HPLC法對阿侖膦酸鈉成分的測定

魏麗英,李景欣

(福建省廈門市中醫院,福建 廈門 361000)

阿侖膦酸鈉的英文名為Alendronate[1],作為第三代的雙膦胺類藥物能夠很好的治療骨質疏松、惡性腫瘤等,主要針對于高鈣血癥進行治療。一般來說,阿侖膦酸鈉的分子結構有兩個膦銨基團,十分容易進行電離,在高效液相色譜法上難以進行保留。在結構上會出現無生色團,在檢測時難以使用常規儀器進行檢測。對于阿侖膦酸鈉來說,常見的檢測方式為酸堿定位滴定法、離子交換色譜法等等。隨著社會的高速發展,我國人口老齡化越來越嚴重,患有骨質疏松的人也越來越多,由于骨質結構受到了破壞,降低了骨頭的抗壓性,十分容易出現骨折的疾病[2]。嚴重會造成全身骨折,多發于女性。經過近幾年的不完全統計,50歲以上有1/3的女性患有骨質疏松。阿侖膦酸鈉能夠在一定程度上治療骨質疏松以及防止骨質疏松。

1 阿侖膦酸鈉的藥學成分

阿侖膦酸鈉作為一類骨代謝劑,化學名叫做4-胺基-1-羥基亞丁基。可以根據自身的特點進入到骨質當中,當藥物徹底釋放之后,能夠提高骨細胞的活性,防止骨質疏松的發生。阿侖膦酸鈉是第三代的雙膦胺類藥物,效果比第一代Etidronate藥物和第二代Pamidronate都強[8],在上個世紀末在美國被正式納入骨質疏松治療用藥。該藥主要是由碳、氫、水、鈉、氮和磷所組成,其化學式為C4H12NaNO7P2-3H2O。

2 實驗

阿侖膦酸鈉在合成的過程中主要是將Y-氨基丁酸進行水解,將水解后的產物與亞磷酸進行縮合。早在上個世紀末期,美國學者就開展了阿侖膦酸鈉的合成方法。以Y-氨基丁酸為原料進行合成,包括氯苯法、熔融法、甲磺酸法等等。譬如在氯苯法當中,將氯苯當做溶劑,對Y-氨基丁酸進行水解,將水解后的產物與亞磷酸等進行縮合,從而得到阿侖膦酸鈉。熔融法是美國學者Giorgio Stsibano在上世紀中期所提出的,需要Y-氨基丁酸、亞磷酸進行反應,不要任何的溶劑。因為亞磷酸的熔點與反應溫度相似,可以將亞磷酸進行熔融,隨后在加入一些Y-氨基丁酸,從而得到液態的混合物,最后在加入三氯化磷等磷酰化物,整體呈酸性,在經過一系列的操作,包括過濾、水解等等,就可以得到阿侖膦酸鈉結晶。在這個過程中,反應率需要到70%。我國學者在上世紀末也在此基礎上,對熔融法進行了加工,在得到4-胺基-1-羥基亞丁基之后,調節其中的pH值,從而得到單鈉鹽三水合物。熔融法最突出的特點就是不需要溶劑就可以得到阿侖膦酸鈉,并且在水解之后,就能得到阿侖膦酸鈉的結晶,整體的操作步驟比較簡單,含阿侖膦酸鈉成分較高。唯一的缺點就是不能投入生產,無法提高產能。

2.1 儀器和試藥

儀器：DIONEX液相色譜儀,UVD170U紫外線檢測器。

試藥：阿侖膦酸鈉藥片(石藥集團,規格：10mg,批號007110401),9-基甲基氯甲酸酯進口試劑,將甲醇作為色譜純。

2.2 色譜條件

色譜柱：PLRP-S 100A(4.6mm×250mm,8um)；緩沖鹽(14.7g檸檬酸鈉,7.05g磷酸氫二鈉),在水中進行溶解,調節pH值為8.0,檢測其中的波長,266nm,流速為1.0mL/min。

實驗溶液：選擇阿侖膦酸鈉10mg的細粉,使用稀釋液的過程中,取29.4g的檸檬酸鈉,將其溶解在水中,配置成20μg/mL的溶液,繼續將其過濾。隨后取50mL中含有5mL的硼酸鹽溶液,具體步驟為取硼砂18g,將其加入水中并且稀釋,加入5mL的9-基甲基氯甲酸酯溶液,搖30s左右,并在恒溫條件下放置30min,加入25mL的二氯甲烷,等充分溶解后,就可當做實驗溶液。

對照溶液：需要選取適量的阿侖膦酸鈉對照組,并將其配置成20μg/mL的溶液,使用相同的方法制成5mL的對照品溶液。

2.3 檢測波長

使用對照溶液,通過照分光光度法,在儀器上進行掃描,波長范圍在200～400nm之間,在266nm時,檢測到的紫外線吸收最強,所以選擇266nm作為檢測的波長。

2.4 空白輔料實驗

使用空白輔料來形成空白輔料的溶液,使用實驗溶液和對照溶液在空白輔料上通過色譜條件進行分析,并在DIONEX液相色譜儀上進行分析,對色譜圖進行記錄。詳見圖1,圖2。

圖1 對照品HPLC色譜圖

圖2 試驗品HPLC色譜圖

2.5 精密度測定

對照溶液的濃度為21μg/mL,將藥品放入儀器中,得到的結果是RSD為0.61,精密度要求基本符合。

2.6 樣品含量測定實驗

規格為10g的三種樣品,批號分別為007110201,007110401,007111001；70g三種樣品,批號分別為152110501,152110801,152111001,通過HPLC以及原紫外法對其進行分析,并在國家藥監局頒布的最新標準下進行測定,結果基本一致。

3 討論

高效液相色譜法(HPLC)主要通過高壓系統,將性質不同的溶劑放入固定相的色譜柱當中,并且當溶劑中的各個成分分開,使用檢測器對其進行檢測。在很多行業當中都有所應用,譬如化學、工業、醫學。該方法的具有以下五個特點：①高壓,一般會以流動的液體為載體,在色譜柱當中有較大的阻力,為了保證色譜柱的正常運行,必須對其使用高壓；②高效,對于所測定液體的分離效率較高；③靈敏度較高,通過紫外檢測器能夠分離到0.01mg,具有較高的準確性；④應用的范圍較廣,一般的有機化合物都可以使用高效液相色譜法進行分析；⑤速度較快,相較于傳統的色譜法來說,高效液相色譜法有著更快的載體流速。至少可以節省十分鐘以上的時間。本文通過高效液相色譜法對阿侖膦酸鈉進行分析,阿侖膦酸鈉是一種骨代謝調節劑,與人體骨頭當中的羥磷灰石有著很親密的作用,能夠增加破骨細胞的活性,降低骨轉換率,并且促進骨細胞的吸收。在臨床上主要是用于治療骨質疏松或者防止骨質疏松。在研究中表明,高效液相色譜法對于阿侖膦酸鈉的成分測定有著較高的檢測效率,并且符合我國的基本標準。

綜上所述,高效液相色譜法對于阿侖膦酸鈉有著較高的檢測價值,受到外部因素的影響較少,有一定的臨床價值。