食用菌種植中污染菌青霉的拮抗菌篩選

曹俊

摘要：隨著人們生活水平的不斷提高，對食用菌的需求不斷增長，食用菌產(chǎn)業(yè)整體規(guī)模迅速擴(kuò)大。但種植食用菌需要必備營養(yǎng)豐富的基質(zhì)，一旦周圍的空間潮濕，病菌容易繁殖。在這種情況下，會導(dǎo)致食用菌的總產(chǎn)能減少，還很有可能沒有利潤。食用菌培養(yǎng)過程中，通過對污染菌-青霉菌的鑒定，同時(shí)強(qiáng)調(diào)防治的重要性，與篩選的滅菌試劑進(jìn)行對比。由防治測驗(yàn)可以得到：選出來的拮抗菌取得了最好的效果。

關(guān)鍵詞：食用菌種植;污染菌青霉;拮抗菌篩選

近年來，我國食用菌產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅速。根據(jù)中國食用菌協(xié)會提供的資料：在1996年我國食用菌商業(yè)生產(chǎn)總量達(dá)到350萬噸，2001年達(dá)到560萬噸，2004年達(dá)到900萬噸左右。在食用菌生產(chǎn)中，由于基質(zhì)中營養(yǎng)成分豐富，空間相對潮濕，容易造成病原菌污染，使食用菌品質(zhì)變差，減產(chǎn)。目前，國內(nèi)外食用菌生產(chǎn)污染防治的主要方法是高溫殺菌和使用殺菌劑（主要是化學(xué)制劑）。化學(xué)制劑一般都含有殘留藥物，這直接影響食用菌的質(zhì)量，帶來了直接的經(jīng)濟(jì)損失。在分析拮抗關(guān)系后，選擇了拮抗細(xì)菌，尋找更合適的污染解決方案。只有這樣，才能提高食用菌產(chǎn)能，探索種植應(yīng)用的新途徑。

1.選取測試原材

通過篩選出受污染的菌體，并從土壤中分離20株含有放線菌的菌株。選取了香菇、杏鮑菇及金針菇特有的菌袋，選擇農(nóng)貿(mào)市場購買的甲醛、阿維菌素和百菌清作為消毒劑。培養(yǎng)基設(shè)置為PDA特定規(guī)格并用于測試。

2.解析篩選流程

2.1選擇拮抗性抗菌種

利用平板進(jìn)行稀釋，選擇單菌落進(jìn)行培養(yǎng)，便于后續(xù)的鑒定。存活的菌株被調(diào)整為斜面，設(shè)置直接堆砌，篩選和辨別了周圍中所設(shè)置的抑菌環(huán)境。調(diào)制各種具有污染性質(zhì)特性的懸浮液，將其均勻鋪放在平板之上，把各種菌類均勻添加到平板，并在恒溫下繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)。隨時(shí)檢查標(biāo)記的抑菌區(qū)，選擇合適的抑菌菌株，通過平板培養(yǎng)確認(rèn)其中存在的菌落群和聚集的形式，通過顯微鏡分析鑒定各種類型的有害菌株和微觀組織。在經(jīng)過生化試驗(yàn)后，確認(rèn)其形狀并對其進(jìn)行測量，通過色譜分析得到明確的菌株特性。

2.2調(diào)制可用的制劑

篩選10%的調(diào)和混合物制成的液體，置于培養(yǎng)基上，150轉(zhuǎn)每分鐘進(jìn)行震蕩。每隔12小時(shí)采集一次最終的樣品。需要先過濾上側(cè)發(fā)酵液，離心5分鐘后再去除發(fā)酵中所有積累細(xì)菌并儲存上側(cè)澄清液。用青霉菌法將制備的原液均勻填涂到平板之上，打孔而備后使用，然后將其放在一邊，設(shè)置不同的培育時(shí)間，將準(zhǔn)備好的原液上清進(jìn)行分揀，放入一個(gè)小孔中，恒溫地培育。通過觀察受抑制部位的變化來判斷最合理的發(fā)酵時(shí)期。進(jìn)行了發(fā)酵步驟之后，選擇了上清液來比較百菌清、甲醛和阿維菌素抗菌作用效果。制備帶有細(xì)菌的平板，經(jīng)由恒溫進(jìn)行培養(yǎng)。

