次樣品均以苯甲酸為防腐劑，從檢測結(jié)果來看，部分企業(yè)苯甲酸用量已經(jīng)超標(biāo)，這對消費者的健康而言具有較大的威脅，尤其小兒清熱止咳口服液是兒童藥，對于免疫系統(tǒng)和排毒代謝能力較弱的兒童來說，過量的防腐劑會對自身健康造成更大的危害[11]。故生產(chǎn)企業(yè)在生產(chǎn)過程中不能只考慮產(chǎn)量、銷量，應(yīng)該把消費者的健康利益放在首位。

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（收稿日期：2020-11-23 編輯：程鵬飛）