西黃丸聯合GP方案對晚期乳腺癌患者細胞免疫功能的影響

徐煒 丁少坤 石露露

乳腺癌是來源于乳腺上皮細胞的惡性腫瘤，近年來，其發(fā)病率和病死率居高不下，嚴重危害女性健康[1,2]。乳腺癌根治術是治療該病的重要手段，但多數患者確診時已進展為晚期，手術難度大，且術后復發(fā)率高。因此，臨床常采用手術和化療相結合的綜合治療措施，能夠有效殺滅腫瘤細胞，延長患者生存期。然而，長期使用化療藥物容易產生消化道、骨髓抑制等不良反應，并造成機體免疫功能紊亂[3]。近年來，傳統中醫(yī)藥在惡性腫瘤的輔助治療中發(fā)揮了重要作用[4]。本研究采用西黃丸聯合GP方案治療晚期乳腺癌，觀察聯合治療方案對患者細胞免疫功能的影響，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年1月至2019年4月我院收治的晚期乳腺癌患者110例，隨機分為對照組和觀察組，每組55例。對照組年齡33～64歲，平均年齡(42.75±5.48)歲：病程2～6年，平均(5.00±0.62)年；TNM分期：Ⅲ期30例，Ⅳ期25例。觀察組年齡35～66歲，平均年齡(43.12±5.56)歲：病程2～8年，平均(5.09±0.68)年；TNM分期：Ⅲ期32例，Ⅳ期23例。2組基線資料比較差異無統計學意義，具有可比性(P>0.05)。

1.2 納入與排除標準

1.2.1 納入標準[5,6]：①符合晚期乳腺癌診斷標準，均經臨床癥狀體征檢查、實驗室檢查、病理學檢查確診；②TNM分期均為Ⅲ、Ⅳ期者；③預計生存時間≥3個月；④未發(fā)生遠處組織器官轉移者；⑤近1個月內未接受其他抗腫瘤治療者；⑥患者及家屬均簽署知情同意書。

1.2.2 排除標準：①已發(fā)生遠處轉移者；②預計生存時間<3個月；③合并心腦血管病或肝腎等重要臟器功能不全者；④依從性差者；⑤過敏體質或對使用藥物過敏者。

1.3 治療方法 2組均給予GP化療方案：吉西他濱(山東羅欣藥業(yè))1 000 mg/m2，第1、8天，靜脈滴注；順鉑(云南植物藥業(yè))20 mg/m2，第2～5天，靜脈滴注。觀察組在化療基礎上加用西黃丸(北京同仁堂)治療，3 g/次，2次/d。21 d為1個周期，2組均持續(xù)2個療程。

1.4 觀察指標

1.4.1 標本采集:分別于治療前后采集患者清晨空腹肘靜脈血4 ml，分2管，一管3 000 r/min離心5 min取上清，另一管加入3 ml淋巴細胞分離液，2 000 r/min離心20 min提取外周血單個核細胞(PBMCs)。

1.4.3 細胞因子:采用酶聯免疫吸附實驗(ELISA)測定Th1/Th2細胞因子(TNF-α、IFN-γ、IL-4、IL-6)、Th17/Treg細胞因子(IL-17、IL-22、IL-35、TGF-β)。

1.4.4 轉錄因子:Trizol提取PBMCs總RNA，反轉錄試劑盒合成cDNA第一鏈，于7500型熒光定量PCR儀進行擴增反應，設β-actin為內參照基因，根據擴增曲線計算T-bet、GATA-3、RORγt、Foxp3 mRNA表達量。

2 結果

表1 2 組T 淋巴細胞亞群比較

2.2 2組Th1/Th2細胞因子比較 2組治療前TNF-α、IFN-γ、IL-4、IL-6比較差異無統計學意義(P>0.05)；2組治療后TNF-α、IFN-γ均較治療前升高，IL-4、IL-6均較治療前降低(P<0.05)，且觀察組TNF-α、IFN-γ高于對照組，IL-4、IL-6低于對照組(P<0.05)。見表2。

表2 2 組Th1/Th2 細胞因子比較

2.3 2組Th1/Th2比較 2組治療前Th1、Th2、Th1/Th2比較差異無統計學意義(P>0.05)；2組治療后Th1、Th1/Th2均較治療前升高，Th2均較治療前降低(P<0.05)，且觀察組Th1、Th1/Th2高于對照組，Th2低于對照組(P<0.05)。見表3。

表3 2 組Th1/Th2 比較

2.4 2組Th1/Th2轉錄因子比較 2組治療前T-bet、GATA-3 mRNA表達比較差異無統計學意義(P>0.05)；2組治療后T-bet mRNA表達均較治療前升高，GATA-3 mRNA表達均較治療前降低(P<0.05)，且觀察組T-bet mRNA表達高于對照組，GATA-3 mRNA表達低于對照組(P<0.05)。見表4。

