香砂六君子湯對產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌誘導(dǎo)斷奶腹瀉仔豬的腹瀉指數(shù)、生長性能和小腸黏膜發(fā)育的影響

張 翥，王明周，朱 燕，陳紅躍，涂君平，黃 靜，李雪瀅，熊 文，王自力*

（1.西南大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，重慶 400715；2.西南大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，重慶 400715；3.貴州省銅仁市動物疫病預(yù)防與控制中心，貴州銅仁 564300；4.重慶市畜牧推廣總站，重慶 401121）

早期斷奶仔豬受斷奶應(yīng)激及病原微生物侵襲時常發(fā)生腹瀉，從而引起腸道黏膜的機(jī)械性和炎性損傷，引起斷奶仔豬腹瀉的主要病原是產(chǎn)腸毒素大腸桿菌（Enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC），給養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重危害[1]。我國部分規(guī)模化豬場的早期斷奶仔豬腹瀉率高于50%，由此引起的仔豬死亡占總死亡數(shù)的40%[2]，當(dāng)前主要通過調(diào)整飼料營養(yǎng)成分、添加抗生素、加強(qiáng)飼養(yǎng)管理等來控制斷奶仔豬腹瀉。鑒于當(dāng)前我國對抗生素使用的嚴(yán)格管控前提下，中藥添加劑已成為當(dāng)前飼料減抗應(yīng)用的研究熱點(diǎn)之一。研究表明，中藥具有多靶點(diǎn)、多系統(tǒng)調(diào)節(jié)作用，可有效提高豬黏膜免疫機(jī)能乃至全身免疫力，且具有低毒性、低殘留、細(xì)菌耐藥性較少等特點(diǎn)，如可有效提高斷奶腹瀉大鼠的生長性能和機(jī)體免疫能力，促進(jìn)機(jī)體蛋白質(zhì)合成代謝，并降低蛋白質(zhì)分解代謝，有利于促進(jìn)斷奶大鼠的生長發(fā)育等作用[3]。

中獸醫(yī)學(xué)認(rèn)為香砂六君子湯具有健脾化濕、和胃暢中的功效，具有保護(hù)胃黏膜、促進(jìn)胃排空、促進(jìn)消化等功能，可用于治療慢性胃腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎、腹瀉、胃腸功能障礙及功能性消化不良等病證[4]。因此，本試驗研究加味香砂六君子湯對ETEC 誘導(dǎo)的21 日齡斷奶腹瀉仔豬的腹瀉指數(shù)、生產(chǎn)性能及小腸黏膜發(fā)育的影響，為香砂六君子湯治療斷奶仔豬腹瀉、維護(hù)腸道發(fā)育方面的研究和應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試劑 ETEC 菌株（CVCC196）購自中國獸藥監(jiān)察所菌種保藏管理中心。MH 肉湯購自青島高科園海博生物技術(shù)有限公司；中藥黨參、茯苓、炒白術(shù)、木香、砂仁、炙甘草、山楂、神曲、麥芽購自重慶桐君閣大藥房。

1.1.2 中藥提取方法 取香砂六君子湯，即稱取黨參、茯苓、炒白術(shù)、木香、砂仁、炙甘草、山楂、神曲、麥芽共1 000 g，分別按照1:10 和1:8 的比例加水分別煮沸后，分別文火煮沸30 min 后，取2 次濾液合并，經(jīng)過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至1 g 生藥/mL。

1.2 試驗設(shè)計及日糧組成 將體重為（6.4±0.9）kg、21日齡長×大二元雜交健康斷奶仔豬（購自四川天兆畜牧科技有限公司）隨機(jī)分為對照組、腹瀉組和香砂六君子湯組（簡稱中藥組），每組15 頭，每頭豬均在西南大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院實(shí)驗豬場保育舍實(shí)行單籠飼喂。在仔豬斷奶第2 天，腹瀉組和中藥組仔豬經(jīng)口腔灌服1.0×1011CFU/mL ETEC 液5 mL 后，以仔豬出現(xiàn)腹瀉為仔豬斷奶腹瀉模型；對照組仔豬口腔灌服生理鹽水5 mL。試驗豬均飼喂于有漏縫地板的高床上，自由采食及飲水，試驗期10 d。試驗各組仔豬飼糧組成及營養(yǎng)成分見表1。飼糧參考NRC（1998）配制，物理形式為粉料。香砂六君子湯提取液按照3%的生藥重量加入到飼料中飼喂中藥組仔豬，對照組和腹瀉組仔豬飼喂不含抗生素及其他藥物的基礎(chǔ)日糧。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.3 測定指標(biāo)及方法