2.3后續(xù)試驗(yàn)的過程

經(jīng)過60小時(shí)，選擇了發(fā)酵細(xì)菌并在其中添加適量的藥物。針對香菇和其他類別，檢查食用菌袋狀況。對于透明發(fā)酵液體，通過細(xì)分原液在頂部調(diào)節(jié)濃度。從每一批中選取出菌袋，并在其中添加了噴霧液和注射劑。涂抹后，在原先的破壞區(qū)域進(jìn)行粘貼。在菌類培養(yǎng)后期，統(tǒng)計(jì)分析可以獲得病斑或者污染性疾病特殊菌袋的數(shù)量。

3.解析測驗(yàn)結(jié)果

3.1分離污染菌類

在固定板上，可以培養(yǎng)出單個(gè)菌落，它們看起來是圓形的。菌類具有更致密的組織并且通常是感覺氈狀的。表層突出粉末狀態(tài)，其呈青藍(lán)色。通過顯微鏡可得：菌絲體附帶著孢子，使其具有與青霉菌特征一致的掃帚形狀，由此可以看出，這部分被青霉菌污染了。

3.2田間獲取的測驗(yàn)數(shù)值

針對食用菌，細(xì)分具有污染性質(zhì)的不同菌袋，分離成不同濃度。添加制劑后，附著在菌袋上的病斑被適當(dāng)抑制。通過培養(yǎng)食用菌，可以在最短的時(shí)間內(nèi)抑制病斑的快速生長，消除菌類污染。在各種制劑內(nèi)，原液抑菌能力最好，消除了細(xì)菌袋污染，殺菌率超過77%。經(jīng)過一段時(shí)間的測試，發(fā)現(xiàn)百菌清殺菌力最強(qiáng)，其次是甲醛和阿維菌素。在殺菌前期階段，顯示出明確有效的效果，但是難以持久，應(yīng)當(dāng)需要繼續(xù)改進(jìn)。

4.歸納可得結(jié)論

供應(yīng)測試篩選了太多的菌株，消耗工作過大。在這種情況下，通常選擇堆砌的方法。篩選低比例的菌株并填涂在懸浮板上。隨后培育后，再繼續(xù)檢查抑菌圈。留存抑菌這樣的菌株，然后改變初始液體濃度，重新篩選，即可以獲得最佳抗菌株。從定性選擇的角度來看，直接堆砌不失為最優(yōu)途徑。

通過診斷和鑒別的步驟，確認(rèn)出拮抗菌所表達(dá)的抑菌狀態(tài)。過濾發(fā)酵液，去除上清離心細(xì)胞。這樣的測試結(jié)果能夠看到：抗菌作用效果較為顯著，而且其抗菌作用的持續(xù)期非常長。這就是說：菌體的代謝物能夠有效地抑菌，避免了實(shí)際應(yīng)用過程中的一些后續(xù)環(huán)境污染。隨著藥物使用時(shí)間的增加和推移，藥液濃度逐漸增加，60小時(shí)后達(dá)到抗菌作用效果最好。因此，其最佳工作時(shí)間一般應(yīng)該設(shè)置在60小時(shí)左右。

目前，人們對環(huán)境保護(hù)意識與日俱增，需要去探索無公害的新型農(nóng)藥并應(yīng)??用于田間。通過現(xiàn)場試驗(yàn)，選擇拮抗劑以便于確認(rèn)安全性，并且具有優(yōu)異的抗菌效果。在未來的研究中應(yīng)側(cè)重于辨別可從代謝中獲得的產(chǎn)物，探索抗菌機(jī)制，并擴(kuò)大當(dāng)前的現(xiàn)場試驗(yàn)范圍。

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