理氣逍遙丸對(duì)功能性消化不良大鼠的治療作用研究

臧玉豹 馬子君

江蘇省新沂市中醫(yī)醫(yī)院藥劑科，江蘇新沂 221400

理氣逍遙丸是新沂中醫(yī)醫(yī)院以辨證論治為基礎(chǔ)的院內(nèi)制劑。本方由柴胡、枳殼、白芍、延胡索、香附、甘草等17味中藥組成。具有疏肝理氣、通絡(luò)的功效[1-4]。有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道柴胡可促進(jìn)腸蠕動(dòng)，進(jìn)而促進(jìn)腸道吸收；枳殼中的揮發(fā)油成分可加速胃運(yùn)動(dòng)，但存在雙向調(diào)節(jié)的情況，香附以及延胡索都具有保護(hù)胃黏膜的作用。芍藥苷是主要的活性成分，此外，甘草還具有雙向調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)的作用[5-8]。經(jīng)過(guò)多年臨床實(shí)踐，發(fā)現(xiàn)該制劑對(duì)氣滯型胃痛有較好的治療效果。功能性消化不良（functional dyspepsia，F(xiàn)D）臨床上非常常見(jiàn)，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量[9]。目前其發(fā)生機(jī)制尚未明確，根據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)記載其機(jī)制可能與胃腸功能或急速紊亂有關(guān)，因此本研究建立FD動(dòng)物模型，分析胃腸運(yùn)動(dòng)功能，調(diào)節(jié)激素分泌，探討理氣逍遙丸治療功能性消化不良的治療效果，以為該制劑增加氣滯型胃脘痛適應(yīng)證奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

理氣逍遙丸中間體（未成丸前制劑中間體），由新沂市中醫(yī)醫(yī)院提供；多潘立酮片（西安楊森制藥有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：蘇藥制字Z04001458，批號(hào)：170306533，規(guī)格：10 mg），wistar大鼠體重為（200±20） g（江蘇艾菱菲生物科技有限公司，SCXK（蘇）-2018-0010）。

1.2 試劑

激素相關(guān)試劑盒（南京建成科技有限公司），水合氯醛（北京化工廠(chǎng)）。

1.3 儀器

酶標(biāo)儀（上海皓莊儀器有限公司，MB16-414）；萬(wàn)分之一電子天平（梅特勒ME204E）；紫外分光光度儀（上海元析儀器有限公司，X6）。

1.4 方法

1.4.1 動(dòng)物分組與給藥 將成年 wistar 大鼠隨機(jī)分為4組，每組16只，空白組、模型組均每日給予生理鹽水，多潘立酮組每日灌胃給予多潘立酮片2.8 mg/kg，理氣逍遙丸組灌胃給予理氣逍遙丸1.25 g/kg。造模后連續(xù)給予各組藥物2周。

1.4.2 模型制備 本研究除空白組外，其余動(dòng)物采用改良復(fù)合病因方法（慢性束縛應(yīng)激+過(guò)度疲勞+飲食失節(jié)+夾尾激怒）復(fù)制FD模型，模型大鼠上午在束縛箱內(nèi)禁閉3 h，下午游泳10 min。第一日飲食正常，二日進(jìn)食，三日給足糧食，反復(fù)進(jìn)行，每日夾尾激怒大鼠30 min，連續(xù)給予21 d。

1.4.3 大鼠常規(guī)形態(tài)觀察 對(duì)大鼠日常形態(tài)（精神狀態(tài)、毛發(fā)、氣味、顏色、進(jìn)食量和體重）等進(jìn)行觀察

1.4.4 胃排空率指標(biāo)測(cè)定 最后一次給藥后2 h，每組大鼠灌胃甲基纖維素酚紅溶液，每只大鼠2 ml，20 min后腹腔注射10%水合氯醛麻醉，固定，打開(kāi)腹腔，胃和賁門(mén)結(jié)扎，沿胃大彎切開(kāi)，用蒸餾水沖洗胃內(nèi)容物，將胃容積定容在20 ml容積瓶中，然后與0.5 mol/l NaOH 溶液混合，將胃置于室溫下1 h，另取5 ml上清液加入三氯乙酸溶液脫蛋白，離心10 min后，在560 nm 處測(cè)定吸光度，加入10%甲基纖維素酚紅溶液2 ml，依次加入NaOH溶液20 ml，再次加入三氯乙酸溶液（20%）4 ml制備成標(biāo)準(zhǔn)溶液。標(biāo)準(zhǔn)苯酚紅a的吸光度在560 nm處測(cè)定。計(jì)算胃排空率[（1檢測(cè)酚紅a/標(biāo)準(zhǔn)酚紅a）100%][4]。

1.4.5 相關(guān)激素水平測(cè)定 腹主動(dòng)脈取血5 ml離心，分離血清，采用ELISA試劑盒，依據(jù)廠(chǎng)家說(shuō)明操作，測(cè)定大鼠各組血清中Ghrelin、MTL及VIP指標(biāo)含量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 22.0版統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以（）表示，采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般狀態(tài)觀察

造模期間，自?shī)A尾開(kāi)始，大鼠情緒暴躁，存在尖叫、打架現(xiàn)象。模型組大鼠飲食減少，睡眠和活動(dòng)減少，毛發(fā)糾結(jié)。給藥前多潘立酮組、理氣逍遙丸組大鼠與模型組一般狀態(tài)無(wú)差異，給藥后兩組一般狀態(tài)均不同程度低于空白組，體重與空白組接近，模型組體重最低。