1.3.1 生長性能 參照文獻(xiàn)方法[5]同時測定各組豬的平均日采食量、平均日增重等指標(biāo)；于每日09:00、15:00 觀察各組豬糞便形狀，參照表2 進(jìn)行評分和計算腹瀉指數(shù)。

表2 腹瀉指數(shù)評分表

1.3.2 小腸絨毛長度、隱窩深度及小腸絨毛與隱窩深度比（V/C） 于試驗第3、6、10 天，各組分別取5 只仔豬，經(jīng)乙醚麻醉后放血處死，剖開仔豬腹腔，結(jié)扎幽門部，剪取十二指腸、空腸和回腸各3 cm 左右，立即放入4%中性甲醛固定24 h 后，制作石蠟切片，蘇木素-伊紅（H-E）染色，采用Olympus 圖像分析系統(tǒng)測量各組試驗仔豬十二指腸、空腸和回腸的絨毛長度、隱窩深度，并計算V/C[6]。每個腸段切片選取4 根最長的絨毛及4 處最深的隱窩進(jìn)行測量，取其平均值進(jìn)行統(tǒng)計。

1.4 統(tǒng)計分析 采用SPSS 13.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析（One-way ANOVA）。結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，P＜0.05 表示差異顯著，P＞0.05 表示差異不顯著。

2 結(jié)果

2.1 香砂六君子湯對ETEC 誘導(dǎo)的斷奶腹瀉仔豬的腹瀉指數(shù)、生長性能的影響 由表3 可知，在試驗1～3、4～6、7～10 d，腹瀉組斷奶仔豬的腹瀉指數(shù)均顯著高于對照組，中藥組仔豬的腹瀉指數(shù)均顯著低于腹瀉組，且與對照組無顯著差異；腹瀉組與對照組仔豬平均日采食量和平均日增重均無顯著差異，中藥組仔豬的平均日增重顯著高于腹瀉組和對照組。

表3 香砂六君子湯對ETEC 誘導(dǎo)斷奶腹瀉仔豬腹瀉指數(shù)及生長性能的影響（n=15）

2.2 香砂六君子湯對ETEC 誘導(dǎo)斷奶腹瀉仔豬腸道絨毛長度、隱窩深度及V/C 值的影響 由表4 可知，在第3天時，腹瀉組仔豬十二指腸絨毛長度顯著低于對照組及中藥組，而十二指腸、空腸隱窩深度顯著高于對照組，且十二指腸、空腸V/C 值顯著低于對照組；中藥組仔豬十二指腸、空腸及回腸隱窩深度均顯著低于腹瀉組，而十二指腸、空腸V/C 值顯著高于腹瀉組且與對照組無顯著差異。

表4 香砂六君子湯對ETEC 誘導(dǎo)斷奶腹瀉仔豬腸道絨毛長度、隱窩深度及V/C 值的影響（n=5）

第6 天時，腹瀉組仔豬十二指腸絨毛長度顯著低于對照組，十二指腸、回腸隱窩深度顯著高于對照組；中藥組仔豬十二指腸、回腸隱窩深度顯著低于腹瀉組，且與對照組無顯著性差異；各組仔豬各小腸段V/C 值均無顯著差異。

第10 天時，腹瀉組仔豬空腸、回腸絨毛長度顯著低于對照組和中藥組，而中藥組與對照組無顯著差異；腹瀉組各腸段隱窩深度均顯著高于對照組，而中藥組仔豬各腸段隱窩深度均顯著低于腹瀉組且與對照組無顯著差異。腹瀉組空腸和回腸V/C 值均顯著低于對照組，而中藥組仔豬十二指腸、空腸和回腸V/C 值均顯著高于腹瀉組。

3 討 論

3.1 香砂六君子湯對ETEC 誘導(dǎo)的斷奶腹瀉仔豬腹瀉指數(shù)、生長性能的影響 斷奶仔豬消化、免疫系統(tǒng)未發(fā)育完全，其對病原菌抵抗力低、對營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收能力弱，同時受斷奶應(yīng)激和環(huán)境改變等因素影響，易感染病原性大腸桿菌引起斷奶腹瀉及斷奶應(yīng)激綜合征等疾病的發(fā)生[7]。本研究表明，給斷奶仔豬灌服ETEC 菌液后，腹瀉組仔豬出現(xiàn)明顯腹瀉，且腹瀉指數(shù)在整個試驗期內(nèi)均顯著高于對照組，且平均日增重下降乃至失重。ETEC 是豬腸道常見病原菌，可引起斷奶仔豬腹瀉及水腫病，可通過菌毛等黏附到小腸上皮細(xì)胞，分泌多種腸毒素引起腸道內(nèi)水、電解質(zhì)平衡失調(diào)、腸道黏膜屏障損傷等，引起斷奶仔豬發(fā)生腹瀉、腸道炎癥及體重下降等[8-9]。

