淺談包含突變位點(diǎn)的生物序列權(quán)利要求的支持性審查

段珊

摘要：本文從一件復(fù)審案例出發(fā)，介紹了其中包含突變位點(diǎn)的生物序列的權(quán)利要求的支持性審查過程。包括用“包含”限定突變位點(diǎn)，是否為開放式限定的評(píng)判，以及將經(jīng)突變改造、功能活性得以改善的蛋白所包含的突變應(yīng)用于其他同類蛋白的預(yù)期性尺度的評(píng)判。

關(guān)鍵詞：生物序列;支持

前言

我國專利法第 26 條第 4 款規(guī)定，權(quán)利要求應(yīng)當(dāng)以說明書為依據(jù)，即所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員，根據(jù)說明書中的技術(shù)教導(dǎo)及其掌握的本領(lǐng)域中常規(guī)技術(shù)手段能夠得到或概括得出權(quán)利要求所限定的技術(shù)方案，也就是權(quán)利要求需要滿足“支持性”[1]。生物領(lǐng)域本身的復(fù)雜性導(dǎo)致判斷生物序列權(quán)利要求能否得到說明書的支持存在一定的復(fù)雜性和特殊性。以下將結(jié)合一件復(fù)審案例，介紹其支持性的審查過程，以期對(duì)相關(guān)領(lǐng)域的支持性審查提供一定的借鑒和參考。

一、案例介紹

基本案情：

案例涉及高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的rAAV載體、組合物及其使用方法。該案的發(fā)明點(diǎn)在于提供了AAV衣殼蛋白，其包含對(duì)VP3區(qū)中表面暴露之部分氨基酸或其組合的修飾，還提供了相應(yīng)的rAAV病毒體、核酸分子和rAAV載體，與野生型rAAV載體和病毒體相比，本案的rAAV載體和病毒體具有提高的轉(zhuǎn)導(dǎo)多種目的細(xì)胞、組織和器官的效率。

前審階段以權(quán)利要求1-18不符合專利法第26條第4款的規(guī)定為由駁回了本申請(qǐng)，駁回針對(duì)的權(quán)利要求1如下：

1. 一種經(jīng)修飾的AAV衣殼蛋白：

（a）其中所述經(jīng)修飾的AAV衣殼蛋白為經(jīng)修飾的AAV2衣殼蛋白，其包含對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO：2的野生型AAV2衣殼蛋白之K490、K527、K549或K556位置上的谷氨酸（E）氨基酸殘基;

（b）其中所述經(jīng)修飾的AAV衣殼蛋白為經(jīng)修飾的AAV2衣殼蛋白，其包含對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO：2的野生型AAV2衣殼蛋白之K532位置上的精氨酸（R）氨基酸殘基;

（c）其中所述經(jīng)修飾的AAV衣殼蛋白為經(jīng)修飾的AAV2衣殼蛋白，其包含對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO：2的野生型AAV2衣殼蛋白之K544和K556位置上的谷氨酸（E）氨基酸殘基;或

（d）其中所述經(jīng)修飾的AAV衣殼蛋白為經(jīng)修飾的AAV8衣殼蛋白，其包含對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO：8的野生型AAV8衣殼蛋白之K547或K569位置上的谷氨酸（E）氨基酸殘基;并且

其中包含所述經(jīng)修飾的AAV衣殼蛋白的載體的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率高于對(duì)應(yīng)的未經(jīng)修飾的野生型AAV載體。

駁回決定主要認(rèn)為本申請(qǐng)未證明對(duì)于任意的AAV2或AAV8，只需包含所列舉的任意單點(diǎn)突變，均可獲得使包含所述經(jīng)修飾的AAV衣殼蛋白載體的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率高于野生型AAV載體的效果。僅能認(rèn)可SEQ ID NO：2的野生型AAV2衣殼蛋白之K527E、K532R、K490E、K549E或K556E;SEQ ID NO：8的野生型AAV8衣殼蛋白之K547E、K569E的單點(diǎn)突變，或SEQ ID NO：2的野生型AAV2衣殼蛋白之K544/K556E的雙點(diǎn)突變所獲得的AVV衣殼蛋白能夠得到說明書的支持?；谏鲜隼碛烧J(rèn)為權(quán)利要求1得不到說明書的支持。