2.2 四組胃消化不良大鼠胃排空率比較

模型組胃排空率明顯低于空白組（P＜0.01），實(shí)驗(yàn)結(jié)果均表明造模成功。理氣逍遙丸組及多潘立酮組的胃排空率顯著高于模型組（P＜0.01），與空白組的胃排空率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。理氣逍遙丸可促進(jìn)胃排空率，并且其能力與多潘立酮組無(wú)異。胃排空率測(cè)定顯示四組雌性與雄性大鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說(shuō)明性別對(duì)胃排空率影響不大，見(jiàn)表1。

表1 四組胃消化不良大鼠胃排空率水平比較（）

表1 四組胃消化不良大鼠胃排空率水平比較（）

注：與空白組比較：*P＜0.01；與模型組比較：#P＜0.01；與雄性組比較：△P＜0.01，△△P＜0.01

組別 雄性 雌性空白組 69.00±2.55 68.02±2.06模型組 38.52±5.82* 35.45±6.28*多潘立酮組 67.57±11.12# 66.25±9.52#理氣逍遙丸組 65.04±9.51# 63.34±8.95#

2.3 四組胃消化不良大鼠血清Ghrelin、MTL及VIP水平比較

模型組血清Ghrelin、MTL水平明顯低于空白組（P＜0.01），血清VIP水平高于空白組（P＜0.01），實(shí)驗(yàn)結(jié)果均表明造模成功。

理氣逍遙丸組、多潘立酮組血清Ghrelin、MTL水平顯著高于模型組，血清VIP水平顯著低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），理氣逍遙丸組與多潘立酮組三項(xiàng)結(jié)果均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。理氣逍遙丸組、多潘立酮組及空白組血清Ghrelin、MTL、VIP水平兩兩比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），結(jié)果表明理氣逍遙丸促進(jìn)血清Ghrelin、MTL的分泌，降低VIP的分泌水平，且其效果與陽(yáng)性對(duì)照組多潘立酮無(wú)異。

雌雄性FD大鼠血清Ghrelin和VIP水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說(shuō)明性別對(duì)血清Ghrelin及VIP分泌影響不大。雌性FD大鼠各組間血MTL水平明顯高于雄性（P＜0.01）。見(jiàn)表2。

表2 四組血清Ghrelin、MTL及VIP水平比較（，ng/L）

表2 四組血清Ghrelin、MTL及VIP水平比較（，ng/L）

注：與空白組比較：*P＜0.01；與模型組比較：#P＜0.01；與雄性組比較：△P＜0.01，△△P＜0.05

組別 血清Ghrelin 血清MTL 血清VIP雄性 雌性 雄性 雌性 雄性 雌性空白組 1355.11±25.56 1335.33±30.25 135.23±12.58 189.63±25.36△ 80.45±3.66 79.42±2.52模型組 682.22±18.23* 689.42±16.25* 69.23±19.25* 110.23±35.26*△ 138.25±2.89* 136.21±3.22*多潘立酮組 1306.25±60.25# 1299.25±55.87# 112.25±32.65# 180.23±35.21#△ 82.23±4.66# 80.15±3.25#理氣逍遙丸組 1323.36±45.23# 1305.26±48.23# 130.23±15.89# 188.89±24.56#△ 78.25±3.84# 81.25±5.45#

3 討論

FD的癥狀來(lái)源于胃、十二指腸，表現(xiàn)為上腹疼痛、腹脹、食欲不振、打嗝、惡心、嘔吐并伴有持續(xù)或反復(fù)的癥狀。傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為屬“胃痛”“痞滿(mǎn)”“呃逆”及“嘔吐”等范疇[10-12]，病位在脾胃，與肝膽功能失調(diào)關(guān)系密切。因此本研究以?shī)A尾激怒法和慢性應(yīng)激法（斷食，斷水）相結(jié)合的方式造模，建立FD模型。

功能性消化不良的治療主要是消除誘因，緩解癥狀，提高患者生活質(zhì)量，遵循綜合治療和個(gè)體化治療的原則，部分患者需要進(jìn)行心理治療。目前中醫(yī)、中藥治療手段取得了良好的療效，提高了患者的生活品質(zhì)，目前已成為治療FD的最為寶貴的醫(yī)療手段[13-15]。

理氣逍遙丸作為我院院內(nèi)制劑，遵循中醫(yī)、中藥傳統(tǒng)治療方法，由柴胡、當(dāng)歸、赤芍、白芍、川芎、王不留行、路路通、香附、枳殼、延胡索、茯苓、絲瓜絡(luò)、青皮、陳皮、合歡皮、炙甘草等17味中藥組方而成，具有疏肝理氣、和絡(luò)調(diào)中之功效[16-18]。

結(jié)果表明，理氣逍遙丸組、多潘立酮組血清Ghrelin、MTL水平顯著高于模型組，血清VIP水平顯著低于模型組，理氣逍遙丸組、多潘立酮組及空白組血清Ghrelin、MTL、VIP水平兩兩比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果表明理氣逍遙丸可促進(jìn)血清Ghrelin、MTL的分泌，降低VIP的分泌水平。理氣逍遙丸能使雌雄性FD大鼠血清Ghrelin、MTL及VIP分泌恢復(fù)到正常水平，在FD大鼠在性別上MTL水平分泌不同，其機(jī)制尚未明確，其他激素水平無(wú)明顯差異。

理氣逍遙丸能在2周內(nèi)有效緩解FD大鼠的癥狀，改善胃功能，其機(jī)制可能與Ghrelin、MTL和VIP的激素分泌水平相關(guān)，對(duì)FD大鼠有一定的治療效果。本研究?jī)H在大鼠實(shí)驗(yàn)中證明理氣逍遙丸可以有效緩解FD大鼠癥狀，但在實(shí)際臨床試驗(yàn)中為測(cè)定人體血清中激素的改善情況，未來(lái)將在人體試驗(yàn)中藥動(dòng)、藥效學(xué)進(jìn)行進(jìn)一步研究。