運輸應激對青腳麻雞血液生化指標和無機離子濃度的影響

楊忠明

（長江師范學院現代農業與生物工程學院，重慶 408100）

運輸應激是在運輸途中禁食、限飼、顛簸、摩擦、冷熱等環境變化和心理壓力等應激源的綜合作用下，機體產生本能的適應性和防御性反應[1]。血液生化指標變化可提示存在應激反應及細胞損傷，其原因可能是由于長途運輸中的不良應激導致多種細菌和病毒的混合感染[2]。據相關報道，運輸對驢血液中的多個生化指標具有顯著性影響[3]；4 h 運輸可致大約克和杜×長×大豬血液中肌酸激酶（CK）分別增高373.48%和366.42%[4]；運輸應激對試驗牛的生化指標有明顯改變[5]。目前，對牛、山羊、豬、驢運輸應激后CK、乳酸脫氫酶（LDH）、谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、無機離子、pH 等方面的研究較多，但目前還沒有關于運輸應激對雞的生化指標和無機離子影響的研究。在實際生產中家禽一般采用公路運輸[6]，肉雞宰前運輸時間一般都在2 h 左右[7]。本試驗對比分析了達上市日齡（60 d）和上市體重（2.3～2.5 kg）的青腳麻雞[8]在運輸前后血清CK、LDH、ALT、AST、ALP、無機離子等指標的變化，探討運輸應激與血液生化指標變化的關系，為運輸后正常飼養提供指導依據。

1 材料與方法

1.1 試驗設計 在某大型養雞場中抽取60 只體格健壯、精神正常、體重2.3～2.5 kg、60 日齡的青腳麻雞（公雞），隨機分為4 組。在運輸前0.5 h，測定各試驗組的血液生化指標和無機離子濃度。運輸2 h 后，4 組分別在正常飼養0.5 h 及1、3、5 d 后測定血液生化指標，并與運輸前各組指標和無機離子濃度進行比較。。

1.2 試驗儀器 全自動生化分析儀（美國貝克曼庫爾特AU680），ST16R 臺式高速冷凍離心機Thermo（賽默飛世爾科技有限公司）。

1.3 主要試劑 CK、LDH、ALT、AST、ALP 試劑盒為寧波美康生物科技有限公司產品。

1.4 飼養管理及運輸 運輸前后4 組試驗動物飼料和飼養管理方式不變，試驗日糧參照NRC（2012）家禽營養需要配制，并結合試驗肉雞飼養標準，采用特驅518商品肉雞全價料(營養標準：水分≤14.0 %、粗蛋白質≥16.0 %、粗纖維≤6.0 %、粗灰分≤7.0 %、蛋氨酸0.32～0.90 %、鈣0.6～1.3 %、總磷≥0.55 %。試驗肉雞平養，免疫程序按照常規免疫進行，自由采食和飲水。運輸前試驗雞群禁水禁食，運輸過程中相對濕度75%，溫度21～25℃；裝箱密度為5 只/籠，籠子集中堆放；車速40～60 km/h，運輸時間2 h，約100 km。

1.5 血樣采集與處理 分別在運輸前0.5 h 對60 只試驗青腳麻雞和2 h 運輸結束后飼養0.5 及飼養1、3、5 d組2 次雞翅靜脈采血2 mL，制備血清，-20℃保存，并于24 h 內送檢。

1.6 生化指標及血清無機離子測定 采用全自動生化分析儀檢測CK、LDH、ALT、AST、ALP 指標。采用全自動生化分析儀檢測Na+（焦銻酸鉀比濁法）、K+（四苯硼鈉比濁法）、Cl-（硫氰酸汞比色法）、Ca2+（甲基麝香草酚藍法）、P（鉬藍法）。

1.7 統計分析 采用SPSS 17.0 軟件和Excel 2003 進行One-Way ANOVA 統計分析，結果以平均值±標準差表示。P＜0.01 表示與運輸前0.5 h 差異極顯著，P＜0.05 表示與運輸前0.5 h 差異顯著，P＞0.05 表示與運輸前0.5 h差異不顯著。

2 結果

2.1 運輸應激對青腳麻雞血清生化指標的影響 由表1 可見，與運輸前相比，CK 濃度在運輸后1 d 極顯著升高，在運輸后3 d 顯著升高，而運輸后0.5 h 和運輸后5 d 無顯著差異。與運輸前相比，LDH 在運輸后3 d 顯著升高，運輸后0.5 h 和1、5 d 無顯著差異。運輸后ALT 濃度較運輸前均升高（P＞0.05）。運輸后AST 的濃度與運輸前相比均升高，運輸后0.5 h、運輸后1 d 與運輸前差異極顯著，運輸后3 d 與運輸前差異顯著，運輸后5 d與運輸前無顯著性差異。運輸后ALP 濃度與運輸前相比均降低，運輸后0.5 h、運輸后1 d 和3 d 與運輸前差異極顯著，運輸后5 d 與運輸前無顯著性差異。