2.5 2組Th17/Treg比較 2組治療前Th17、Treg、Th17/Treg比較差異無統計學意義(P>0.05)；2組治療后Th17、Treg、Th17/Treg均較治療前降低(P<

表4 2 組Th1/Th2 轉錄因子比較

0.05)，且觀察組Th17、Treg、Th17/Treg低于對照組(P<0.05)。見表5。

表5 2 組Th17/Treg 比較

2.6 2組Th17/Treg細胞因子比較 2組治療前IL-17、IL-22、IL-35、TGF-β比較差異無統計學意義(P>0.05)；2組治療后IL-17、IL-22、IL-35、TGF-β均較治療前降低(P<0.05)，且觀察組IL-17、IL-22、IL-35、TGF-β低于對照組(P<0.05)。見表6。

表6 2 組Th17/Treg 細胞因子比較

2.7 2組Th17/Treg轉錄因子比較 2組治療前RORγt、Foxp3 mRNA表達比較差異無統計學意義(P>0.05)；2組治療后RORγt、Foxp3 mRNA表達均較治療前降低(P<0.05)，且觀察組RORγt、Foxp3 mRNA表達低于對照組(P<0.05)。見表7。

表7 2 組Th17/Treg 轉錄因子比較

3 討論

輔助性T細胞Th分為Th1、Th2兩個亞群，前者分泌TNF-α、IFN-γ等細胞因子，能夠促進單核巨噬細胞吞噬、殺滅腫瘤細胞，并抑制腫瘤細胞增殖；后者分泌IL-4、IL-6等細胞因子，能夠抑制抗腫瘤免疫應答，同時促進體液免疫應答[11]。正常情況下，Th1、Th2維持動態(tài)平衡，多種惡性腫瘤患者表現為Th1/Th2免疫紊亂，即Th1向Th2漂移，Th1/Th2比值下降，機體抗腫瘤免疫受抑[12,13]。另外，轉錄因子T-bet、GATA-3在調控Th1、Th2細胞分化過程中發(fā)揮關鍵作用。本研究結果顯示，2組治療前Th1、Th2、Th1/Th2、TNF-α、IFN-γ、IL-4、IL-6、T-bet、GATA-3 mRNA表達比較差異無統計學意義(P>0.05)；2組治療后Th1、Th1/Th2、TNF-α、IFN-γ、T-bet mRNA表達均較治療前升高，Th2、IL-4、IL-6、GATA-3 mRNA表達均較治療前降低(P<0.05)，且觀察組Th1、Th1/Th2、TNF-α、IFN-γ、T-bet mRNA表達高于對照組，Th2、IL-4、IL-6、GATA-3 mRNA表達低于對照組(P<0.05)，說明Th1/Th2漂移在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，西黃丸聯合GP方案治療晚期乳腺癌能夠糾正Th1/Th2免疫紊亂，這可能是其增強細胞免疫功能的機制之一。

Th17、Treg是近年來新發(fā)現的T淋巴細胞亞群成員，前者可通過分泌IL-17、IL-22等細胞因子誘導炎性反應并促進新生血管形成，從而有利于腫瘤增殖、侵襲和轉移；后者能夠分泌IL-35、TGF-β等細胞因子抑制細胞免疫應答，從而介導腫瘤免疫逃逸[14,15]。研究發(fā)現，惡性腫瘤患者Th17、Treg細胞比例、Th17/Treg均較正常人顯著增加，參與調控抗腫瘤免疫應答[16,17]。RORγt、Foxp3分別是誘導Th17、Treg細胞分化的特異性轉錄因子，其表達降低能夠抑制Th17、Treg細胞分化，相反其表達增加能夠促進Th17、Treg細胞分化[18]。本研究結果顯示，2組治療前Th17、Treg、Th17/Treg、IL-17、IL-22、IL-35、TGF-β、RORγt、Foxp3 mRNA表達比較差異無統計學意義(P>0.05)；2組治療后Th17、Treg、Th17/Treg、IL-17、IL-22、IL-35、TGF-β、RORγt、Foxp3 mRNA表達均較治療前降低(P<0.05)，且觀察組Th17、Treg、Th17/Treg、IL-17、IL-22、IL-35、TGF-β、RORγt、Foxp3 mRNA表達低于對照組(P<0.05)，說明Th17、Treg細胞及其分泌的細胞因子在乳腺癌患者中高表達，西黃丸聯合GP方案治療晚期乳腺癌能夠調控Th17、Treg細胞比例及功能，從而改善細胞免疫功能紊亂。

綜上所述，西黃丸聯合GP方案治療晚期乳腺癌能夠有效調控Th1、Th2、Th17、Treg細胞比例及相關細胞因子、轉錄因子表達，從而改善細胞免疫功能，有較大臨床應用價值。