在飼糧中添加香砂六君子湯提取液可減輕ETEC 誘導(dǎo)的斷奶仔豬腹瀉，并有效提高斷奶仔豬平均日增重。香砂六君子湯出自《太平和劑局方》，主要由黨參、白術(shù)、茯苓、甘草、陳皮、半夏、砂仁8 味藥組成，可治療脾胃氣虛、脘腹脹痛，具有保護(hù)胃黏膜、促進(jìn)胃排空和健脾止瀉等作用[10]，同時加味香砂六君子湯可有效治療幽門螺桿菌引起的胃炎，效果良好。因此，香砂六君子湯可有效防治ETEC 誘導(dǎo)的斷奶仔豬腹瀉，減輕腹瀉并能提高生長性能。

3.2 香砂六君子湯對ETEC 誘導(dǎo)斷奶腹瀉仔豬腸道絨毛長度、隱窩深度及V/C 值的影響 腸道是動物消化吸收營養(yǎng)物質(zhì)的主要場所，小腸的腸絨毛長度、隱窩深度及V/C 值是衡量小腸消化吸收功能的重要指標(biāo)[11]。本研究表明，灌服ETEC 后可引起斷奶仔豬的小腸絨毛長度變短，早期以十二指腸最為嚴(yán)重，后期以空腸和回腸絨毛長度變短；同時造成各腸段組織隱窩深度加深，引起V/C 值降低，抑制仔豬腸道的發(fā)育成熟。由于腸絨毛在吸收營養(yǎng)物質(zhì)上發(fā)揮主要作用，通過規(guī)律性擺動排斥有害菌群的定植，當(dāng)腸道受到侵襲或應(yīng)激反應(yīng)時，腸絨毛就會受損變短[12]，而絨毛高度增加可使小腸接觸營養(yǎng)物質(zhì)的面積增大，促進(jìn)小腸對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收及機(jī)體的生長發(fā)育[13]，降低對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收及機(jī)體發(fā)育遲緩。

同時，在飼糧中添加香砂六君子湯提取液可促進(jìn)仔豬十二指腸和空腸腸絨毛生長，并能降低腸道隱窩深度，提高V/C 值，可促進(jìn)斷奶腹瀉仔豬小腸隱窩細(xì)胞的增殖和成熟。由于隱窩細(xì)胞可從底部向絨毛上部遷移、分化形成具有吸收能力的柱狀細(xì)胞，以補(bǔ)充絨毛上皮的正常脫落[14]，隱窩深度反映隱窩細(xì)胞的增殖率和成熟度[15]，且V/C 值下降則表示消化吸收功能下降，反之則消化吸收功能增強(qiáng)、腹瀉率下降[16]。研究表明，香砂六君子湯具有調(diào)節(jié)胃腸功能紊亂、保護(hù)胃黏膜以及健脾止瀉等作用[17]，可有效改善脾虛腹瀉型腸易激綜合征，可改善臨床表現(xiàn)、腸道敏感性，且具有明顯的止瀉作用[18]。因此，在飼料中添加香砂六君子湯提取物可有效改善ETEC 誘導(dǎo)的斷奶仔豬腹瀉表現(xiàn)，并能促進(jìn)其腸道黏膜的發(fā)育，提高斷奶仔豬生長性能。

4 小 結(jié)

本試驗結(jié)果顯示，灌服ETEC 可誘導(dǎo)斷奶仔豬腹瀉，造成仔豬生長性能下降及腸道發(fā)育遲緩；飼糧添加香砂六君子湯可有效降低斷奶腹瀉仔豬腹瀉指數(shù)、提高平均日增重，可促進(jìn)小腸絨毛生長，降低小腸隱窩深度，提高小腸V/C 值，促進(jìn)斷奶腹瀉仔豬小腸黏膜發(fā)育，其促進(jìn)腸道黏膜發(fā)育及對ETEC 的毒力因子是否具有抑制作用等問題有待進(jìn)一步研究。