表1 運輸應激對青腳麻雞血清生化指標的影響（n=15） U/L

2.2 運輸應激對青腳麻雞血清無機離子的影響 由表2可見，運輸后K+濃度與運輸前相比均降低，運輸后1 d降到最低（P＜0.01），運輸后3 d 較運輸前顯著減少；而運輸后0.5 h 和運輸后5 d 無顯著差異。與運輸前相比，Na+濃度在運輸后0.5 h 升高，運輸后1、3、5 d 均降低，在運輸后3 d 降到最低，與對照組差異顯著，而運輸后0.5 h及1、5 d 無顯著差異。Cl-濃度在運輸后0.5 h 和1、3 d較運輸前均升高，運輸后3 d 升至最高（P＜0.01），運輸后5 d 低于運輸前水平（P＞0.05）。運輸后Ca2+濃度與運輸前相比均降低。運輸后P 濃度較運輸前均降低（P＞0.05）。

3 討 論

3.1 運輸應激對青腳麻雞血清生化指標的影響 血液生化指標是反映動物運輸應激時體內物質代謝和某些組織器官機能狀態變化的一個重要特征[9]。CK 功能與細胞內能量轉換、肌肉收縮、ATP 再生直接相關[10]。血液中CK 活性的升高可在一定程度上反映機體組織受損失以及損傷的程度[11]，其活性顯著升高表明肌細胞的膜系統受損[12]。本試驗與吳學壯等[13]研究結果一致，運輸應激后青腳麻雞血清中的CK 含量顯著升高，原因可能是青腳麻雞在運輸中由于應激源的刺激，導致肌肉損傷和疲勞引起肌細胞的膜系統受損，致使其體內CK含量升高。LDH 在糖代謝中催化丙酮酸向酵解方向產生乳酸[14]。在正常情況下，細胞膜的完整性可以保證LDH 極少透出細胞膜而進入機體組織液[15]；因此，即使有少量組織壞死，也可導致體內血液中LDH 含量上升[16]。本試驗中，運輸應激導致青腳麻雞血清中LDH含量明顯上升，這與王國艮等[17]研究的結論相似，原因可能是青腳麻雞在本次運輸途中，多種細菌和病毒的混合感染對其機體的組織有損傷，導致血清中LDH 含量上升。ALT 主要集中存在于肝臟中，在運輸應激作用下，動物過度緊張，皮膚毛細血管充血，肝臟相對缺血缺氧，肝臟細胞通透性增強，ALT 從肝臟轉移到血液中。劉犇[18]研究發現，運輸應激會使豬ALT 明顯增高，與本試驗結果基本一致。AST 主要存在肝細胞線粒體內，當肝臟發生損傷或者嚴重壞死時，將會引起血液中AST濃度的急劇升高。在運輸后AST 濃度顯著性升高也說明運輸應激對青腳麻雞肝功能影響較大[19]。Mousaie 等[20]研究發現，對山羊進行運輸應激試驗，運輸后血清AST顯著升高，與本試驗結果基本一致。ALP 是反映成骨細胞活性、骨生成狀況和鈣、磷代謝的重要生化指標[21]。王莉梅等[22]研究發現，運輸后安格斯牛血液中ALP 下降顯著，與本研究結果符合。

3.2 運輸應激對青腳麻雞血清無機離子的影響 K+和Na+對維持細胞正常滲透壓和生理功能有著不可替代的作用。2 h 運輸應激導致青腳麻雞高度緊張，呼吸加劇，大量排放CO2。機體為了保持平衡，必將排出血液里Na+、K+，使得機體血漿滲透壓下降，引起皮質醇增加。當機體皮質醇水平增加后，又能加強Na+的重吸收，K+的排出，導致K+明顯下降。孫曉晨[23]研究指出，2 h 運輸使空白對照組血清內K+下降、Na+上升，與本次試驗測定結果一致。在運輸結束后，正常飼養中，由于青腳麻雞體內調節作用，K+和Na+均有一定的波動，但是在運輸結束后5 d 左右恢復到運輸前的正常值。關于Cl-在應激作用下發生變化的報道較少。劉鈾等[24]在維生素E 防治肉雞熱應激機理的初步研究表明，熱應激會導致Cl-減少。本試驗在運輸青腳麻雞試驗后導致Cl-升高，在運輸后1、3 d 與運輸前差異極顯著，其原因可能是天氣太熱，導致動物呼吸速率加快或者乳酸含量升高所致。由于Na+和Cl-是以氯化鈉的形式存在，Na+濃度升高后就要結合Cl-。因此，血清中Na+濃度的升高必然會引起Cl-的增加，所以這種協同性表現在運輸后0.5 h 最為明顯。有關研究證實，血清鈣和血清無機磷都會因為熱應激而下降，而且血清無機磷的下降速度更快[25]。本試驗運輸后0.5 h 試驗雞血清P 下降很快，其原因可能是在運輸過程中溫度偏高所引起。Ca2+下降也可能是氫離子濃度和碳酸根離子濃度明顯下降，導致機體內酸堿失去平衡，動物體有機酸分泌增加，血液pH 降低，Ca2+與有機酸結合，導致血中Ca2+下降。

4 結 論

本研究結果表明，2 h 運輸應激會引起青腳麻雞血液生化指標中的CK、LDH、ALT、AST、ALP 和無機離子K+、Na+、Cl-發生明顯變化；在運輸結束正常飼養5 d 后上述指標恢復至運輸前正常水平，說明運輸后正常飼養5 d 能有效降低運輸應激對雞的影響。