申請(qǐng)人提出了復(fù)審請(qǐng)求，認(rèn)為對(duì)于每一條要求保護(hù)的經(jīng)修飾的AAV衣殼蛋白，權(quán)利要求均限定了突變的賴氨酸位點(diǎn)以及相應(yīng)的突變成的氨基酸，對(duì)于所限定的突變信息說明書記載了包含這些位點(diǎn)的突變蛋白及其改善的活性。根據(jù)同類蛋白結(jié)構(gòu)、活性上的相似性，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以合理預(yù)期權(quán)利要求1所述經(jīng)突變的AAV衣殼蛋白會(huì)具有相比未突變時(shí)的相應(yīng)蛋白改善的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。認(rèn)為權(quán)利要求1可以得到說明書的支持。

復(fù)審合議組則認(rèn)為權(quán)利要求1中“包含”屬于開放式限定，意味著除權(quán)利要求中所限定的對(duì)應(yīng)位置的氨基酸殘基外，AAV2衣殼蛋白上其他位置的氨基酸殘基是不確定的。作為AAV病毒包裝所必需的結(jié)構(gòu)蛋白衣殼蛋白，維持特定的結(jié)構(gòu)功能域?qū)τ谄湔９δ艿陌l(fā)揮是重要的。本申請(qǐng)說明書并未表明任意序列的AAV2衣殼蛋白與權(quán)利要求所限定的這些單突變或雙突變的組合仍能發(fā)揮與本申請(qǐng)SEQ ID NO：2制備的突變蛋白同樣的效果。本領(lǐng)域技術(shù)人員難以預(yù)料不同突變位點(diǎn)的組合會(huì)導(dǎo)致多肽的空間結(jié)構(gòu)發(fā)生怎樣的變化，以及會(huì)對(duì)衣殼蛋白行使正常的病毒包裝功能產(chǎn)生怎樣的影響。另一方面，從眾多序列、功能不確定的多肽中篩選出具有不影響衣殼蛋白結(jié)構(gòu)和病毒包裝的AAV2衣殼蛋白變體序列，進(jìn)一步篩選出轉(zhuǎn)導(dǎo)效率提高的多肽還需要本領(lǐng)域技術(shù)人員付出大量的勞動(dòng)。故權(quán)利要求1得不到說明書的支持。

最終申請(qǐng)人將權(quán)利要求中的修飾蛋白進(jìn)一步限定為本申請(qǐng)實(shí)施例驗(yàn)證的具體蛋白，認(rèn)為修改后的權(quán)利要求可以得到說明書的支持。合議組認(rèn)為所指出的權(quán)利要求得不到說明書支持的缺陷已不存在，撤銷了駁回決定。

結(jié)語

目前，對(duì)于用“包含”或“具有”限定生物序列，通常認(rèn)為其屬于開放式限定，意味著在所述序列的兩端還可以添加任意數(shù)量、種類的氨基酸或核苷酸殘基，認(rèn)為這一限定方式得不到說明書的支持。然而，本案權(quán)利要求1是用“包含”限定氨基酸位點(diǎn)，而非氨基酸序列，故在審查實(shí)踐中，對(duì)上述撰寫方式存在兩種解讀，一種是認(rèn)為“包含”意味著所限定的蛋白中其他位置的氨基酸殘基是不確定的，一種是認(rèn)為“包含”意味著僅包含所限定的具體位點(diǎn)的氨基酸殘基突變，其他位置的氨基酸殘基是確定的。本案駁回決定、前置審查意見和復(fù)審?fù)ㄖ獣J(rèn)為以“包含”的開放式限定其上帶有的突變位點(diǎn)，實(shí)質(zhì)上涵蓋了除實(shí)施例驗(yàn)證的具有相對(duì)于對(duì)應(yīng)野生型AAV載體轉(zhuǎn)導(dǎo)效率提高以外的其他修飾的AAV載體的技術(shù)方案。以上案例可對(duì)判定“包含”限定突變位點(diǎn)的技術(shù)方案能否得到說明書的支持提供一定的借鑒和參考。

此外，對(duì)于多數(shù)經(jīng)突變改造功能活性得以改善的蛋白而言，維持特定的結(jié)構(gòu)功能域?qū)τ谄湔９δ艿陌l(fā)揮是重要的，本領(lǐng)域技術(shù)人員難以預(yù)料不同突變位點(diǎn)的組合會(huì)導(dǎo)致多肽的空間結(jié)構(gòu)發(fā)生怎樣的變化，以及對(duì)蛋白的最終功能會(huì)產(chǎn)生怎樣的影響，在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步篩選出具有改善功能的蛋白還需要本領(lǐng)域技術(shù)人員付出大量的勞動(dòng)，在未對(duì)蛋白的結(jié)構(gòu)信息進(jìn)行清楚限定的情況下不能得到說明書的支持。

參考文獻(xiàn)

[1]中華人民共和國國家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局.專利審查指南[M].北京：知識(shí)產(chǎn)權(quán)出版社，2010.